本发明专利技术公开了一种检测肿瘤的试剂盒。其包含检测肿瘤的物质，该检测肿瘤的物质是可与N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合的物质。本发明专利技术的检测肿瘤的物质对很多肿瘤的检出率都在90％以上，肿瘤特异性在95％以上。这必将大大提高肿瘤的早期诊断率。本发明专利技术适于在正常人群中做肿瘤早期普查。
【技术实现步骤摘要】
检测肿瘤的试剂盒及其专用识别N-乙酰氨基葡萄糖的物 质
本专利技术涉及检测肿瘤的试剂盒及其专用识别N-乙酰氨基葡萄糖的物质。
技术介绍
自20世纪80年代，专家利用杂交瘤技术获得了能识别肿瘤特异性大分子糖蛋白 抗原（carbohydrate antigen, CA)，并研制了单克隆抗体识别系统。发展至今在目前肿瘤 体外早期诊断试剂领域，存在竞争性分析和非竞争性夹心分析两种分析方法。从实验室检 测的角度，肿瘤标志物分为血清/血浆肿瘤标志物与组织细胞肿瘤标志。血清/血浆肿瘤 标志物大致分为三类：1)胚胎抗原。胚胎期表达、正常成人不表达、伴随肿瘤发生又重新 表达的抗原，如AFP、CEA。2)肿瘤相关糖脂及糖蛋白。CA199、CA50、CA242、CA724、CA125、 CA153等。3)激素肽、酶、蛋白。这些在正常组织中有表达，但是在肿瘤组织中只是过量表 达的抗原。PSA、NSE、TPA等。对这些肿瘤标志物的检测也发展出很多微量免疫检测技术， I：匕如：1959 年 Berson 与 Yalow创立了放射免疫测定（radioimmunoassay, RIA), 1971 年瑞典 的 Engvall 建立了酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)以及 近期的化学发光免疫测定（chemluminescence immunoassay, CLIA)、电化学发光免疫测定 (electrochemiluminesence immunoassay, ECLI)、时间分辨突光免疫测定（time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA)。目前对于任何一个肿瘤标志物不管采用那种测定技术，鉴定 肿瘤和非肿瘤患者不是100%准确的。比如AFP对原发性肝癌的特异性为70% ;CEA对结 肠癌特异性为60%、胰腺癌为80%、胃癌为60%、肺癌为75%和乳腺癌为60% ;CA125对 卵巢癌为82% ;CA153对乳腺癌早期为75% ;CA724对胃癌为42%，NSE对小细胞肺癌为 70%。以上的标志物并不是广谱的，大都只能诊断一种或几种肿瘤，并且以CEA为例，其对 胰腺癌诊断效果最好，为80%，虽然对结肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌也有效，但最低的特异性 仅有60%，换句话说，40%是会漏诊的。肿瘤的早期发现与诊断，对于提高患者治愈率、延长 患者生命是至关重要的，致力于肿瘤研究的学者在探索和寻找有效的肿瘤标志从未松懈。 肿瘤早期诊断至今仍然是世界性难题，现用的肿瘤标志物只能检出约70%的肿 瘤，且绝大多数已属晚期。现行肿瘤标志物大都确切结构尚不明确，难于复制。 现行商品试剂盒的模式分为两类，夹心模式和竞争模式，且在肿瘤标志物领域只 有双结合体的夹心模式。
技术实现思路
基于上述缺陷，本专利技术的目的是提供检测肿瘤的试剂盒，该试剂盒包含可以与 N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合的物质。本专利技术利用N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合的物质 制备简单，检测特异性和灵敏性高，适于肿瘤发病初期的检测。 所述检测肿瘤的试剂盒为以血清为检测样本的试剂盒；所述肿瘤为恶性肿瘤。 所述肿瘤为乳腺癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、食管癌、口腔癌、结肠癌、胆管癌、卵巢癌、 宫颈癌、子宫癌、膀胱癌、胃癌、肾癌和贲门癌的一种或几种。 上述能与N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合的物质为以N-乙酰氨基葡萄糖为抗原决 定簇的单克隆抗体、多克隆抗体、与N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合的适配体或与N-乙酰氨 基葡萄糖特异性结合的凝集素。 所述与N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合的适配体为序列表中序列1所示的核酸。 本专利技术还保护与N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合的适配体，为序列表中序列1所示 的核酸。 N-乙酰氨基葡萄糖分子式：C8H15N06，分子量：221. 