The invention discloses a colloidal rapid detection of Chinese Sacbrood bee virus gold strip, including PVC floor, PVC floor from left to right: fixed sample pad, a colloidal gold pad, a nitrocellulose membrane and absorbent pad, a nitrocellulose membrane is arranged on the test line and control line are separated from each other, the colloid there is a gold labeled pad in mouse anti bursal disease virus capsid protein VP3 monoclonal antibody test line, nitrocellulose membrane bag is another kind of mouse anti VP3 monoclonal antibody, the control line on the cellulose nitrate film coated Sheep anti mouse IgG. The colloidal gold test strip is used for detecting the Chinese bee larvae disease virus, and the test paper has strong specificity, simple and fast operation, direct result and convenient popularization and application.
【技术实现步骤摘要】
中华蜜蜂囊状幼虫病病毒免疫胶体金试纸条
本专利技术属于病毒疫病诊断
,涉及一种中华蜜蜂囊状幼虫病病毒免疫胶体金试纸条。
技术介绍
中华蜜蜂囊状幼虫病是由中蜂囊状幼虫病病毒(Chinesesacbroodvirus,CSBV)引起的一种对中蜂危害严重的病毒病。其症状主要见于中蜂幼虫,病毒在幼虫体内大量复制,导致中蜂幼虫很快死亡,虫体皮下渗出液增多,用镊子夹出时呈典型的囊状。中蜂囊状幼虫病发病快、传播广、死亡率高,蜂群患病后轻者影响蜂群的繁殖和采集,重者会造成全场蜂群覆灭。该病目前尚无特效药物治疗,是中蜂现代饲养中迫切需要解决的重大问题。我国于1972年冬首先在广东省佛冈、从化、增城等地发生该病,翌年起迅速蔓延到福建、广西等12个省、区造成近百万群中蜂死亡,目前在我国中蜂养殖区基本都有流行,常造成80%-90%的损失。中蜂囊状幼虫病病毒属于小RNA病毒科的昆虫类小RNA病毒,直径为28-30nm,沉降系数为154s,基因组是一条正链ssRNA,只有一个大的开放阅读框,翻译出多聚蛋白后剪切成结构蛋白和非结构蛋白。CSBV病毒衣壳由3种结构蛋白vp1、vp2、vp3组成,没有囊膜。传统的对CSBV的检测主要是症状诊断、电镜观察和血清学检测等方法,而症状诊断不够确切,电镜观察和血清学检测耗时费力,而且需要繁琐的步骤和较高的试验条件,尤其是CSBV标准阳性血清难于获得,极大地限制了该病的临床检测。随着分子生物学的发展,虽然RT-PCR方法能够用于临床上CSBV的检测。但是研究表明不同地区种群的中蜂囊状幼虫病病毒核苷酸序列存在较大差异。这为设计适宜的RT-PCR引 ...
【技术保护点】
一种中华蜜蜂囊状幼虫病病毒免疫胶体金试纸条,其特征在于:它包括PVC底板,PVC 底板上从左至右依次固定样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,硝酸纤维素膜上设有相互分开的检测线和质控线,其中胶体金垫标记有一种鼠抗中华蜜蜂囊状幼虫病病毒衣壳蛋白vp3单克隆抗体,硝酸纤维素膜上的检测线包被另一种鼠抗中华蜜蜂囊状幼虫病病毒vp3单克隆抗体,硝酸纤维素膜上的质控线包被羊抗鼠IgG。
【技术特征摘要】
1.一种中华蜜蜂囊状幼虫病病毒免疫胶体金试纸条,其特征在于:它包括PVC底板,PVC底板上从左至右依次固定样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,硝酸纤维素膜上设有相互分开的检测线和质控线,其中胶体金垫标记有一种鼠抗中华蜜蜂囊状幼虫病病毒衣壳蛋白vp3单克隆抗体,硝酸纤维素膜上的检测线包被另一种鼠抗中华蜜蜂囊状幼虫病病毒vp3单克隆抗体,硝酸纤维素膜上的质控线包被羊抗鼠IgG。2.根据权利要求1所述中华蜜蜂囊状幼虫病病毒免疫胶体金试纸条的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)首先对中华蜜蜂囊状幼虫病病毒衣壳蛋白vp3基因进行克隆、蛋白表达及纯化,获得外源vp3蛋白;(2)制备鼠抗中华蜜蜂囊状幼虫病病毒vp3单克隆抗体:以纯化的vp3蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选获得两个不同的杂交瘤细胞株,利用这两个细胞株制备两种不同的单克隆抗体;(3)制备中华蜜蜂囊状幼虫病病毒免疫胶体金检测试纸条:a、标记vp3单克隆抗体的胶体金垫制备:采用柠檬酸三钠作为还原剂来制备胶体金,对上述步骤(2)中制备的中华蜜蜂囊状幼虫病病毒vp3单克隆抗体中的一种进行胶体金标记,先确定单抗与胶体金结合的标记浓度和pH值;随后将单克隆抗体在搅拌状态下加入胶体金,边加边搅拌后,室温放置;再加入牛血清白蛋白,搅拌均匀,离心;去除沉淀取上清后,再离心;沉淀用1/10原体积的金标保存液重悬,所述金标保存液含1%BSA、2%蔗糖、0.1%Tween-20的磷酸缓冲盐溶液,将制备的胶体金标记抗体铺在玻璃纤维...
【专利技术属性】
技术研发人员:王子龙,李游,曾志将,吴小波,颜伟玉,谢国秀,刘俊峰,
申请(专利权)人:江西农业大学,
类型:发明
国别省市:江西,36
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