一种D-二聚体免疫荧光定量试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种D‑二聚体免疫荧光定量试纸条及其制备方法。相对于普通储存液制备的试纸条，本发明专利技术所制备的D‑二聚体免疫荧光定量试纸条存储稳定性更佳，精密度更好，检测样品的出峰具有更高的信号和较平整的基线，准确度较高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫学检测领域，更具体地涉及一种D-二聚体免疫荧光定量试纸条及其制备方法。
技术介绍
D-二聚体是血液中的纤维蛋白原受凝血酶等作用而凝固形成的聚合物，是交联纤维蛋白的特异性降解产物。在正常生理状态下，机体保持着凝血与纤溶动态平衡，以保证纤维蛋白及时形成和清除。当这一平衡遭到破坏，血管内凝血倾向增强，纤维蛋白聚集，纤维蛋白降解产物增加，D-二聚体含量增加。因此，D-二聚体水平的升高反映体内凝血和纤溶系统的双重激活，可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物之一，用于多种疾病的病程检测，如深静脉血栓、弥漫性血管内凝血、心肌梗死、重症肝炎、肺栓塞等。目前，D-二聚体检测方法主要有：乳胶凝集法、酶联免疫法、荧光抗体检测法、金标法和胶乳免疫比浊法。乳胶凝集法只能定性检测，不能测定血浆中D-二聚体含量的变化；酶联免疫法操作容易受到酶活性变化的影响，结果不太准确；金标法容易受类风湿因子、肝素及血脂的影响，结果准确性差；胶乳比浊法反应特异性不好，所需试剂比较复杂。荧光抗体检测技术能够实现样品中D-二聚体的定量检测，且具有检测仪器精巧轻便、操作简单迅速、结果精准等优点，因此，制备和生产D-二聚体免疫荧光定量试纸条非常有市场价值。然而，要实现D-二聚体免疫荧光定量试纸条的制备和长期保存，储存液是关键之一。储存液的好坏关乎试纸条的准确度和保存期，因此，通过改进储存液，开发高准确度的D-二聚体免疫荧光定量试纸条非常有现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种D-二聚体免疫荧光定量试纸条及其制备方法。本专利技术所采取的技术方案是：一种D-二聚体免疫荧光定量试纸条，包括吸水垫、硝酸纤维素膜、质控线、检测线、结合垫、样品垫、PVC底板(7)；其中，结合垫上喷有D-二聚体一抗-荧光微球偶联物；所述的检测线为D-二聚体一抗，质控线为D-二聚体二抗，且检测线和质控线依次固定于硝酸纤维素膜上；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次搭接并承载于PVC底板；D-二聚体一抗-荧光微球偶联物使用储存液进行浸渍处理、保存和稀释；所述的储存液配方为：PB的质量浓度为15～25mM、BSA的百分浓度为1.6％～2％、Tween-80的百分浓度为0.4％～0.6％、葡萄糖的百分浓度为0.4％～0.6％、甘氨酸的百分浓度为1.5％～2.5％、PEG4000的百分浓度为0.8％～1.2％、PEG20000的百分浓度为1％～2％、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01％～0.1％。作为优选的储存液配方，PB的质量浓度为20mM、BSA的百分浓度为1.8％、Tween-80的百分浓度为0.5％、葡萄糖的百分浓度为0.5％、甘氨酸的百分浓度为2％、PEG4000的百分浓度为1％、PEG20000的百分浓度为1.5％、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.03％。试纸条加样层析后，检测质控线和检测线的荧光信号强度，并以质控线荧光信号强度校正检测线的荧光信号强度，实现D-二聚体的定量检测。一种D-二聚体免疫荧光定量试纸条的制备方法，包括如下步骤：(1)将荧光微球活化后与D-二聚体一抗偶联，偶联完毕后加入封闭剂，保存于储存液中；(2)将D-二聚体一抗-荧光微球偶联物用储存液稀释后，喷于结合垫上，干燥保存；(3)将D-二聚体一抗固定于硝酸纤维素膜上作为检测线，将D-二聚体二抗固定于硝酸纤维素膜上作为质控线；(4)在PVC底板上依次搭接地粘贴：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，并剪切成适当宽度即成为D-二聚体免疫荧光定量试纸条，其中，样品垫材质为玻璃纤维素膜或滤血膜，结合垫材质为玻璃纤维素膜；上述的储存液配方为：PB的质量浓度为15～25mM、BSA的百分浓度为1.6％～2％、Tween-80的百分浓度为0.4％～0.6％、葡萄糖的百分浓度为0.4％～0.6％、甘氨酸的百分浓度为1.5％～2.5％、PEG4000的百分浓度为0.8％～1.2％、PEG20000的百分浓度为1％～2％、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01％～0.1％。作为优选的储存液配方，PB的质量浓度为20mM、BSA的百分浓度为1.8％、Tween-80的百分浓度为0.5％、葡萄糖的百分浓度为0.5％、甘氨酸的百分浓度为2％、PEG4000的百分浓度为1％、PEG20000的百分浓度为1.5％、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.03％。D-二聚体一抗-荧光微球偶联物在储存液中的保存浓度为0.1～10mg/mL。本专利技术的有益效果是：相对于普通储存液制备的试纸条，本专利技术所制备的D-二聚体免疫荧光定量试纸条存储稳定性更佳，精密度更好，检测样品的出峰具有更高的信号和较平整的基线，准确度较高。