一种奶粉中三聚氰胺的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种奶粉中三聚氰胺的检测方法，包括：奶粉前处理：称取干燥的奶粉3～5g，置于酸煮洗净的锥形瓶中，加入氨水与乙醇的混合水溶液50ml，用盖子封口后，置于振荡仪上；利用振荡仪进行旋转振荡，快速将上清液移至离心管，离心得到离心液，放入干净的锥形瓶中；取一定的离心液，旋转蒸发，再用pH在4～4.5范围内的缓冲有机溶剂来定容，得到提取液；利用固相萃取柱对提取液进行净化，得到净化液；利用高效液相色谱检测净化液以测定奶粉中的三聚氰胺。本发明专利技术不仅能够提高检测回收率，而且能够减少检测回收率的次数，使得每样只需要检测一次就能达标，彻底解决了国标法中因柱过滤困难而使用洗耳球吹所导致的组分含量损失问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品检测
，具体是一种奶粉中三聚氰胺的检测方法。
技术介绍
三鹿奶粉事件，给食品安全敲响了警钟，对中国乳品行业造成了巨大的打击。在事件发生后，由于缺乏快速有效检测的手段，一度产生了奶农鲜奶无人敢收，只好倒奶杀牛的恶性循环。为解决相关检测问题，我国批准发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）、《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）国家标准和《出口液态乳中三聚氰胺快速测定拉曼光谱法》（SN/T2805-2011）。GB/T22388-2008提供的固相萃取前处理方法，成本高、检测速度慢，难以满足批量检测需要。对于快速检测方法（GB/T22400-2008）而言，前处理所用溶剂乙腈成本较高，操作时需要剧烈震荡6min，时间仍然较长，且实验人员的个体差异、操作规程执行情况以及实验技术能力差异等因素均可能影响检测结果。拉曼光谱法（SN/T2805-2011）所提供的离心前处理方法，需要配置高速离心机设备，操作时间为4min，且前处理所得溶液不澄清，不能用其他方法检测。三聚氰胺快速检测对于原料乳收购质量安全具有重要意义，虽然目前国家已经颁布相应的快速检测标准方法，但其在速度、耗材成本、易于普及等方面仍不理想，因此进一步改进奶粉中三聚氰胺检测方法是目前急需解决的关键技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种奶粉中三聚氰胺的检测方法，不仅能够提高检测回收率，而且能够减少检测回收率的次数。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种奶粉中三聚氰胺的检测方法，包括以下步骤：（1）奶粉前处理，包括以下步骤：11）称取干燥的奶粉3～5g，置于酸煮洗净的锥形瓶中，加入氨水与乙醇的混合水溶液50ml，用盖子封口后，置于振荡仪上；12）利用振荡仪进行旋转振荡，待旋转振荡结束，快速将上清液移至离心管，再放入离心机中离心，得到离心液，放入干净的锥形瓶中，备用；13）取出一定体积的离心液，旋转蒸发掉氨水与乙醇的混合水溶液，再用pH在4～4.5范围内的缓冲有机溶剂来定容，得到提取液；（2）预先依次用2ml甲醇、2ml水对固相萃取小柱进行活化及平衡，再将提取液10ml转移至固相萃取柱中；依次用2ml水、2ml甲醇淋洗，固相萃取小柱抽干至近干后，用5ml氨化甲醇溶液洗脱；整个固相萃取过程流速不超过0.8ml/min；洗脱液于50℃下用氮气吹干，干燥残留物用1ml流动相定容，漩涡混合1min，过0.2μm的有机相微孔滤膜，得到净化液；（3）利用高效液相色谱检测净化液以测定奶粉中的三聚氰胺；其中，高效液相色谱的工作条件为：色谱柱为C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相为离子对试剂缓冲液：甲酸＝85：15，流速为0.5ml/min，柱温为35℃，波长为243nm，进样量为15μL。作为本专利技术进一步的方案：所述的步骤11）中，氨水与乙醇的混合水溶液中，氨水：乙醇：水的体积比为25～28：55～65：12～15。作为本专利技术进一步的方案：所述的步骤11）中，氨水与乙醇的混合水溶液中，氨水：乙醇：水的体积比为25：60：15。作为本专利技术进一步的方案：所述的步骤12）中，旋转振荡参数为：速度120～150r/min，时间15～18min；离心参数为：速度5500～5800r/min，时间5～8min。作为本专利技术进一步的方案：所述的步骤12）中，旋转振荡参数为：速度140r/min，时间16min；离心参数为：速度5600r/min，时间7min。作为本专利技术进一步的方案：所述的步骤13）中，用pH为4.2的2%醋酸溶液的盐缓冲溶液来定容。作为本专利技术进一步的方案：所述的步骤（3）中，三聚氰胺的回收率＝（加标浓度的实际检测结果-空白结果）/理论加标浓度×100%，其中，理论加标浓度指样品未处理前外加至该待测样品的三聚氰胺的含量，加标浓度的实际检测结果指外加至该待测样品的三聚氰胺的含量经样品处理和色谱检测后的结果，空白结果为未外加三聚氰胺的该待测样品中的三聚氰胺的含量的检测结果。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术采用机械振荡、碱性有机化合物进行提取，采用pH在4～4.5范围内的缓冲有机溶剂作为稀释液进行稀释定容，再通过固相萃取柱进行净化，最后利用高效液相色谱检测得到奶粉中的三聚氰胺；该方法不仅能够提高检测回收率，而且能够减少检测回收率的次数，使得每样只需要检测一次就能达标，彻底解决了国标法中因柱过滤困难而使用洗耳球吹所导致的组分含量损失问题。