猪疾病多联快速检测试纸条制造技术

本实用新型专利技术公开了一种猪疾病多联快速检测试纸条。该试纸条包括底板、包被膜、玻璃纤维膜、吸水纸和样品垫；其中，包被膜的底面粘贴在底板上，包被膜正面的两端分别粘贴玻璃纤维膜和吸水纸；在玻璃纤维膜远离吸水纸一端的正面粘贴样品垫；在包被膜上设有检测线I、II、III和质控线。本实用新型专利技术试纸条不需专业人员操作，不需借助任何仪器，检测耗时短且制备简单。采集一份血清样品，可同时检测猪瘟、猪蓝耳病和猪O型口蹄疫病毒抗体。能够满足基层组织、农户对于重大疫病诊断的需求。

Pig disease multi joint rapid detection test strip

The utility model discloses a pig disease multi joint rapid detection test strip. The test strip comprises a base plate, a coating film, glass fiber membrane, absorbent paper and sample pad; the coating film on the bottom surface of the paste on the bottom plate, two ends are respectively the positive package film pasting glass fiber membrane and absorbent paper; positive paste sample pad on the glass fiber film from one end of the absorbent paper in the package; by the film is provided with I, II, III test line and control line. The test strip of the utility model does not need to be operated by professionals, and the utility model has the advantages of no need of any instruments, short detection time and simple preparation. A serum sample was collected to detect the antibody against classical swine fever, swine blue ear disease and swine foot-and-mouth disease virus type O. To meet the needs of grassroots organizations, farmers for the diagnosis of major diseases.

