一种猪伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种猪伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒及其用途。本发明专利技术提供一种猪伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、包被有抗猪伪狂犬病病毒抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸。本发明专利技术所提供的检测试剂盒结合近红外荧光检测技术，可快速，准确的检测出人全血、血清或血浆中的猪伪狂犬病病毒。

Near infrared fluorescence detection reagent kit for pig pseudorabies virus and use thereof

The invention discloses a near infrared fluorescence detection reagent kit for porcine pseudorabies virus and the use thereof. The invention provides a swine pseudorabies virus near-infrared fluorescence detection kit, includes a reagent strip on the backplane, reagent from sampling to order the sample pad, labeled with immunofluorescence probe glass cellulose membrane, coated with anti pseudorabies virus antibody nitrate cellulose membrane and absorbent paper. The detection kit provided by the invention combines the near-infrared fluorescence detection technology, and can quickly and accurately detect porcine pseudorabies virus in human whole blood, serum or plasma.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种猪伪狂犬病病毒（PRV）近红外荧光检测试剂盒及其用途。
技术介绍
猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒（pseudorra-biesvirus，PRV）引起的急性传染病。妊娠母猪表现为流产、死胎、木乃伊，尤其以产死胎较为严重某些省市表现为新生仔猪卜7日内发病，整窝死亡仔猪表现为体温升高、发抖、运动不协调、痉挛、呕吐、腹泻，出现划水运动、圆圈运动、体温下降死亡。该病对断奶仔猪也引起发病和死亡，还可以引起母猪不育症，屡配不孕该病在我国各地均有发生，给养猪业造成重大经济损先伪狂犬病毒属于疤疹病毒科，a疤疹病毒亚科，猪疤疹毒I型。与动物其它疤疹病毒一样，猪伪狂犬病毒具有长期潜伏感染、终生带毒的特性猪是该病毒的储藏者和传染源，在本病的传播上起着重要作用。目前控制和消灭伪狂犬病所面临的主要困难是伪狂犬病毒的潜伏感染问题，无论是自然感染猪还是试验感染猪，在初次感染康复后往往会建立起病毒的潜伏感染，此时并不向外界环境散发病毒，但在机体受到体内外因素的刺激时，病毒往往被活化，并由带毒动物传给其它动物，引起疾病暴发。为了有效地控制该病，减少经济损失和将来最终根除和消灭此病，保证和促进养猪业的健康发展，开展伪狂犬病的简便、快速、特异性强、敏感性高并能检测潜伏感染的诊断方法研究是非常重要的。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒及其用途，用于建立高效可行的伪狂犬病病毒近红外荧光检测技术，解决现有技术中的问题。鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒及其用途。本专利技术所提供的检测试剂盒结合近红外荧光检测技术，可快速，准确的检测出人全血/血清/血浆中伪狂犬病病毒。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术第一方面提供一种伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、包被有抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸。优选的，所述免疫荧光探针为抗伪狂犬病病毒单克隆抗体包被的近红外荧光乳胶微球颗粒。硝酸纤维素膜上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体和所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体可以为相同的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体，也可以为不同的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体。更优选的，所述硝酸纤维素膜上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam®Anti-PRV抗体[EP3737（2）]-C-terminal，所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam®Anti-PRV抗体[EPR3735]，或所述硝酸纤维素膜上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam通Anti-PRV抗体[EPR3735]，所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam®Anti-PRV抗体[EP3737（2）]-C-terminal。更优选的，所述荧光乳胶微球颗粒的直径为140-160nm。近红外光（NIR），是介于可见光（VIS）和中红外光（MIR）之间的电磁波，ASTM定义NIR为波长在780nm-2526nm范围内的电磁波。在近红外光区，生物体自吸收或荧光强度很小，可避免背景干扰。同时由于散射光强度与波长的四次方呈反比，近红外区的散射干扰大为减少。本专利技术第二方面提供所述伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：1)用缓冲液将荧光乳胶微粒离心清洗并将乳胶颗粒分散，在清洗好的乳胶颗粒分散液中加入抗伪狂犬病病毒单克隆抗体；加入EDCA使抗体与颗粒偶联；再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，制备获得探针溶液；2）将含有抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的缓冲溶液喷加到硝酸纤维素膜上，烘干备用；3）将步骤1制备获得的探针溶液浸润玻璃纤维薄膜，干燥备用；4）将步骤2所得的硝酸纤维素膜、步骤3所得的标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、样品垫、吸水纸及背板组装制备成伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒。