本发明专利技术属于体外诊断领域，具体涉及一种同步定量联检乙肝三项的量子点免疫层析试条及其方法。所述试条的标记垫（3）包被有不同波长量子点对应标记的鼠抗HBsAg单抗、鼠抗HBeAg单抗和HBcAg的混合物。分析膜（7）的T带（4）包被有兔抗HBsAg抗体、兔抗HBeAg抗体、HBcAg的混合物。分析膜（7）的C带（5）包被有羊抗鼠抗体。乙肝三项标准曲线采用电子标签进行储存并安装在试条上。所述试条采用具有信号检测功能的检测仪读取电子标签存贮的标准曲线并结合检测仪测得的待测样品对应的荧光强度而同步定量血液样品中HBsAg、HBeAg、HBcAb浓度。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于体外诊断领域，具体涉及一种。所述试条的标记垫（3）包被有不同波长量子点对应标记的鼠抗HBsAg单抗、鼠抗HBeAg单抗和HBcAg的混合物。分析膜（7）的T带（4）包被有兔抗HBsAg抗体、兔抗HBeAg抗体、HBcAg的混合物。分析膜（7）的C带（5）包被有羊抗鼠抗体。乙肝三项标准曲线采用电子标签进行储存并安装在试条上。所述试条采用具有信号检测功能的检测仪读取电子标签存贮的标准曲线并结合检测仪测得的待测样品对应的荧光强度而同步定量血液样品中HBsAg、HBeAg、HBcAb浓度。【专利说明】
本专利技术属于体外诊断领域，具体涉及一种同步定量联检乙肝三项(HBsAg、HBeAg、HBcAb)的量子点免疫层析试条及其方法。
技术介绍
乙肝是严重危害人类健康的重大传染病，我国是乙肝感染大国，有6亿多人感染过乙肝，约1.3亿人携带乙肝病毒，乙肝防治具有非常重要意义。目前，乙肝标志物尚不能做到多项指标同步快速定量检测。传统酶联免疫吸附法(ELISA)每次只能检测一种指标，执行多次平行检测流程才能最后得到各指标检测结果，分析时间长(每做一次ELISA检测至少需要40-60分钟)，试剂消耗多，价格昂贵，操作复杂，劳动量大。 量子点(quantum dot, QD)突光发光效率高,激发谱线范围宽，能“一元激发,多元发射”，发射谱线范围窄且对称，光漂白速度慢，荧光寿命长，粒径与生物分子相近，表面修饰后能多功能化，不同粒径和种类的量子点混合物产生的特征波长荧光光谱不交叠，非常适用于样品多组分分析。本专利技术公开一种，以解决乙肝标志物多指标同步快速定量检测问题。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是公开一种同步定量联检乙肝三项的量子点免疫层析试条。本专利技术的第二个目的是公开所述试条的制备方法、标准曲线制作方法、以及用所述试条同步定量检测HBsAg (乙肝表面抗原)、HBeAg (乙肝e抗原)、HBcAb (乙肝核心抗体)的方法。 本专利技术上述目的是通过如下技术方案实现的:所述的同步定量联检乙肝三项的量子点免疫层析试条，包括顺次搭接固定在底衬8上的样品垫1、红细胞滤膜2、标记垫3、分析膜7、吸水垫6。 所述标记垫3为玻璃纤维膜。所述分析膜7为硝酸纤维素膜、尼龙膜、或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜，其上具有检测带(即T带)4和质控带(即C带)5。所述底衬8为聚脂或塑料板。 所述标记垫3包被有不同波长量子点对应标记的鼠抗HBsAg单抗、鼠抗HBeAg单抗和HBcAg的混合物。所述分析膜7的T带4包被有兔抗HBsAg抗体、兔抗HBeAg抗体、HBcAg的混合物。所述分析膜7的C带5包被有二抗质控物羊抗鼠抗体。 本专利技术所述试条的标记垫3的量子点包括ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/PbS、CdS/Cd (OH)2,CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS, CaSe, CaTe, SrS, SrSe, SeTe, BaS,BaSe> BaTe> CdS:Mn、ZnS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb 中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，以及由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核-壳型纳米复合粒子。 