一种乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。所述乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，包括以下步骤：将DHA和EPA标准曲线进行制备，然后将乳制品进行预处理，加入磁力拌子，加入氢氧化钾甲醇溶液，开启磁力搅拌器，并加热使反应液保持60℃，搅拌回流后冷却至室温，从冷凝管上加入三氟化硼甲醇，加热搅拌回流后冷却，从冷凝管上部加入正己烷继续加热回流，冷至室温移去冷凝管，加入饱和氯化钠水溶液，摇动。分出正己烷溶液于试管，进气相色谱仪进行定量计算。本发明专利技术所述检测方法，从乳制品中提取出脂肪经氢氧化钾、三氟化硼/甲醇皂化和酯化后进行有效分离，并进行定量，利用本方法不仅分离完全而且定量准确。
【技术实现步骤摘要】
乳制品中DHA和EPA含量的检测方法
本专利技术涉及一种乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。
技术介绍
研究表明，富含于深海鱼油中的脂肪酸DHA (顺式-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸)和EPA (顺式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸)具有调节免疫，增强记忆，改善神经传导的功能和预防中风、心肌梗塞和动脉硬化的作用，并且是婴幼儿大脑发育所必须的物质。因此，在市场上能发现很多乳制品包括婴幼儿奶粉中都不同程度地添加了 DHA和EPA。但由于添加量少，不易检测等特点，致使目前市场上的众多产品对添加了 DHA和EPA的量参差不齐。 因此研究一种准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低适用于乳制品中DHA和EPA含量的检测方法很有必要。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低适用于乳制品中DHA和EPA含量的检测方法。 所述的乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，包括以下步骤:先进行DHA和EPA标准曲线进行制备与绘制，然后将乳制品进行预处理，再加入磁力拌子，加入4mL0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液，上部连接回流冷凝管，并固定于磁力搅拌器上，开启磁力搅拌器，并加热使反应液保持60°C，搅拌回流约15min，冷却至室温，从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加热、搅拌，回流约5min，冷却，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续加热回流5min，冷至室温，移去冷凝管，加入少量饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟。分出上层正己烷溶液于试管中，取I μ L进气相色谱仪，使用内标法进行定量计算。 优选的，本专利技术所述的乳制品预处理方法为:称取5g奶粉于10mL具塞量筒中，力口25mL水，摇动分散均匀，加入2mL25%氨水，混匀后放入65°C水浴锅中加热15min后取出冷却，转移至250mL分液漏斗中，移取1ml乙醇倒入分液漏斗，剧烈震摇lmin，移取25mL乙醚倒入分液漏斗，剧烈震摇lmin，然后移取25mL石油醚倒入分液漏斗，并剧烈震摇lmin，静置使之分层，有机层转入150mL圆底烧瓶中，水层再分别用1ml乙醇，25mL乙醚和25mL石油醚萃取一次，合并有机层于圆底烧瓶中，移取2mL内标溶液于150mL圆底烧瓶中，最后在80°C水浴锅中蒸去溶剂。 更优选的，本专利技术所述的内标溶液为三苯乙烯溶液，配制方法为称取0.2g三苯乙烯，用正己烷溶解后转移至10mL容量瓶中，并定容。 进一步优选的，本专利技术所述的色谱条件为色谱柱:HP-23 30mX0.53mmX0.50 μ m ；色谱柱温度:起始温度70°C，保持lmin，然后以20°C /min的速率升至180°C，并继续以30C /min的速率升至220°C，最后在220°C保持1min ;进样口温度:250°C ；FID检测器温度:260°C ;柱流量:2ml/min ;柱流量+尾吹流量=50ml/min ;进样方式:分流，分流比为10:1 ；载气:N2 ;燃烧气 H2:40ml/min ;助燃气 Air:400ml/min。 本专利技术所述的检测方法，(I)DHA标准曲线的制备:以Ae/A@为横坐标X，以n^/m# (11^、11^均以1^为单位)为纵坐标Y，绘制标准曲线得出线性回归方程为Y=0.00784+1.19498X，R=0.99972。结果表明:在实验浓度范围内m标/m内与A标/A内呈良好的线性关系。(2)EPA标准曲线的制备:以A；g/A内为横坐标X,以111标/11^ (m标、m内均以mg为单位)为纵坐标Y，绘制标准曲线得出线性回归方程为Y=0.00272+1.19104X，R=0.99983。结果表明:在实验浓度范围内mg/n^与Α#/Α@呈良好的线性关系。 本专利技术所述的检测方法，乳制品中DHA和EPA含量的计算公式为: X=(m样/m内)Xm内X 100/(100Xm) (% )，其中，m样/m内由A标/A内通过标准曲线方程算得，m为样品质量(g), 2ml内标溶液中三苯乙烯的量(mg)本专利技术所述的检测方法中，从乳制品中提取出的脂肪经氢氧化钾、三氟化硼/甲醇皂化和酯化后用气相色谱脂肪酸专用柱进行有效分离，并用氢火焰化检测器检测和使用内标法进行定量，利用本方法不仅分离完全，而且定量准确。 【具体实施方式】 实施例一:(I)内标溶液配制:称取0.2g三苯乙烯，用正己烷溶解后转移至10mL容量瓶中，并定容。 (2)标准溶液配制:配制DHA标准溶液的浓度为lmg/mL，EPA标准溶液的浓度为 0.5mg/mL。 (3)DHA标准曲线的制备:分别从DHA标准溶液中移取0.5mL，lmL，2mL，3mL，4mL于150mL圆底烧瓶中，加入2mL内标溶液并在80°C水浴锅中蒸去溶剂。从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加热、搅拌，回流约5min，冷却，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续加热回流5min，冷至室温，移去冷凝管，加入少量饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟。分出上层正己烧溶液于试管中，取I μ L进气相色谱仪。以A标/A内为横坐标X,以m标/mrt (m标、m内均以mg为单位)为纵坐标Y，绘制标准曲线得出线性回归方程为Y=0.00784+1.19498X，R=0.99972。结果表明:在实验浓度范围内mg/n^与Α#/Α@呈良好的线性关系。 (4)EPA标准曲线的制备:分别从EPA标准溶液中移取0.5mL, lmL, 2mL, 3mL, 4mL于150mL圆底烧瓶中，加入2mL内标溶液并在80°C水浴锅中蒸去溶剂。从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加热、搅拌，回流约5min，冷却，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续加热回流5min，冷至室温，移去冷凝管，加入少量饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟。分出上层正己烧溶液于试管中，取I μ L进气相色谱仪。以A标/A内为横坐标X,以m标/mrt (m标、m内均以mg为单位)为纵坐标Y，绘制标准曲线得出线性回归方程为Y=0.00272+1.19104X，R=0.99983。结果表明:在实验浓度范围内mg/n^与Α#/Α@呈良好的线性关系。 (5)样品预处理:称取5g奶粉于10mL具塞量筒中，加25mL水，摇动分散均匀，力口入2mL25%氨水，混匀后放入65°C水浴锅中加热15min后取出冷却，转移至250mL分液漏斗中，移取1ml乙醇倒入分液漏斗，剧烈震摇lmin，移取25mL乙醚倒入分液漏斗，剧烈震摇lmin，然后移取25mL石油醚倒入分液漏斗，并剧烈震摇lmin，静置使之分层，有机层转入150mL圆底烧瓶中，水层再分别用1ml乙醇，25mL乙醚和25mL石油醚萃取一次，合并有机层于圆底烧瓶中，移取2mL内标溶液于150mL圆底烧瓶中，最后在80°C水浴锅中蒸去溶剂。 (6)计算:乳制品中DHA和EPA含量的计算公式为: X=(m样/m内)Xm内X 100/(100Xm) (% )，其中，m样/m内由A标/A内通过标准曲线方程算得，m为样品质量(g), m内为2ml内标溶液中三苯乙烯的量(mg)。 实施例二:精密度试验、重复性试验和回收率试验(I)精密度试验:样品处理后连续本文档来自技高网...
【技术保护点】
乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，包括以下步骤：先进行DHA和EPA标准曲线进行制备与绘制，然后将乳制品进行预处理，再加入磁力拌子，加入4mL0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液，上部连接回流冷凝管，并固定于磁力搅拌器上，开启磁力搅拌器，并加热使反应液保持60℃，搅拌回流约15min，冷却至室温，从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加热、搅拌，回流约5min，冷却，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续加热回流5min，冷至室温，移去冷凝管，加入少量饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟；分出上层正己烷溶液于试管中，取1μL进气相色谱仪，使用内标法进行定量计算。
【技术特征摘要】
1.乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，包括以下步骤: 先进行DHA和EPA标准曲线进行制备与绘制，然后将乳制品进行预处理，再加入磁力拌子，加入4mL0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液，上部连接回流冷凝管，并固定于磁力搅拌器上，开启磁力搅拌器，并加热使反应液保持60°C，搅拌回流约15min，冷却至室温，从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加热、搅拌，回流约5min，冷却，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续加热回流5min，冷至室温，移去冷凝管,加入少量饱和氯化钠水溶液,摇动数分钟； 分出上层正己烷溶液于试管中，取I μ L进气相色谱仪，使用内标法进行定量计算。2.如权利要求1所述的乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，其特征在于所述的乳制品预处理方法为:称取5g奶粉于10mL具塞量筒中，加25mL水，摇动分散均匀，加入2mL25 %氨水，混匀后放入65 V水浴锅中加热15min后取出冷却，转移至250mL分液漏斗中，移取1ml乙醇倒入分液漏斗，剧烈震摇lmin，移取25mL乙醚倒入分液漏斗，剧烈震摇Imin,然后移取25mL石油醚倒入分液漏斗，并...
【专利技术属性】
技术研发人员：李勇，刘文斌，
申请(专利权)人：西安米亿生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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