优选的，所述步骤1中，再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，并加入冠醚，制备获得探针溶液，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6，15-冠醚-5，18-冠醚-6中的一种或多种的组合；更优选的，步骤1制备获得的探针溶液中冠醚的浓度为0.1-20mg/ml，更优选为4-8mg/ml。优选的，所述步骤1中，缓冲液为磷酸盐（PBS）缓冲液。更优选的，所述PBS缓冲液为0.009-0.Ollmol/L，PH7.25-7.35的PBS缓冲液。优选的，所述步骤1中，荧光乳胶微粒的直径为140-160nm。优选的，所述步骤1中，乳胶颗粒、抗伪狂犬病病毒单克隆抗体、EDCA的重量比为9-11：0.9-1.1：0.9-1.1。在本专利技术一实施例中，乳胶颗粒、抗伪狂犬病病毒单克隆抗体、EDCA的投料量分别为1mg，l00ug，100ug。优选的，所述封闭液为乙醇胺，加入量为适量，本领域技术人员可根据实际情况调整乙醇胺的用量。优选的，所述步骤2中，所述缓冲溶液为PBS缓冲液。本领域技术人员可选取适当浓度和pH的PBS缓冲液，更优选为0.009-0.011mol/LPH7，25-7.35的PBS缓冲液。优选的，所述步骤2中，含有抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的缓冲溶液中还含有冠醚，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6，15-冠醚-5，18-冠醚-6中的一种或多种的组合；更优选的，所述含有抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的缓冲溶液中冠醚的浓度为0.1-20mg/ml，更优选为4-8mg/ml。优选的，所述步骤2中，含有抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的缓冲溶液中抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的浓度为1.8-2.2mg/ml。优选的，所述步骤2中，抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的缓冲溶液的喷加量为0.9-1.1μL/cm优选的，所述步骤2中，烘干的具体条件为36-38℃烘箱烘干。所述喷加过程利用微量蛋白点膜系统。优选的，所述步骤1中的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam®Anti-PRV抗体[EP3737（2）]-C-terminal，所述步骤2中的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam®Anti-PRV抗体[EPR3735]或所述步骤1中的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam®Anti-PRV抗体[EPR3735]所述步骤2中的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam®Anti-PRV抗体[EP3737（2）]-C-terminal。优选的，所述步骤3中，干燥的具体条件为真空干燥机干燥。本专利技术第三方面提供所述伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒在伪狂犬病病毒检测领域的用途。所述用途具体为使用所述伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒对样品中的伪狂犬病病毒进行检测，所述样品选自人全血、血清或血浆中的一种或多种的组合。本专利技术所提供的检测试剂盒以人全血/血清/血浆为检测样本，结合近红外荧光检测技术，可快速，准确的检测出患者标本中的伪狂犬病病毒。所述试剂盒采用免疫荧光层析法，其最小可测量可达0.5pg/ml，检测方便、成本低，灵敏度高，特异性好，比同类定量诊断试剂价格低20-30%，大大节约了社会医疗成本，检测过程中样品收集及处理简单，可快速准确的获得结果，非常适合突发事件本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、包被有抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫荧光探针为抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体包被的近红外荧光乳胶微球颗粒。

【技术特征摘要】
1.一种猪伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、包被有抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫荧光探针为抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体包被的近红外荧光乳胶微球颗粒。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上包被的抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体和所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体可以为相同的抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体，也可以为不同的抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光乳胶微球颗粒的直径为140—160nm。4.如权利要求1-3任一权利要求所述的猪伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：用缓冲液将荧光乳胶微粒离心清洗并将乳胶颗粒分散，在清洗好的乳胶颗粒分散液中加入抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体；加入EDCA使抗体与颗粒偶联；再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，制备获得探针溶液；将含有抗猪伪狂犬病病毒单克隆抗体的缓冲溶液喷加到硝酸纤维素膜上，烘干备用；将步骤1制备获得的探针溶液浸润玻璃纤维薄膜，干燥备用；将步骤2所得的硝酸纤维素膜、步骤3所得的标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、样品垫、吸水纸及背板组装制备成猪伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，并加入冠醚...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜霞，刘静，立雯馨，
申请(专利权)人：江苏维赛科技生物发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32