本发明专利技术公开了一种农药残毒快速检测试剂盒、稳定剂的制备方法及胆碱酯酶酶粉的制备方法，其包括胆碱酯酶酶粉、稳定剂、底物、显色剂和缓冲剂，所述胆碱酯酶酶粉为胆碱酯酶与稳定剂的复合物，所述胆碱酯酶为乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的混合物，所述稳定剂为羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、牛血清白蛋白及苯甲酸钠的复合物，所述显色剂为双硫二硝基苯甲酸，所述缓冲剂由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠混合组成。本发明专利技术通过在胆碱酯酶里添加稳定剂，使之与胆碱酯酶结合为胆碱酯酶酶粉，大大延长常温存放时间，实现在有效期内可以进行常温运输、存放，酶活性高，稳定性好，检测方便。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及农药残留检测
，尤其是涉及一种农药残毒快速检测试剂盒、稳定剂的制备方法及胆碱酯酶酶粉的制备方法。
技术介绍
随着农业生产建设的快速发展，农药的广泛使用有效对抗病虫害保证粮食蔬菜的增收，但是与此同时农药的过量使用、残留引发的一系列食品安全问题也日益倍受关注。为了确保人民群众的身体健康和生命财产不受影响，因此有必要对食品中农药残留情况进行检测。目前，检测农药残留的技术分为两大类：一是定量检测技术，另外一种是定性的快速检测技术。定量检测技术的主要方法有：气相色谱法、薄层色谱法、分光光度法等；定性的快速检测技术方法主要是靠农药残毒快速检测试剂盒盒。由于定量检测所涉及的仪器设备贵昂，操作步骤复杂，并且需要专业技术人员操作，因此定量检测只能停留在一些高级的检测机构中使用，难以覆盖所有基层领域，因此快速检测技术的研究备受青睐。目前对于农药残留的快速检测产品的开发也有一些专利，中国专利02159668.9农药残毒检测试剂盒、其制备方法公开一种包括乙酰胆碱酯酶、保护剂、底物与显色剂的快速检测试剂盒；中国专利200510090386.0农药残毒检测用液体酶试剂及其制备方法与使用方法公开有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂的组分：胆碱酯酶、缓冲溶液和稳定剂；中国专利200910038036.8一种农药残毒快速检测试剂盒盒公开一种包含乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶混合物的农药残毒快速检测试剂盒盒；中国专利201110064951.1适用于酶抑制法农药残留检测的样品前处理方法及农药检测方法和检测盒公开一种方法包括将待测样品粉碎，加入提取液，震荡，使样品中的农药残留转移至提取液中，在提取液中加入农药残留增强剂。应用上述专利技术专利虽然在小区域范围内解决了部分农产品的有机磷和氨基 甲酸酯类的农药残留问题，但是上述这些专利产品存在以下缺点：胆碱酯酶在常温下容易失去活性，无法进行常温运输贮存，需要额外添加冷冻设备确保胆碱酯酶在运输贮存过程中降低胆碱酯酶的失活速率，无形中增加了额外的运输贮存成本。
技术实现思路
基于此，有必要针对现有技术的不足，提供一种农药残毒快速检测试剂盒、稳定剂的制备方法及胆碱酯酶酶粉的制备方法，其酶活性高，稳定性好，检测方便，大大延长常温存放时间，实现在有效期内可以进行常温运输、存放，可广泛应用于各级食品放心工程检测机构、蔬菜批发市场、蔬菜生产基地、农贸市场、超市、学校、工厂及机关食堂等。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种农药残毒快速检测试剂盒，包括胆碱酯酶酶粉、底物、显色剂和缓冲剂，所述胆碱酯酶酶粉为胆碱酯酶与稳定剂的复合物，所述胆碱酯酶为乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的混合物，所述稳定剂为羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、牛血清白蛋白及苯甲酸钠的复合物，所述底物为氯化硫代乙酰胆碱、溴化硫代乙酰胆碱、碘化硫代乙酰胆碱、氯化硫代丁酰胆碱、溴化硫代丁酰胆碱、碘化硫代丁酰胆碱中的的一种或两种或三种混合物，所述显色剂为双硫二硝基苯甲酸，所述缓冲剂由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠混合组成。一种稳定剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)、将羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、苯甲酸钠按一定的重量比进行混合；2)、在步骤1)中加入蒸馏水，加热搅拌至羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、苯甲酸钠完全溶解到蒸馏水中形成混合液；3)、将在步骤2)中的混合液冷却至室温后，在混合液中加入牛血清白蛋白，搅拌至牛血清白蛋白完全溶解形成稳定剂。一种胆碱酯酶酶酶粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)、取鳗鱼肉切丁，捣碎匀浆，在温度为4℃下静置8小时；2)、将静置后的鳗鱼肉在离心机中高速离心，经过盐析、凝胶层析提取出乙酰胆碱酯酶酶和丁酰胆碱酯酶酶的混合物B；3)、在上述混合物中加入一定比例的稳定剂形成混合物C，再按照混合物C与水的重量比1～10：100～500进行溶解，在温度为-50℃～-70℃环境下冷冻干燥30～48小时后得到胆碱酯酶酶粉。综上所述，本专利技术农药残毒快速检测试剂盒、稳定剂的制备方法及胆碱酯酶酶粉的制备方法通过在胆碱酯酶里添加稳定剂，使之与胆碱酯酶结合为胆碱酯酶酶粉，大大延长常温存放时间，实现在有效期内可以进行常温运输、存放，酶活性高，稳定性好，检测方便，可广泛应用于各级食品放心工程检测机构、蔬菜批发市场、蔬菜生产基地、农贸市场、超市、学校、工厂及机关食堂等。具体实施方式为能进一步了解本专利技术的特征、技术手段以及所达到的具体目的、功能，下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细描述。