本发明专利技术提供一种EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂，至少包括一反应膜，所述反应膜上划有检测线和质控线，所述检测线含有鼠抗人IgA单克隆抗体；所述质控线含有生物素；一抗原垫，所述抗原垫含有由生物素标记的重组EB病毒VCA抗原；一金标垫，所述金标垫含有胶体金标记的亲和素复合物。本发明专利技术的检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供一种EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂，至少包括一反应膜，所述反应膜上划有检测线和质控线，所述检测线含有鼠抗人IgA单克隆抗体；所述质控线含有生物素；一抗原垫，所述抗原垫含有由生物素标记的重组EB病毒VCA抗原；一金标垫，所述金标垫含有胶体金标记的亲和素复合物。本专利技术的检测试剂盒具有快速、简便、准确和灵敏度高的特点。【专利说明】EB病毒VCA-1 gA抗体检测试剂及其制备方法
本专利技术涉及生物
，具体地涉及一种抗体检测试剂。 本专利技术还涉及包含该检测试剂的试剂盒及制备方法。
技术介绍
EB 病毒（epstein-barr virus, EBv)，又称人类疱疫病毒 4 型（Human herpesvirus 4 (HHV-4))。Epstein和Barr于1964年首次成功地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体 外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，认为该病毒是多种 恶性肿瘤（如鼻咽癌）的病因之一，它主要感染人类口咽部的上皮细胞和B淋巴细胞。在 中国南方鼻咽癌患病人群中大多都检测到有EB病毒基因组存在。EB病毒分布广泛，多呈散 发性，亦可引起流行。EB病毒与鼻咽癌关系十分密切，鼻咽癌病人血清中EB病毒VCA-IgA 抗体水平明显升高。VCA-IgA抗体与鼻咽癌的发生发展和预后均有密切关系。 目前检测EB病毒VCA-IgA的检测试剂主要是采用酶联免疫吸附（ELISA)法、 Real-time定量PCR法等，但存在操作复杂、检测灵敏度较低、检测时间长的缺陷。 胶体金是由氯金酸（HAuC14)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用 下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的 疏水胶溶液，故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形 成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋 白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一 些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性， 因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。 免疫金标记技术（Immunogold labelling techique)主要利用了金颗粒具有高电 子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配 体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方 法中。 胶体金法检测试剂将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂 (抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛 细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗 体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带 上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。 中国专利申请CN101949932A提供了一种胶体金法检测EB病毒IgA抗体的检测试 齐?，其采用EB病毒NA1抗原包被检测线，鼠抗人IgA单抗标记胶体金，用羊抗鼠 IgG抗体包 被质控线。中国专利申请CN102539768A提供了一种EB病毒Zta IgA抗体胶体金检测试剂， 其采用EB病毒Zta抗原包被检测线，鼠抗人IgA单抗标记胶体金，用羊抗鼠 IgG抗体包被 质控线。 以上两种胶体金法检测试剂均采用EB病毒抗原包被检测线，检测线的抗原可与 检测样本中的EB病毒IgG、IgA、IgM等所有抗体反应，由于IgG是血清中免疫球蛋白主成 分，约占血清中免疫球蛋白总含量的75%，是检测目标IgA抗体的4?7倍，可严重竞争干 扰检测目标IgA与包被EB病毒抗原的结合，造成检测结果灵敏度与特异性降低。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂，用鼠抗人IgA单 克隆抗体划检测线，并引入生物素-亲和素系统，直接捕获检测样本中的全部IgA抗体，可 以有效的避免IgG、IgM等抗体的干扰，提高检出的灵敏度与特异性。 本专利技术的另一个目的在于提供一种EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂盒。 本专利技术还提供所述检测试剂的制备方法。 根据本专利技术的一方面，一种EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂，至少包括 -反应膜，所述反应膜上划有检测线和质控线，所述检测线含有鼠抗人IgA单克 隆抗体；所述质控线含有生物素； 一抗原垫，所述抗原垫含有由生物素标记的重组EB病毒VCA抗原； 一金标垫，所述金标垫含有胶体金标记的亲和素复合物。 所述的EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂，其中优选地，所述检测线以包被浓度为 1. 4mg/ml的鼠抗人IgA单克隆抗体划线，所述质控线以包被浓度为彡2. 2mg/ml的生物素划 线，所述胶体金标记的亲和素复合物中亲和素的标记浓度为25?40μ g/ml，所述生物素标 记的重组EB病毒VCA抗原中生物素的标记浓度为25?30 μ g/ml。最优选地，所述质控线 以包被浓度为2. 2mg/ml的生物素划线，所述胶体金标记的亲和素复合物中亲和素的标记 浓度为25 μ g/ml，所述生物素标记的重组EB病毒VCA抗原中生物素的标记浓度为30 μ g/ ml 〇 所述的ΕΒ病毒VCA-IgA抗体检测试剂，进一步包括一用于加载检测样品的样品 垫。 根据本专利技术的另一方面，提供一种检测试剂盒，其包括所述的EB病毒VCA-IgA抗 体检测试剂，以及与之同时提供的相关使用说明、辅助检测工具、试剂和/或商品销售信 息。 根据本专利技术的再一方面，提供制备权利要求1所述的EB病毒VCA-IgA抗体检测试 剂的方法，包括： 1)划线NC膜的制备：用包被浓度的鼠抗人IgA单克隆抗体在NC膜上划检测线； 用包被浓度的生物素在NC膜上划质控线； 2)金标垫的制备：将标记浓度的亲和素与胶体金偶联制备胶体金标记的亲和素 复合物，浸泡涂抹玻璃纤维素膜制备金标垫； 3)抗原垫的制备：将标记浓度的生物素与重组EB病毒VCA抗原进行偶联制得生 物素标记的重组EB病毒VCA抗原复合物，浸泡涂抹玻璃纤维素膜制备抗原垫。 本专利技术所述的方法，优选地包括下述步骤： (1)划线NC膜的制备：用磷酸盐缓冲液将鼠抗人IgA单克隆抗体稀释到包被浓度 为1. 4mg/ml，将生物素稀释成包被浓度为彡2. 2mg/ml，用金标划线机将两种包被液划到NC 膜上，干燥后保存备用； (2)金标垫的制备：将标记浓度为25?40 μ g/ml的亲和素与胶体金进行偶联制 得胶体金标记的亲和素复合物，以转速为10000转/分钟离心30分钟，弃上清，加入胶体金 结合物稀释液至原体积的80%，然后用稀释液按60 μ Ι/cm2浸泡涂抹玻璃纤维素膜制成金 标垫，干燥后保存备用； (3)抗原垫的制备：将标记浓度为25?30 μ g/ml的生物素与重组EB病毒VCA抗 原进行偶联制得生物素标记的重组EB病毒V本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种EB病毒VCA‑IgA抗体检测试剂，至少包括一反应膜，所述反应膜上划有检测线和质控线，所述检测线含有鼠抗人IgA单克隆抗体；所述质控线含有生物素；一抗原垫，所述抗原垫含有由生物素标记的重组EB病毒VCA抗原；一金标垫，所述金标垫含有胶体金标记的亲和素复合物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：唐安洲，王胜岚，叶为民，张哲，宋小冬，李峰，
申请(专利权)人：中山生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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