本发明专利技术属医药技术领域，具体涉及一种黄芪丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗阿尔茨海默病(AD)等丁酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。维吾尔药黄芪经溶剂提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷洗脱，继用100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱液干燥，即得丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属医药
，具体涉及一种黄芪丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的制备方法和其制备预防及治疗阿尔茨海默病(AD)等丁酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。
技术介绍
黄芪为豆科草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的根，具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功效。在高通量筛选的过程中，本专利技术意外地发现黄芪具有很好的抑制丁酰胆碱酯酶的活性，该活性提取物及其组合物有望应用于治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种黄芪提取物。本专利技术还提供了以黄芪提取物为主要活性成分的组合物。本专利技术同时提供了黄芪提取物及其组合物的制备和在制备丁酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。本专利技术是通过如下技术方案实现的：维吾尔药黄芪经溶剂提取，提取液浓缩后，用硅胶（SiO2）柱分离，上样后的硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱（二氯甲烷-甲醇，比例见表1），各二氯甲烷-甲醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其丁酰胆碱酯酶抑制活性，意外地发现先用二氯甲烷洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱得到的二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有丁酰胆碱酯酶抑制活性的作用。优选的，先用二氯甲烷洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱得到的二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱液干燥，即得丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。即丁酰胆碱酯酶抑制活性的提取物，可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该黄芪丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层色谱（TLC）分析结果见图1， TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。具体，发现过程如下：1、黄芪经甲醇超声提取物的制备取维吾尔药黄芪20 g，经100 mL溶剂超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0210B，样品上柱：1.5569g，拌样硅胶2.7 g，空白硅胶10 g，二氯甲烷-甲醇系统。2、二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果取维吾尔药黄芪20 g，经100 mL溶剂超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0210B，1.5569g上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅胶柱色谱，拌样硅胶2.7 g，空白硅胶10 g，玻璃柱内径2.0cm，二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱（条件见表1），柱体积11 mL，每个梯度洗脱100mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，二氯甲烷：甲醇梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1），显色方法：香草醛-硫酸显色。表13、抑制丁酰胆碱酯酶活性筛选方法和结果1) 实验条件a、材料：DMSO(二甲基亚砜) (科密欧公司)；KH2PO4、K2HPO4·3H2O(广东汕头市西陇化工厂)；BuChE酶(美国Sigma公司)；PNPG(美国Sigma公司)b、实验仪器：多功能酶标仪Bio-RadModel 680型(Bio-RadLaboratories Inc.)2) 实验方法和过程样品处理：将1 mg待测样品溶于20μL二甲基亚砜(DMSO)作为母液，取1μL母液加入249μL蒸馏水配成200μg·mL-1的溶液。丁酰胆碱酯酶抑制活性测定方法：在96孔板上测定样品的BuchE抑制活性。具体操作如下：在96孔板中依次加入25μL PBS (100 mM, pH 8.0)，25μL BuChE (≥0.04 U/mL, pH 8.0 PBS溶解稀释)，25μL样品溶液(200μg·mL-1)。加25μL BuSCH(1.6 mM, pH 8.0 PBS溶解稀释)及25μL DTNB(4.0 mM, pH 8.0 PBS溶解稀释)，37℃孵育60 min后，用酶标仪在412 nm下测定其吸光度值。样品抑制百分率按以下公式计算:酶活性抑制率% = [A空白- (A样品- A背景)] / A空白× 100式中A空白：不加样品反应后的吸收值；A样品：加入样品反应后的吸收值；A背景：只加样品的吸收值。3)实验结果表2结果发现：本专利技术的优选方案如下：维吾尔药黄芪经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。该丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。4、丁酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物的提取方法研究1）提取溶剂的种类研究分别用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机溶剂提取，并测试提取物的丁酰胆碱酯酶抑制活性，实验结果如下：表3研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。2）提取溶剂的用量研究分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/体积比）有机溶剂提取，并测试提取物的丁酰胆碱酯酶抑制活性，结果如下：表4活性提取物的提取所用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。3）干燥方法的研究分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抑制丁酰胆碱酯酶活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物进行干燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。表5因此，黄芪丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物的制备方法为：维吾尔药黄芪经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷洗脱，洗脱2-50倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱，洗脱2-50倍柱体积，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为该活性提取物。以上条件最优为先用二氯甲烷洗脱20倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比）洗脱15倍柱体积。其中，1) 提取物提取用有机溶剂可以为甲醇、石油醚、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂，最优条件为甲醇和95%乙醇。活性提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍（重量/体积比）。2)提取物干燥方法可以为真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。5. 黄芪抑制丁酰胆碱酯酶活性提取物（先用二氯甲烷洗脱，继用100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱后的提取物）的医药用途研究按优化的黄芪丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物制备方法制备的活性提取物，经测试，其丁酰胆碱酯酶抑制活性为IC50=32.1μg/mL。由于丁酰胆碱酯酶抑制剂具有治疗阿尔茨海默病等方本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种黄芪提取物，其特征为，黄芪经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷洗脱，继用100:1的二氯甲烷‑甲醇混合溶剂洗脱，100:1的二氯甲烷‑甲醇混合溶剂洗脱液干燥，即得丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。
【技术特征摘要】
1. 一种黄芪提取物，其特征为，黄芪经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷洗脱，继用100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱液干燥，即得丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。2. 如权利要求1所述黄芪提取物，其特征为，先用二氯甲烷洗脱，继用100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱液干燥，即得丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。3. 如权利要求1或2所述的一种维吾尔药黄芪提取物，其特征为先用二氯甲烷洗脱，继用100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，100:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱液干燥，即得丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。4. 如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药黄芪提取物，其特征为，提取用有机溶剂为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、或乙醇水混合溶剂。5. 如权利要求1-3任何一项所述的一种维吾尔药黄芪...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，朱芸，李国玉，黄健，张珂，郑雅鑫，张彩，陈娟，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。