本专利技术农药残毒快速检测试剂盒包括胆碱酯酶酶粉、底物、显色剂和缓冲剂，所述胆碱酯酶酶粉为胆碱酯酶与稳定剂的复合物，所述胆碱酯酶为乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的混合物，所述稳定剂为羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、牛血清白蛋白及苯甲酸钠的复合物，所述底物为氯化硫代乙酰胆碱、溴化硫代乙酰胆碱、碘化硫代乙酰胆碱、氯化硫代丁酰胆碱、溴化硫代丁酰胆碱、碘化硫代丁酰胆碱中的的一种或两种或三种混合物，所述显色剂为双硫二硝基苯甲酸，所述缓冲剂由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠混合组成。所述胆碱酯酶是从鳗鱼肉中提取得到，经冷冻干燥后变成粉剂，通过添加稳定剂，实现了农药残毒快速检测试剂盒在常温下运输及存放。所述稳定剂与胆碱酯酶的重量比例为1：15～300。所述稳定剂成分中羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、牛血清白蛋白、苯甲酸钠的重量比为0.002～0.05：0.1～8：0.05～0.2:0.015～0.05:0.005～0.25：0.05～1.5：0.001～0.05。所述缓冲剂中磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的重量比为10～19：0.5～1，具体 地，所述磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的重量比为18：1。所述稳定剂的制备方法包括如下几个步骤：1)、将羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、苯甲酸钠按一定的重量比配成混合物A；2)、在步骤1)中加入蒸馏水，在40～60℃的温度下加热搅拌至羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、苯甲酸钠完全溶解到蒸馏水中形成混合液；3)、将在步骤2)中的混合液冷却至室温后，在混合液中加入牛血清白蛋白，搅拌至牛血清白蛋白完全溶解形成稳定剂。所述蒸馏水与混合物A的重量比为5～20：1～5。所述胆碱酯酶酶酶粉的制备方法包括如下几个步骤：1)、取鳗鱼肉切丁，捣碎匀浆，在温度为4℃下静置8小时；2)、将静置后的鳗鱼肉在离心机中高速离心，经过盐析、凝胶层析提取出乙酰胆碱酯酶酶和丁酰胆碱酯酶酶的混合物B；3)、在上述混合物中加入一定比例的稳定剂形成混合物C，再按照混合物C与水的重量比1～10：100～500进行溶解，在温度为-50℃～-70℃环境下冷冻干燥30～48小时后得到适用于常温运输存放的胆碱酯酶酶粉。所述混合物C中稳定剂与混合物B的重量比为1：15～300。为了更好的理解本专利技术的实质，以下将结合具体实验，进一步描述本专利技术农药残毒快速检测试剂盒的灵敏度及稳定性，从胆碱酯酶酶粉在常温下存放的活性变化情况及胆碱酯酶酶粉对几种农药标准品的测试结果来进一步进行说明。具体实验如下将稳定剂成分中的羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、牛血清白蛋白、苯甲酸钠的重量比设置为0.本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种农药残毒快速检测试剂盒，其特征在于：包括胆碱酯酶酶粉、底物、显色剂和缓冲剂，所述胆碱酯酶酶粉为胆碱酯酶与稳定剂的复合物，所述胆碱酯酶为乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的混合物，所述稳定剂为羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、牛血清白蛋白及苯甲酸钠的复合物，所述底物为氯化硫代乙酰胆碱、溴化硫代乙酰胆碱、碘化硫代乙酰胆碱、氯化硫代丁酰胆碱、溴化硫代丁酰胆碱、碘化硫代丁酰胆碱中的的一种或两种或三种混合物，所述显色剂为双硫二硝基苯甲酸，所述缓冲剂由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠混合组成。
【技术特征摘要】
1.一种农药残毒快速检测试剂盒，其特征在于：包括胆碱酯酶酶粉、底物、显色剂和缓冲剂，所述胆碱酯酶酶粉为胆碱酯酶与稳定剂的复合物，所述胆碱酯酶为乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的混合物，所述稳定剂为羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、牛血清白蛋白及苯甲酸钠的复合物，所述底物为氯化硫代乙酰胆碱、溴化硫代乙酰胆碱、碘化硫代乙酰胆碱、氯化硫代丁酰胆碱、溴化硫代丁酰胆碱、碘化硫代丁酰胆碱中的的一种或两种或三种混合物，所述显色剂为双硫二硝基苯甲酸，所述缓冲剂由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠混合组成。2.根据权利要求1所述的农药残毒快速检测试剂盒，其特征在于：所述稳定剂与胆碱酯酶的重量比例为1：15～300。3.根据权利要求1所述的农药残毒快速检测试剂盒，其特征在于：所述稳定剂成分中羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、牛血清白蛋白、苯甲酸钠的重量比为0.002～0.05：0.1～8：0.05～0.2:0.015～0.05:0.005～0.25：0.05～1.5：0.001～0.05。4.根据权利要求1所述的农药残毒快速检测试剂盒，其特征在于：所述羟丙基甲基纤维素、蔗糖、正辛醇、明胶、戊二醛、牛血清白蛋白、苯甲酸钠的重量比设置为0.01：1：0.1：0.01：0.02：0.5：0.01。5.根据权利要求1所述的农药残毒快速检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲剂中磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的重量比为10～19：0....
【专利技术属性】
技术研发人员：陈英就，陈雄波，
申请(专利权)人：陈英就，
类型：发明
国别省市：广东;44
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