一种低成本的BCR/ABL融合基因快速检测探针及其制备方法和应用技术
【技术实现步骤摘要】
一种低成本的BCR/ABL融合基因快速检测探针及其制备方法和应用
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种低成本的BCR/ABL融合基因快速检测探针及其制备方法和应用。
技术介绍
慢性粒细胞白血病是骨髓造血干细胞克隆性增殖形成的恶性肿瘤，占成人白血病的15％。大量研究表明慢性髓性白血病的发病机制是t(9；22)(q34；q11)染色体易位产生BCR/ABL融合基因。BCR/ABL基因融合阳性是慢性髓性白血病的典型临床表现，同时，该肿瘤治疗的关键药物格列卫(甲磺酸伊马替尼)能选择性抑制BCR/ABL阳性细胞，因此，检测BCR/ABL基因融合状况对慢性髓性白血病的诊断及治疗均有指导意义。目前核型分析、PCR法和FISH法是常见的几种检测方式。FISH具有安全、灵敏度高及准确度高等优点。荧光原位杂交是一种在20世纪80年代放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性分子遗传技术，以荧光素标记取代放射性同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。目前FISH常用的检测探针主要是通过对特定人类基因组BAC克隆进行缺口平移法或随机引物法标记，再经Human-cot1DNA封闭...
【技术保护点】
一种低成本BCR/ABL融合基因快速检测探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)从UCSC Genome Browser下载BCR和ABL基因探针所覆盖区域的基因组非重复序列，其中BCR探针覆盖区域为：chr22 22806485～23854431，ABL探针覆盖区域为：chr9 130396674～131075953；(2)将步骤(1)获得的BCR基因探针所覆盖区域的基因组非重复序列使用perl插件程序chunks.pl分割成1kb大小的区块；将分割后的区块批量导入OligoArray软件进行探针设计、探针筛选，然后将筛选出的探针导出到EXCEL表格中，再分别在每...
【技术特征摘要】
1.一种低成本BCR/ABL融合基因快速检测探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)从UCSCGenomeBrowser下载BCR和ABL基因探针所覆盖区域的基因组非重复序列，其中BCR探针覆盖区域为：chr2222806485～23854431，ABL探针覆盖区域为：chr9130396674～131075953；(2)将步骤(1)获得的BCR基因探针所覆盖区域的基因组非重复序列使用perl插件程序chunks.pl分割成1kb大小的区块；将分割后的区块批量导入OligoArray软件进行探针设计、探针筛选，然后将筛选出的探针导出到EXCEL表格中，再分别在每条探针的5’端和3’端加上18bp的标签序列，得到一系列带有标签序列的BCR探针序列；(3)将步骤(1)获得的ABL基因探针所覆盖区域的基因组非重复序列使用perl插件程序chunks.pl分割成1kb大小的区块；将分割后的区块批量导入OligoArray软件进行探针设计、探针筛选，然后将筛选出的探针导出到EXCEL表格中，再分别在每条探针的5’端和3’端加上18bp的标签序列，得到一系列带有标签系列的ABL探针序列；(4)使用DNA合成仪对步骤(2)所得带有标签序列的BCR探针序列进行化学合成，将化学合成的探针进行混合，制备得到BCR探针库；同理，使用DNA合成仪对步骤(3)所得带有标签系列的ABL探针序列进行化学合成，将化学合成的探针进行混合，制备得到ABL探针库；(5)分别合成5’端带有绿色荧光基团的M13通用引物和5’端带有橘红色荧光基团的M13通用引物，使用5’端带有绿色荧光基团的M13通用引物对BCR探针库进行扩增标记反应，使用5’端带有橘红的荧光基团的M13通用引物对ABL探针库进行扩增标记反应；(6)将步骤(5)所得BCR探针库的扩增标记产物纯化、稀释后即得到荧光标记的BCR探针库，将步骤(5)所得ABL探针库的扩增标记产物纯化、稀释后即得到荧光标记的ABL探针库，所述荧光标记的BCR探针库和荧光标记的ABL探针库构成了BCR/ABL融合基因快速检测探针。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)中所述探针筛选的条件为：探针长度50bp，TM值85～99℃，GC比40～80％，不含TTT...
【专利技术属性】
技术研发人员：李倩，李雪梅，叶伦，程宏夏，陈刚，
申请(专利权)人：武汉康录生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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