21，化学代号-GlcNAc，其结构如 图1A所示它可以与载体蛋白偶联得到抗原，制备可以检测肿瘤的特异性结合体，如抗体、 核酸适配体、凝集素等，这些特异性结合体可以与N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合。 上述载体蛋白可以为常用的载体蛋白，如卵白蛋白（0VA)、牛血清白蛋白（BSA)与 多管式载体血蓝蛋白（KLH)，也可以为糖蛋白，如粘蛋白及其他的蛋白中的一种或几种。 例如，在本专利技术的实施例中， 申请人:在血清中分离出了 N-乙酰氨基葡萄 糖链接粘蛋白1 (Mucinl，代号Mu)形成的本专利所提纯的肿瘤抗原Mu-GlcNAc (代 号MA153)，它链接的位置在粘蛋白1内糖链的暴露端，见图1B，粘蛋白1 (Mu)结构 的氨基酸序列为（-PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA-) X N，即粘蛋白1 (Mu_)的氨基酸序列 为：-PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA-的多次重复排列。 本专利技术利用N-乙酰氨基葡萄糖的特异结合体包括提纯的新的高灵敏血清肿瘤标 志物抗原即 2-deoxy-N-acetyl-D-glucosamine-mucinl (简称 Mu-GlcNAc,也称为 MA153) 和N-乙酰氨基葡萄糖的特异结合体：适配体（核酸，如MA153-A)和其它结合体如单克隆抗 体，多克隆抗体，植物凝集素（PHA)和/或受体，相关配体，以及检测早期肿瘤的方法。直接 检测N-乙酰氨基葡萄糖的方法包括两个模式：l)Ma695 - Mu-GlcNAc -MA153-A夹心式，2) 单结合体式，由N-乙酰氨基葡萄糖的特异结合体直接识别GlcNAc。用此方法可以检测出 97 %的肺癌，肿瘤特异度96 %。 本专利技术提供上述检测肿瘤的方法，是检测待测患者血清中的N-乙酰氨基葡萄糖 的浓度，以lU/mL为正常界值的上限值，其中，U为N-乙酰氨基葡萄糖活性单位。 临床血清学检测表明，本专利技术的技术方案对很多肿瘤的检出率都在90%以上，肿 瘤特异性在95%以上。这必将大大提高肿瘤的早期诊断率。本专利技术适于在正常人群中做肿 瘤早期普查。 本专利技术开辟了一种新模式，命名为单结合体模式（Single binder assay)，由N-乙 酰氨基葡萄糖的特异结合体直接识别N-乙酰氨基葡萄糖。它节省抗体，可降低成本80%， 提高灵敏度而不降低特异度。在本专利技术中，单结合体模式比夹心模式将肺癌的检出率提高 了 22% :前者灵敏度97%，特异度96% ;后者灵敏度75%，特异度95%。 【附图说明】 图1A表示N-乙酰氨基葡萄糖的结构图； 图1B表示N-乙酰氨基葡萄糖与粘蛋白1的关系；N-乙酰氨基葡萄糖与适配体 MA153-A的关系；粘蛋白1与单抗Ma695的关系；Mu-GlcNAc模拟结构； 图2表示Mu-GlcNAc夹心测定分析的原理； 图3表示Mu-GlcNAc夹心式测定标准曲线。 图4A表示N-乙酰氨基葡萄糖单结合体测定原理 图4B与图4A相似，不同的是待测血清中与N-乙酰氨基葡萄糖链接的蛋白部分中 没有-PDTR-肽段。表明在MA153中可能存在mucinl以外其它携带-GlcNAc的糖蛋白。 图5为N-乙酰氨基葡萄糖单结合体测定标准曲线。 【具体实施方式】 下述实施例中本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测肿瘤的试剂盒，包含可以与N‑乙酰氨基葡萄糖特异性结合的物质。
【技术特征摘要】
1. 检测肿瘤的试剂盒，包含可以与N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合的物质。2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述检测肿瘤的试剂盒为以血清为检 测样本的试剂盒；所述肿瘤为恶性肿瘤。3. 根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述肿瘤为乳腺癌、胰腺癌、肝癌、肺 癌、食管癌、口腔癌、结肠癌、胆管癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、膀胱癌、胃癌、肾癌和贲门癌 的一种或几种。4. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：能与N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合的 物质为以N-乙酰氨基葡萄糖为抗原决定簇的单克隆抗体、多克隆抗体、与N-乙酰氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：范振符，
申请(专利权)人：范飞舟，
类型：发明
国别省市：北京;11
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