本发明专利技术公开了一种快速检测全血中甲胎蛋白的试纸条及其制备方法，属于生物测试制品制造领域。这种试纸条基于胶体金免疫层析技术，具有检测快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便的特点，检测时无需专业人员，也不依赖大型仪器设备，只需要80μL血液就可以随时快速检测血液中的甲胎蛋白含量，该试纸的检测范围为5ng-200ng/ml，检测时间小于5min，可广泛应用于健康体检(肿瘤筛查)和家庭自我监测血液中的甲胎蛋白含量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物测试制品制造领域，具体涉及。
技术介绍
肝癌特异性标志物的快速、准确检测对原发性肝癌的早期诊疗具有极其重要的意义。正常情况下，甲胎蛋白(AFP)主要来自胚胎的肝细胞，胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失，正常人血清中甲胎蛋白尚不足20ng/ml。肝细胞再生时期，某些胚胎癌、生殖细胞瘤、消化道癌症、妊娠妇女血液中的AFP也有不同程度的升高。但是最值得注意的是肝癌患者，血液中的AFP浓度可以大幅度升高，并且是持久性升高，这是因为肝癌细胞能合成和分泌较多的AFP释放入血液。所以，甲胎蛋白作为一种最广泛、最有价值的特异性肝癌标志物，具有确立诊断、早期诊断、鉴别诊断的作用。目前医学上常用检测甲胎蛋白的方法，如化学发光法、酶标法、放射免疫法检测等，都需要配套有昂贵的检测仪器或者冗繁的操作步骤，难以在基层医疗机构和普通市民家庭普及。而目前市场上仅有需要滴加血清而不是全血来检测的胶体金法检测试纸条，对基层医疗机构个普通市民来说，无疑血清的分离增大了检测的难度、增长了检测的时间，同时这也极大限制了其在快速诊断方面的普及。因此，建立基于全血的甲胎蛋白检测快速试纸检测方法，成为市场迫切的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，该试纸条操作简单、便于携带，检测快速灵敏度高，结果清晰易于判断；该试纸条的制备方法操作简单、便捷。本专利技术是通过以下技术方案来实现:—种快速检测全血中甲胎蛋白的试纸条，包括PVC带胶底板，在PVC带胶底板上沿层析方向依次设有全血滤膜样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；全血滤膜样品垫的部分压在金标垫上，金标垫部分压在硝酸纤维素膜层上，吸水滤纸部分压在硝酸纤维素膜层上；硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，且检测线上标记有AFP单克隆抗体I，质控线上标记有兔抗鼠抗体，金标垫上标记有AFP单克隆抗体II的胶体金免疫探针。吸水滤纸压在硝酸纤维素膜层上的部分与硝酸纤维素膜层重叠1.0?1.5mm ;金标垫压在硝酸纤维素膜层上部分与硝酸纤维素膜层重叠1.0?1.5mm ;全血滤膜样品垫压在金标垫上的部分与金标垫重叠1.0?1.5mm。全血滤膜样品垫的孔径为1.4?1.8 μ m。检测线距离金标垫的距离为0.6?0.8cm，检测线和质控线相距0.5?0.7cm。本专利技术还公开了一种快速检测全血中甲胎蛋白的试纸条的制备方法，包括以下步骤:I)用碱性溶液将胶体金溶液的pH值调节至8.5?9.0，然后将胶体金溶液与AFP单克隆抗体II混匀后，于4°C下静置，然后加入牛血清蛋白BSA进行封闭，使混合体系中胶体金的终浓度为0.5%?1.5% ;2)将经步骤I)处理的混合体系离心，取沉淀，将沉淀用PBS缓冲液重悬至体积为离心前的10%?30%，制得浓缩的免疫探针，于4°C保藏；3)取聚酯纤维素膜，用缓冲液浸泡处理后于37°C干燥，将步骤2)制得的免疫探针均匀涂抹在聚酯纤维素膜上，制得金标垫；4)采用非接触式点膜仪将AFP单克隆抗体I和兔抗鼠抗体在硝酸纤维素膜上分别划出检测线和控制线，划线后在37°C真空环境下干燥，制得标记有AFP单克隆抗体I和兔抗鼠抗体的硝酸纤维素膜；5)按层析方向，依次将全血滤膜样品垫、金标垫、标记有AFP单克隆抗体I和兔抗鼠抗体的硝酸纤维素膜以及吸水滤纸组装在PVC带胶底板上，制得快速检测全血中甲胎蛋白的试纸条。步骤I)是按0.6?1.5mL胶体金溶液与10?15 μ g AFP单克隆抗体II的用量进行混合；所述碱性条件是指在PH值为8.5?9.0的条件下；在4°C下静置时间为25?35min，封闭时间为35?45min ;胶体金颗粒是通过梓檬酸盐还原氯金法制备得到，粒径为20±3nmo步骤2)所述离心是在10000?14000rpm的条件下，处理5?1min ；步骤2)所用PBS缓冲液中含有0.5%?1.5%的BSA、0.03%?0.1%的叠氮化钠、0.5%?1.5%的蔗糖及0.5%?1.5%的吐温-20。