快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法技术

本发明专利技术涉及一种快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，包括以下步骤：步骤一，胶体碳的制备；步骤二，适合PH值条件下胶体碳标记抗体的制备；步骤三，抗体包被至反应膜作为T线及二抗包被至反应膜的C线；步骤四，胶体碳试纸条的制备；步骤五，从待检植物中提取蛋白，制备蛋白提取液；步骤六，将检测试纸条插入蛋白提取液中反应；步骤七，适当反应时间后，进行肉眼判断结果。本发明专利技术采用标记了多克隆抗体E01的胶体碳垫与包被了多克隆抗体E01的硝酸纤维素膜和包被了羊抗兔IgG的硝酸纤维素膜制成检测试纸条；采用双抗体夹心免疫层析的原理，形成抗原-抗体复合物使结果肉眼可见。

【技术实现步骤摘要】
快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法
本专利技术涉及转基因油菜、大豆等作物的谷物散粮及其粗加工产品中的蛋白CP4-EPSPS的快速检测方法，属于转基因检测领域。
技术介绍
随着各种各样的转基因食品大量涌入市场，转基因食品的安全性日益备受关注，世界各国对转基因食品的安全性存在较大的争议。欧盟，日本等地区已制定相关法规对转基因食品进行严格的管理。因此，快速检测转基因作物/植物中转基因蛋白的方法具有重要的意义。自1996年孟山都(Monsato)公司上市第一例抗草甘膦大豆一来，转基因作物的推广应用经历了18年，抗除草剂性状仍然是转基因植物的首要性状。CP4EPSPS被应用于多种作物的转基因研究中，包括玉米、大豆、棉花、油菜、甜菜和苜蓿等。随着各种各样的转基因食品通过贸易大量进入国际市场，转基因食品的安全性受到人们的日益关注，世界各国对转基因食品的安全性存在着较大的争议，欧盟、日本等地区已经制定了相关法规对转基因食品进行了严格的管理。因此，检测转基因作物/植物中转基因蛋白的定量技术逐渐成为研究热点之一。5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)是莽草酸合成途径中的关键酶，能够催本文档来自技高网...

【技术保护点】
快速检测转基因植物中CP4‑EPSPS的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，胶体碳的制备；步骤二，适合PH值条件下胶体碳标记抗体的制备；步骤三，抗体包被至反应膜作为T线及二抗包被至反应膜的C线；步骤四，胶体碳试纸条的制备；步骤五，从待检植物中提取蛋白，制备蛋白提取液；步骤六，将检测试纸条插入蛋白提取液中反应；步骤七，适当反应时间后，进行肉眼判断结果。

【技术特征摘要】
1.快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，胶体碳的制备；步骤二，适合PH值条件下胶体碳标记抗体的制备；步骤三，抗体包被至反应膜作为T线及二抗包被至反应膜的C线；步骤四，胶体碳试纸条的制备；步骤五，从待检植物中提取蛋白，制备蛋白提取液；步骤六，将检测试纸条插入蛋白提取液中反应；步骤七，适当反应时间后，进行肉眼判断结果。2.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，步骤二中所述抗体为兔抗CP4-EPSPS多克隆抗体；步骤二中PH值为8～10，最优选的PH值为9.0。3.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，步骤三中所述抗体亦为兔抗CP4-EPSPS多克隆抗体。4.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，步骤三中所述二抗为羊抗兔IgG抗体。5.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，步骤三中抗体包被量为100ug/1ml碳。6.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，步骤七中所述反应时间为3-15分钟。7.根据权利要求1所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，步骤六中所述反应温度为10℃～30℃。8.根据权利要求2所述的快速检测转基因植物中CP4-EPSPS的方法，其特征在于，步骤二适合PH值条件下胶体碳标记抗体的制备具体方法为：一、胶体碳最适PH值确定：向一系列不同PH值梯度的硼酸盐缓冲液中先后加入0.1％纳米碳悬液及0.1％TritonX-100，超声处理其混合液后，200rpm离心10分钟，收集上清并静置24小时后，观察无沉淀者即为最适PH值；二、多克隆抗体的胶体碳标记：在步骤一判定的最适PH值条件下，向80...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴刚，李均，武玉花，李晓飞，李允静，朱莉，王锐，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，南京瑞启生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42