附图说明图1：优选的储存液制备的D-二聚体免疫荧光定量试纸条检测希森美康D-二聚体标准曲线；图2：优选的储存液制备的D-二聚体免疫荧光定量试纸条检测D-二聚体重组抗原的检测值与理论值散点图；图3：不同储存液制备的试纸条检测含不同浓度D-二聚体的病人血清样本的荧光检测折线图；图4：不同储存液制备的试纸条检测含D-二聚体的病人血清样本检测值与希森美康-CA7000检测值的相关图；具体实施方式实施例1D-二聚体免疫荧光定量试纸条的制备过程如下：(1)优选储存液的制备：PB的质量浓度为20mM、BSA的百分浓度为1.8％、Tween-80的百分浓度为0.5％、葡萄糖的百分浓度为0.5％、甘氨酸的百分浓度为2％、PEG4000的百分浓度为1％、PEG20000的百分浓度为1.5％、Proclin300百分浓度为0.03％，按上述配方配制混匀后过滤除菌，制得储存液；(2)样品垫的制备：用样品垫处理液浸泡玻璃纤维膜10min，置于干燥间37℃湿度30％，烘干3h，制得样品垫，备用；(3)结合垫的制备：用结合垫处理液浸泡玻璃纤维素膜10min，浸泡处理后，置于干燥间37℃湿度30％，烘干3h，制得结合垫，备用；(4)将1mg的200nm聚苯乙烯荧光微球先后加入20μL的0.5mg/mL的EDC和0.5mg/mL的NHS，在活化缓冲液37℃活化1h；(5)加入0.1mgD-二聚体一抗(鼠源D-二聚体单克隆抗体)，在200μL偶联缓冲液中与荧光微球偶联，完毕后加入封闭液20μL，制得D-二聚体一抗-荧光微球偶联物，18000rpm离心15min后，加入200μL储存液，制得D-二聚体一抗-荧光微球偶联物浓度为5mg/mL，2～8℃保存；(6)用储存液将D-二聚体一抗-荧光微球偶联物稀释到0.5mg/mL，用喷金划膜仪喷于经结合垫处理液处理后的结合垫上，用鼓风干燥箱干燥7h。铝箔袋密封置于20-25℃、湿度约30％的条件下存放备用；(7)将1mg/mLD-二聚体二抗(羊抗鼠IgG多克隆抗体)和1mg/mLD-二聚体一抗分别用包被液包被，以条带状1.0mm用喷金划膜仪分别固定于硝酸纤维素膜上分别作为质控线和检测线；(8)在PVC底板上依次搭接地粘贴：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸，并剪切成宽度4.1mm即成为D-二聚体免疫荧光定量试纸条；(9)将切好的试纸条装卡，过压壳机，准备检测；(10)样品垫处理液：100mMPBS、1％Triton、0.75％BSA、0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种D‑二聚体免疫荧光定量试纸条，包括吸水垫、硝酸纤维素膜、质控线、检测线、结合垫、样品垫、PVC底板；其中，所述的结合垫上喷有D‑二聚体一抗‑荧光微球偶联物；所述的检测线为D‑二聚体一抗，所述的质控线为D‑二聚体二抗，且检测线和质控线依次固定于硝酸纤维素膜上；所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次搭接并承载于PVC底板；其特征在于：D‑二聚体一抗‑荧光微球偶联物使用储存液进行浸渍处理、保存和稀释；所述的储存液配方为：PB的质量浓度为15～25mM、BSA的百分浓度为1.6%～2%、Tween‑80的百分浓度为0.4%～0.6%、葡萄糖的百分浓度为0.4%～0.6%、甘氨酸的百分浓度为1.5%～2.5%、PEG4000的百分浓度为0.8%～1.2%、PEG20000的百分浓度为1%～2%、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01%～0.1%。

【技术特征摘要】
1.一种D-二聚体免疫荧光定量试纸条，包括吸水垫、硝酸纤维素膜、质控线、检测线、结合垫、样品垫、PVC底板；其中，所述的结合垫上喷有D-二聚体一抗-荧光微球偶联物；所述的检测线为D-二聚体一抗，所述的质控线为D-二聚体二抗，且检测线和质控线依次固定于硝酸纤维素膜上；所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次搭接并承载于PVC底板；其特征在于：D-二聚体一抗-荧光微球偶联物使用储存液进行浸渍处理、保存和稀释；所述的储存液配方为：PB的质量浓度为15～25mM、BSA的百分浓度为1.6%～2%、Tween-80的百分浓度为0.4%～0.6%、葡萄糖的百分浓度为0.4%～0.6%、甘氨酸的百分浓度为1.5%～2.5%、PEG4000的百分浓度为0.8%～1.2%、PEG20000的百分浓度为1%～2%、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01%～0.1%。2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述的储存液配方为PB的质量浓度为20mM、BSA的百分浓度为1.8%、Tween-80的百分浓度为0.5%、葡萄糖的百分浓度为0.5%、甘氨酸的百分浓度为2%、PEG4000的百分浓度为1%、PEG20000的百分浓度为1.5%、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.03%。3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：试纸条加样层析后，检测质控线和检测线的荧光信号强度，并以质控线荧光信号强度校正检测线的荧光信号强度，实现D-二聚体的定量检测。4.一种D-二聚体免疫荧光定量试纸...

【专利技术属性】
技术研发人员：何平，梁德智，陈润文，
申请(专利权)人：中山市创艺生化工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44