【技术实现步骤摘要】

本技术总体涉及动物疫病快速诊断试纸条，具体涉及一种可同时检测猪瘟、蓝耳病和O型口蹄疫病毒抗体的免疫层析试纸条。
技术介绍
猪瘟(classicalswinefever,CSF)俗称烂肠瘟，是感染猪的一种急性、热性、高度接触性传染病。猪瘟会导致患病猪发烧、厌食、腹泻、死亡等，可造成母猪流产、仔猪大批死亡。猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)由于发病猪出现耳朵发绀症状，又称蓝耳病。蓝耳病主要感染繁殖母猪和仔猪，引起免疫抑制，对猪链球菌病有诱发作用。口蹄疫(footandmouthdisease,FMD)是一种多宿主传染病，猪、牛、羊等偶蹄类动物最易感。猪O型口蹄疫发病率高，传播迅速，可造成母猪流产、仔猪大批死亡。猪瘟、高致病性猪蓝耳病和口蹄疫是对养猪业危害最严重的三种猪病，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病和法定申报动物疫病，我国也将其列为一类传染病。目前，我国针对这三种猪病采取强制免疫与疫情监测相结合的净化策略，疫苗免疫成为影响疫病防控的关键，而针对疫苗建立合适的评价手段具有重要意义。目前，疫苗免疫效果评价主要依赖ELISA方法。国内外有许多动物疫病血清抗体检测试剂，如美国爱德士(IDEXX)和韩国金诺(JBT)的猪瘟阻断ELISA试剂盒，中国兽医药品监察所的猪瘟间接ELISA试剂盒。ELISA敏感性高，可平行检测多份样品，但是该方法耗时较长，间接ELISA需要约2h，阻断ELISA需要2～3h。此外，ELISA检测需要使用酶标仪等仪器，只能适用于具有实验硬件支持的机构，无法在临床一线等简陋条件下开展免疫监测。因此，研发病毒抗体快速检测手段对于猪病临床诊断与免疫监测具有重要意义，而基于免疫层析原理的胶体金试纸条检测技术操作简单，检测时间短，成为重要的血清学监测手段。
技术实现思路
本技术所要解决的问题是克服现有技术的不足，提供一种可同时检测猪瘟、蓝耳病、O型口蹄疫病毒抗体的胶体金试纸条。该试纸条不需专业人员操作，不需借助任何仪器，检测耗时短且制备简单。本技术所要解决的技术问题是通过以下技术方案实现的：一种猪疾病多联快速检测试纸条，试纸条包括底板、包被膜、玻璃纤维膜、吸水纸和样品垫。其中，包被膜的底面粘贴在底板上，包被膜正面的两端分别粘贴玻璃纤维膜和吸水纸。在玻璃纤维膜远离吸水纸一端的正面粘贴样品垫。在包被膜上设有检测线I、II、III和质控线。检测线I、II、III分别包被猪瘟、蓝耳病、猪O型口蹄疫病毒rED蛋白，质控线包被兔抗猪IgG抗体。所述玻璃纤维膜上喷涂SPA蛋白胶体金颗粒标记偶联物。本技术试纸条采用双抗原夹心法，当被检样品中含有猪瘟、蓝耳病和猪O型口蹄疫病毒抗体时，则在样品垫处与SPA胶体金颗粒标记偶联物结合，分别形成“SPA偶联物—病毒抗体复合物”，并在吸水纸的作用下向前渗透泳动。当复合物到达检测线I，猪瘟病毒抗体与rED1蛋白发生特异性结合，形成“SPA偶联物—猪瘟病毒抗体—rED1复合物”，在包被膜上出现肉眼可见的色带。当复合物到达检测线II，蓝耳病病毒抗体与rED2蛋白发生特异性结合，形成“SPA偶联物—蓝耳病病毒抗体—rED2复合物”，在包被膜上出现肉眼可见的色带。当复合物到达检测线III，O型口蹄疫病毒抗体与rED3蛋白发生特异性结合，形成“SPA偶联物—口蹄疫病毒抗体—rED3复合物”，在包被膜上出现肉眼可见的色带。当被检样品中不含猪瘟、蓝耳病、O型口蹄疫病毒抗体时，SPA胶体金颗粒标记偶联物泳动至质控线，与兔抗猪IgG抗体结合，在包被膜上出现肉眼可见的色带。检测时，吸取待检血清样品1滴，加入加样孔，观察检测线I、II、III和质控线是否出现红色色带，从而判定动物体内是否含有猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒和猪O型口蹄疫病毒抗体。本技术的积极效果是：1、本技术试纸条结合胶体金技术和膜层析技术，操作便捷，不需要仪器，结果判读简单。相对于ELISA，试纸条原辅料更为简单，成本低，有益于推广应用。采集一份血清样品，可同时检测猪瘟、猪蓝耳病和猪O型口蹄疫病毒抗体。能够满足基层组织、农户对于重大疫病诊断的需求。2、本技术采用酵母真核表达系统制备试纸条上的检测用抗原蛋白。酵母为真核表达宿主，蛋白翻译后加工修饰机制更完善，表达蛋白活性高。3、本技术采用双抗原夹心法，不受样品的宿主来源限制，除检测猪瘟、蓝耳病和猪O型口蹄疫病毒抗体外，还可用于多种动物O型口蹄疫病毒检测。附图说明图1为本技术试纸条的侧面结构示意图。图中1：底板；2：包被膜；3：玻璃纤维膜；4：吸水纸；5：样品垫。图2为图1的正面结构示意图。图中6：检测线I；7：检测线II；8：检测线III；9：质控线。具体实施方式下面结合附图具体介绍本技术的猪疾病多联快速检测试纸条。本领域技术人员应该理解，下面描述的实施例只是为了更好地理解本技术，并不用来限制本技术。如图1所示，根据本技术的猪疾病多联快速检测试纸条包括底板1、包被膜2、玻璃纤维膜3、吸水纸4和样品垫5。其中，包被膜2粘贴在底板1上面，包被膜2正面的两端分别粘贴玻璃纤维膜3和吸水纸4。在玻璃纤维膜3远离吸水纸4的一端的正面粘贴样品垫5。底板1通常为PVC材质，包被膜2为硝酸纤维素膜(NC膜)。在玻璃纤维膜3上涂覆有胶体金标记SPA蛋白。如图2所示，在包被膜上设有检测线I6、检测线II7、检测线III8和质控线9，检测线I6包被猪瘟病毒主要抗原区(rED1)，检测线II7包被蓝耳病病毒主要抗原区(rED2)，检测线III8包被O型口蹄疫病毒主要抗原区(rED3)，质控线9包被兔抗猪IgG抗体。所述检测线I6、检测线II7、检测线III8和质控线9在包被膜2上呈4条线平行排列，依据检测线I6、检测线II7、检测线III8和质控线9是否出现红色色带来进行结果判定。下述实施例中的主要原材料来源为：猪瘟病毒主要抗原区(rED1)、蓝耳病病毒主要抗原区(rED2)、O型口蹄疫病毒主要抗原区(rED3)、猪瘟病毒抗体阳性血清、蓝耳病病毒抗体阳性血清、猪O型口蹄疫病毒阳性血清为郑州中道生物技术有限公司制备并对外提供。其中3种抗原为毕赤酵母真核系统表达，3种阳性血清均为商品化疫苗免疫动物制备。其它试剂和材料均是来源于商业途径。所述实验方法，若无特别说明，均为常规实验方法。本技术的试纸条的具体制备方法如下：1.1猪瘟、蓝耳病、O型口蹄疫病毒主要抗原区(rED)的制备根据所检测的病原体，检索NCBI数据库并选择相应参考基因：猪瘟病毒(AF531433.1)、蓝耳病病毒(EU807840.1)、O型口蹄疫病毒(JQ973889)。设计3对引物，分别扩增猪瘟、蓝耳病和O型口蹄疫病毒主要抗原区基因：(1)猪瘟病毒rED1:P1:5'-TTTGAATTCAGACTAGCCTGCAAGGAAGATTAC-3'；P2:5'-TATGCGGCCGCGTTGAAGTCGAAGCCACACC-3'；(2)猪蓝耳病病毒rED2:P3:5'-TTTGAATTCATGCCAAACAACAACGGTAA-3'；P4:5'-TTTGCGGCCGCAGCAGATGGGGAAGCAGTGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪疾病多联快速检测试纸条，其特征在于，该试纸条包括底板、包被膜、玻璃纤维膜、吸水纸和样品垫；其中，包被膜的底面粘贴在底板上，包被膜正面的两端分别粘贴玻璃纤维膜和吸水纸；在玻璃纤维膜远离吸水纸一端的正面粘贴样品垫；在包被膜上设有检测线I、II、III和质控线。

【技术特征摘要】
1.一种猪疾病多联快速检测试纸条，其特征在于，该试纸条包括底板、包被膜、玻璃纤维膜、吸水纸和样品垫；其中，包被膜的底面粘贴在底板上，包被膜正面的两端分别粘贴玻璃纤维膜和吸水纸；在玻璃纤维膜远离吸水纸一端的正面粘贴样品垫；在包被膜上设有检测线I、II、III和质控线。2.根据权利要求1所述的猪疾病多联快速检测试纸条，其特征在于，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：张杰，王军，王盼，卜攀攀，吴智坚，王圆圆，柴素真，刘玉辉，李伟豪，曾小宇，苗银萍，余清卫，赵林萍，
申请(专利权)人：郑州中道生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：河南;41