本专利技术所述同步定量联检乙肝三项的量子点免疫层析试条的制备方法包括下述步骤:A.量子点偶联抗体/抗原:a)取不同波长量子点分别用磷酸缓冲液(PBS)调pH=6-9，加入EDC (1_(3_ 二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺盐酸盐)和NHS (N-羟基硫代琥珀酸亚胺)室温活化10-60min。 b)分别对应加入鼠抗HBsAg单抗、鼠抗HBeAg单抗和HBcAg旋涡振荡反应0.5_3h。 c)分别对应加入BSA封闭反应0.5_2h。 d)离心纯化产物。 取沉淀用PBS缓冲液重悬分散，4°C保存。 B.试条组件制备:B)样品垫1:选用纤维素膜切成一定规格的膜块，将该膜块放入含有0.1%-10% BSA和 0.01%-10% Tween 20的PBS中浸泡，取出，干燥备用。 b)红细胞滤膜2:选红细胞滤膜切成一定规格膜块，干燥备用。 c)标记垫3:选用玻璃纤维膜切成一定规格膜块，加入用不同波长量子点对应标记的鼠抗HBsAg单抗、鼠抗HBeAg单抗和HBcAg的混合物溶液于该膜块上,干燥膜块备用。 d)分析膜7:选用纤维素膜切成一定规格的膜块，自膜块底边起由下自上相隔一定距离分别喷点0.5-10mg/ml兔抗HBsAg抗体、0.5-10mg/ml兔抗HBeAg抗体、0.5-1Omg/ml HBcAg的混合物作T带4,喷点0.5-10mg/ml 二抗质控物羊抗鼠抗体作C带5,干燥膜块备用。 吸水垫6:选用具有吸水作用的纤维素膜切成一定规格的膜块，干燥备用。 C.试条组件组装:上述制备好的试条组件按样品垫1、红细胞滤膜2、标记垫3、分析膜7、吸水垫6顺次搭接粘贴于底衬8上，切成一定规格的试条，装入塑料盒中，与干燥剂一起装入铝箔袋内密封储存。 本专利技术所述试条用于同步定量联检乙肝三项(HBsAg、HBeAg、HBcAb )的标准曲线的制备方法包括如下步骤:Ca)分别配制HBsAg、HBeAg> HBcAb各标准品系列浓度,并滴加到所述的同步定量联检乙肝三项的量子点免疫层析试条上。 (b)用检测仪分别读取T带的荧光强度(ODt)和C带的荧光强度(0D。)，计算获得ODtADc 比值或 ODt/ (0Dt+0Dc)比值。 rc；以标准品系列浓度作X轴，0Dt/0Dc比值作Y轴，或以标准品系列浓度作X轴，ODt/ (0Dt+0Dc)比值作Y轴，得到荧光强度与浓度对应标准曲线。 本专利技术所述试条用于同步定量联检乙肝三项(HBsAg、HBeAg、HBcAb)的方法包括如下步骤: 用电子标签存贮标准曲线数据。所述电子标签包括具有信息存贮功能的RFID (射频识别标签)、二维码、条码、或IC卡芯片。 (b)存贮有标准曲线数据的电子标签安装在量子点免疫层析试条上，或安装在装载试条的试条盒上。 用具有信号检测功能的检测仪读取电子标签存贮的标准曲线数据并结合检测仪测得的待测样品对应的荧光强度而得到样品中的HBsAg、HBeAg、HBcAb浓度。 本专利技术具有如下有益效果:(I)一次加样即可实现样品HBsAg、HBeAg、HBcAb同步快速定量检测。 (2)所述试条的样品垫I与标记垫3之间设有红细胞滤膜2，该红细胞滤膜2可阻止血液样品中的红细胞通过而只能让其血清滤过，血液样品毋需用离心设备等分离血清，用全血就能直接进行检测。 【专利附图】本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种同步定量联检乙肝三项的量子点免疫层析试条，包括顺次搭接固定在底衬（8）上的样品垫（1）、红细胞滤膜（2）、标记垫（3）、分析膜（7）、吸水垫（6），分析膜（7）具有T带（4）和C带（5），特征在于：标记垫（3）包被有不同波长量子点对应标记的鼠抗HBsAg单抗、鼠抗HBeAg单抗和HBcAg的混合物，分析膜（7）的T带（4）包被有兔抗HBsAg抗体、兔抗HBeAg抗体、HBcAg的混合物，分析膜（7）的C带（5）包被有质控物羊抗鼠抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王春英，马义才，侯飞，
申请(专利权)人：成都领御生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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