本发明专利技术属医药技术领域，具体涉及一种广枣乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗阿尔茨海默病(AD)等丁酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。维吾尔药广枣经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用100:10的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，继用100:17的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，100:17的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱液干燥，即得乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属医药
，具体涉及一种广枣乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法和其制备预防及治疗阿尔茨海默病(AD)等乙酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。
技术介绍
广枣为漆树科植物南酸枣，学名Choerospondias axillaris (Roxb.)Burtt et Hill的干燥成熟果实。主要分布于我国南部名地。南酸枣果实含有丰富的营养成分，在产地都有生食其果的习惯，是食品生产的好原料，干果实入药名为广枣，为维吾尔习用药材。南酸枣鲜果实可用于食滞腹痛；果核用于烧烫伤；树皮入药有解毒收敛、止血止痛之效，外用治大面积水火烧烫伤。广枣性平，味甘、酸，具有养心，安神，抗心肌缺血，保护心功能等作用，可用于气滞血瘀，胸痹作痛，心悸气短，心神不安等症状。现在药理学研究证明广枣具有诱导白血病细胞系K562和K562/A02细胞凋亡的功效。本专利技术通过大规模、系统地活性筛选，意外地发现维吾尔药广枣提取物及其部分化学组分，具有显著地乙酰胆碱酯酶抑制活性，该活性提取物及其组合物有望应用于治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种广枣提取物。本专利技术还提供了以广枣提取物为主要活性成分的组合物。本专利技术同时提供了广枣提取物及其组合物的制备和在制备乙酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。本专利技术是通过如下技术方案实现的：维吾尔药广枣经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2）柱分离，上样后的硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇，比例见表1），各二氯甲烷-甲醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其乙酰胆碱酯酶抑制活性，意外地发现用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:10，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:17，体积比）洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:17，体积比）洗脱得到的二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:17，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有乙酰胆碱酯酶抑制活性的作用。优选的，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:10，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:17，体积比）洗脱，得到的二氯甲烷-甲醇混合溶剂的（二氯甲烷-甲醇，100:17，体积比）洗脱液干燥，即得乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。即乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物，可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该广枣乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱（TLC）分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1）显色方法：香草醛显色。具体，发现过程如下：1、广枣经水超声提取物的制备取维吾尔药广枣20 g，经100 mL水超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0217B，上样量0.1829g，拌样硅胶0.5 g，空白硅胶5g，二氯甲烷-甲醇系统洗脱。2、二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果取维吾尔药广枣20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0217B，0.1829g，上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅胶柱色谱，拌样硅胶0.5 g，空白硅胶5g，玻璃柱内径1.6 cm，二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱（条件见表1），柱体积11 mL，每个梯度洗脱100mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1），显色方法：香草醛显色。表13、抑制乙酰胆碱酯酶活性筛选方法和结果1) 实验条件a、材料：DMSO(二甲基亚砜) (科密欧公司)；KH2PO4、K2HPO4·3H2O(广东汕头市西陇化工厂)；AchE酶(美国Sigma公司)；PNPG(美国Sigma公司)b、实验仪器：多功能酶标仪Bio-RadModel 680型(Bio-RadLaboratories Inc.)2) 实验方法和过程样品处理：将1 mg待测样品溶于20μL二甲基亚砜(DMSO)作为母液，取1μL母液加入249μL蒸馏水配成200μg·mL-1的溶液。乙酰胆碱酯酶抑制活性测定方法：在96孔酶标板上测定样品的AchE 抑制活性。具体操作如下：在96孔酶标板中依次加入20μL PB (100mM，pH 8. 0)，25μL AChE (0. 033 U/mL，pH 8. 0 PB溶解稀释)，25μL样品溶液(40μg·mL－1)。 冰浴5min后， 加15μL ATCI（0.6mM）及15μL DTNB（1.5mM）。37℃孵育60min后，用酶标仪在 412 nm下测定其吸光度值。根据下式计算抑制率:酶活性抑制率% = [A空白- (A样品- A背景)] / A空白× 100式中A空白：不加样品反应后的吸收值；A样品：加入样品反应后的吸收值；A背景：只加样品的吸收值。3)实验结果表2结果发现：本专利技术的优选方案如下：维吾尔药广枣经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:10，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:17，体积比）洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:17，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。4、乙酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物的提取方法研究1）提取溶剂的种类研究分别用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机溶剂提取，并测试提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性，实验结果如下：表3研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。2）提取溶剂的用量研究分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性，结果如下：表4活性提取物的提取所用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。3）干燥方法的研究分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物进行干燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。表5因此，广枣乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物的制备方法为：维吾尔药广枣经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:10，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:17，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:17，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种广枣提取物，其特征为，广枣经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，用100:10的二氯甲烷‑甲醇混合溶剂洗脱，继用100:17的二氯甲烷‑甲醇混合溶剂洗脱，100:17的二氯甲烷‑甲醇混合溶剂洗脱液干燥即得。
【技术特征摘要】
1. 一种广枣提取物，其特征为，广枣经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，用100:10的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，继用100:17的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，100:17的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱液干燥即得。2. 权利要求1所述广枣提取物，其特征，先用100:10的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，继用100:17的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，100:17的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱液干燥即得。3. 如权利要求1或2所述的一种维吾尔药广枣提取物，其特征为先用100:10的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，继用100:17的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，100:17的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱液干燥即得。4. 如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药广枣提取物，其特征为，提取用有机溶剂为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、或乙醇水混合溶剂。5. 如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药广枣提取物...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，张珂，李国玉，黄健，赵玉倩，陈娟，何芮，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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