步骤3)所述的缓冲液采用PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液或Triton X-100中的一种或几种，且缓冲液中含有0.5%?1%的PEG-2000、0.5%?1%的吐温-20和0.5%?1.5%的蔗糖；将免疫探针以10?20yL/cm的用量均匀涂抹在聚酯纤维素膜上。步骤4)划线时AFP单克隆抗体I和兔抗鼠抗体的使用量为I?2 μ L/cm。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果:本专利技术公开的快速检测全血中甲胎蛋白的试纸条，在PVC带胶底板上沿层析方向依次设有全血滤膜样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；携带有AFP单克隆抗体II和兔抗鼠抗体的硝酸纤维素膜粘贴在PVC带胶底板上，硝酸纤维素膜的一端粘贴金标垫(喷涂有胶体金免疫探针的结合垫)，金标垫上粘贴有全血滤膜、吸水纸粘贴于硝酸纤维素膜的另一端上面。本专利技术的试纸条结构设计合理，使用方便，适用于甲胎蛋白5min之内的快速检测，无需任何仪器设备，携带方便，特异性强，灵敏度高，检测成本低。使用该试纸条时，只需微量的血液(约80μ1)就能在短时间内测出血液中甲胎蛋白的含量，该试纸检测范围为10?200ng/ml，检测时间在5分钟以内，即快速又灵敏，是一种非常适合在基层医疗机构级普通市民家庭操作，随时快速检测血液中甲胎蛋白浓度的高效办法。【附图说明】图1为本专利技术快速检测全血中甲胎蛋白的试纸条的结构示意图；图2为本专利技术快速全血甲胎蛋白检测试纸条检测结果示意图；图3为用甲胎蛋白标准品进行检测结果照片；图中，从左至右依次浓度为Ong/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml ；图4为采用全血进行检测的结果照片；图中，从左至右依次浓度为Ong/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml ο其中，I为PVC带胶底板；2为金标垫；3为吸水滤纸；4为质控线；5为全血滤膜样品垫；6为检测线；7为硝酸纤维素膜。【具体实施方式】下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。参见图1，本专利技术的快速检测全血中甲胎蛋白的试纸条，包括PVC带胶底板1，在PVC带胶底板I上沿层析方向依次设有全血滤膜样品垫5、金标垫2、硝酸纤维素膜7和吸水滤纸3 ;全血滤膜样品垫5的部分压在金标垫2上，金标垫2的部分压在硝酸纤维素膜层7上，吸水滤纸3部分压在硝酸纤维素膜层7上；硝酸纤维素膜7上设有检测线5和质控线4，且检测线6上标记有AFP单克隆抗体1，质控线4上标记有兔抗鼠抗体，金标垫2上标记有AFP单克隆抗体2的胶体金免疫探针。各部分之间存在1.0mm?1.5mm的重叠，具体的，吸水滤纸3压在硝酸纤维素膜层上的部分与硝酸纤维素膜层重叠1.0?1.5mm ;金标垫压在硝酸纤维素膜层上部分与硝酸纤维素膜层重叠1.0?1.5mm ;全血滤膜样品垫压在金标垫上的部分与金标垫重叠1.0?1.5mmο全血滤膜样品垫5的孔径为1.4?1.8 μπι ;试纸条的宽度为4?7mm，检测线5和质控线4相距0.5?07cm。本专利技术的试纸长度的说明:硝酸纤维素膜的长度为2.5cm左右，金标垫的长度为0.5cm左右，全血滤膜样品垫的长度为1.5cm左右，检测本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种快速检测全血中甲胎蛋白的试纸条，其特征在于，包括PVC带胶底板(1)，在PVC带胶底板(1)上沿层析方向依次设有全血滤膜样品垫(5)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(7)和吸水滤纸(3)；全血滤膜样品垫(5)部分压在金标垫(2)上，金标垫(2)部分压在硝酸纤维素膜层(7)上，吸水滤纸(3)部分压在硝酸纤维素膜层(7)上；硝酸纤维素膜(7)上设有检测线(6)和质控线(4)，且检测线(6)上标记有AFP单克隆抗体Ⅰ，质控线(4)上标记有兔抗鼠抗体，金标垫(2)上标记有AFP单克隆抗体Ⅱ的胶体金免疫探针。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李剑君，张特，朱键，赵军武，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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