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本专利技术实施例中，一种奶粉中三聚氰胺的检测方法，包括以下步骤：（1）奶粉前处理，包括以下步骤：11）称取干燥的奶粉3～5g，置于酸煮洗净的锥形瓶中，加入氨水与乙醇的混合水溶液（氨水：乙醇：水的体积比为25：60：15）50ml，用盖子封口后，置于振荡仪上；12）利用振荡仪进行旋转振荡，待旋转振荡结束，快速将上清液移至离心管，再放入离心机中离心，得到离心液，放入干净的锥形瓶中，备用；其中，旋转振荡参数为：速度140r/min，时间16min；离心参数为：速度5600r/min，时间7min；13）取出离心液5ml，旋转蒸发掉氨水与乙醇的混合水溶液，再用pH在4～4.5范围内的缓冲有机溶剂，优选pH为4.2的2%醋酸溶液的盐缓冲溶液来定容至5ml，得到提取液；（2）预先依次用2ml甲醇、2ml水对固相萃取小柱进行活化及平衡，再将提取液10ml转移至固相萃取柱中；依次用2ml水、2ml甲醇淋洗，固相萃取小柱抽干至近干后，用5ml氨化甲醇溶液洗脱；整个固相萃取过程流速不超过0.8ml/min；洗脱液于50℃下用氮气吹干，干燥残留物用1ml流动相定容，漩涡混合1min，过0.2μm的有机相微孔滤膜，得到净化液；（3）利用高效液相色谱检测净化液以测定奶粉中的三聚氰胺；其中，高效液相色谱的工作条件为：色谱柱为C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相为离子对试剂缓冲液：甲酸＝85：15，流速为0.5ml/min，柱温为35℃，波长为243nm，进样量为15μL。回收率＝（加标浓度的实际检测结果-空白结果）/理论加标浓度×100%，其中，理论加标浓度指样品未处理前外加至该待测样品的三聚氰胺的含量，加标浓度的实际检测结果指外加至该待测样品的三聚氰胺的含量经样品处理和色谱检测后的结果，空白结果为未外加三聚氰胺的该待测样品中的三聚氰胺的含量的检测结果。利用国标方法、本专利技术方法这两种方法，分别对奶粉（A）、外加三聚氰胺浓度为2ppm的该奶粉（B）、外加三聚氰胺浓度为4ppm的该奶粉（C）进行三聚氰胺浓度检测，计算该奶粉的三聚氰胺检测回收率，每组重复三次，检测结果取三次平均值，每次取2个平行样。对比结果如表1所示。表1两种方法的试验结果比较由表1可以看出：一、本专利技术方法能够提高检测回收率，具体可以将国标法的70%左右的回收率提高到本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种奶粉中三聚氰胺的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）奶粉前处理，包括以下步骤：11）称取干燥的奶粉3～5g，置于酸煮洗净的锥形瓶中，加入氨水与乙醇的混合水溶液50ml，用盖子封口后，置于振荡仪上；12）利用振荡仪进行旋转振荡，待旋转振荡结束，快速将上清液移至离心管，再放入离心机中离心，得到离心液，放入干净的锥形瓶中，备用；13）取出一定体积的离心液，旋转蒸发掉氨水与乙醇的混合水溶液，再用pH在4～4.5范围内的缓冲有机溶剂来定容，得到提取液；（2）预先依次用2ml甲醇、2ml水对固相萃取小柱进行活化及平衡，再将提取液10ml转移至固相萃取柱中；依次用2ml水、2ml甲醇淋洗，固相萃取小柱抽干至近干后，用5ml氨化甲醇溶液洗脱；整个固相萃取过程流速不超过0.8ml/min；洗脱液于50℃下用氮气吹干，干燥残留物用1ml流动相定容，漩涡混合1min，过0.2μm的有机相微孔滤膜，得到净化液；（3）利用高效液相色谱检测净化液以测定奶粉中的三聚氰胺；其中，高效液相色谱的工作条件为：色谱柱为C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相为离子对试剂缓冲液：甲酸＝85：15，流速为0.5ml/min，柱温为35℃，波长为243nm，进样量为15μL。...

【技术特征摘要】
1.一种奶粉中三聚氰胺的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）奶粉前处理，包括以下步骤：11）称取干燥的奶粉3～5g，置于酸煮洗净的锥形瓶中，加入氨水与乙醇的混合水溶液50ml，用盖子封口后，置于振荡仪上；12）利用振荡仪进行旋转振荡，待旋转振荡结束，快速将上清液移至离心管，再放入离心机中离心，得到离心液，放入干净的锥形瓶中，备用；13）取出一定体积的离心液，旋转蒸发掉氨水与乙醇的混合水溶液，再用pH在4～4.5范围内的缓冲有机溶剂来定容，得到提取液；（2）预先依次用2ml甲醇、2ml水对固相萃取小柱进行活化及平衡，再将提取液10ml转移至固相萃取柱中；依次用2ml水、2ml甲醇淋洗，固相萃取小柱抽干至近干后，用5ml氨化甲醇溶液洗脱；整个固相萃取过程流速不超过0.8ml/min；洗脱液于50℃下用氮气吹干，干燥残留物用1ml流动相定容，漩涡混合1min，过0.2μm的有机相微孔滤膜，得到净化液；（3）利用高效液相色谱检测净化液以测定奶粉中的三聚氰胺；其中，高效液相色谱的工作条件为：色谱柱为C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相为离子对试剂缓冲液：甲酸＝85：15，流速为0.5ml/min，柱温为35℃，波长为243nm，进样量为15μL。2.根据权利要求1所述的奶粉中三聚氰胺的检测方法，其特征在于，所述的步骤11）中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：周朱晨，张根义，胡彬，张进，吴念绮，
申请(专利权)人：百奥森江苏食品安全科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32