一种有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留胆碱酯酶免疫层析速测卡制造技术

本发明专利技术公开了一种有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留胆碱酯酶免疫层析速测卡。所述速测卡包括底板和封盖板；所述底板上包括若干组缓冲垫，每个缓冲垫上横跨若干个样品垫，紧接着样品垫还依次排列粘贴有酶垫、检测膜和吸水垫；所述封盖板上包括若干个加样孔和若干个可视窗；其中，所述检测膜上表面并列包被有机磷与氨基甲酸酯类农药蛋白偶联物和抗生物酶抗体IgG。本发明专利技术的速测卡操作简单、快速，可以同时快速检测样品中的多种有机磷及氨基甲酸酯类农药，灵敏度为0.008～0.987mg/kg，3～5分钟即可观察结果，适合于对蔬菜、水果和环境水样中的有机磷及氨基甲酸酯类农药进行快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留胆碱酯酶免疫层析速测卡
本专利技术属于农药检测
更具体地，涉及一种有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留胆碱酯酶免疫层析速测卡。
技术介绍
农药是农业生产中用来防治病虫危害的重要农业生产资料，广泛用于果品、蔬菜以及粮食的生产中。农药在保证农副产品的丰收方面发挥了十分重要的作用。但是，近年来农药的滥用也给环境和人类的身体健康带来了巨大的威胁。越来越多的国家逐渐高度重视农药的滥用。由于农药种类繁多且复配使用现象普遍，建立可同时检测多个对象的多残留检测方法十分必要。仪器分析方法可以实现多残留检测，但是需要昂贵的仪器设备及专业操作人员，且样品前处理繁琐费时、检测费用高，难以满足高通量、快速、在线检测的需要。目前，发展快速多残留检测方法成为弥补仪器分析法之不足的重要手段。从20世纪80年起，基于有机磷和氨基甲酸酯类农药抑制胆碱酯酶活性原理而建立的“酶抑制法”开始被广泛应用于农产品中有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速筛查，由于其简便快速的特性而迅速得到十分广泛的应用。然而由于其灵敏度及稳定性较差已经逐步退出市场，目前仅韩国等少数发展中国家仍在使用。基于抗原抗体特异性结合反应的免疫分析法也能够用于部分农药的检测，但由于抗体制备困难，费用昂贵，并且不稳定，目前只能对某一种或一小类农药可以检测。发展具有更广谱性和稳定性的快速检测方法迫在眉睫。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种农药多残留生物酶法速测卡，可以实现同时、简便、快速地检测食品和环境中的有机磷及氨基甲酸酯类农药，可应用水果、蔬菜及环境水样中多种农药残留的快速检测。本专利技术的目的是提供一种有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留胆碱酯酶免疫层析速测卡。本专利技术另一目的是提供所述速测卡在检测有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留方面的应用。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：一种有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留胆碱酯酶免疫层析速测卡，所述速测卡包括底板1和封盖板9；所述底板1上包括若干组缓冲垫2，每个缓冲垫2上横跨若干个样品垫3（所述缓冲垫2一面粘贴在底板1上，缓冲垫2另一面粘贴样品垫3），紧接着样品垫3还依次排列有酶垫4、检测膜5和吸水垫8；所述样品垫3、酶垫4、检测膜5和吸水垫8依次粘贴在底板1上；所述封盖板9上包括若干个加样孔10和若干个可视窗11；其中，所述检测膜5上表面并列包被有机磷与氨基甲酸酯类农药蛋白偶联物（检测线6）和抗生物酶抗体IgG（质控线7）。进一步地，所述检测膜5上包被有机磷与氨基甲酸酯类农药蛋白偶联物作为检测线6，包被1条抗生物酶抗体IgG线作为质控线7，有机磷与氨基甲酸酯类农药蛋白偶联物既可以与胆碱酯酶结合，也可以被抗生物酶抗体IgG识别。其中，优选地，所述有机磷与氨基甲酸酯类农药蛋白偶联物的结构如下：其中，优选地，所述偶联蛋白为牛血清蛋白（BSA）或卵清蛋白（OVA）。优选地，所述抗生物酶抗体IgG中的生物酶为来源于家蚕并通过基因改造的重组乙酰胆碱酯酶。具体更优选地，所述生物酶的获得方法如下：本专利技术根据已知家蚕乙酰胆碱酯酶的氨基酸序列，加以适当改动，并最大限度地利用了大肠杆菌偏爱的密码子，设计并合成了新的乙酰胆碱酯酶基因bmace片段。具体地，设计的新的乙酰胆碱酯酶基因bmace片段的序列如下所示：ATGATCAACTACTGATCCTAGGCTGATCCTAATAGATTCTGATCCTATTGATCCTAAGGTACCCTATACCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCCTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCCTATCCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCCCCTATACTAGCCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCGTGATCCTATGATCCTATGATCGATCTTGATCCCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCCTAAGGATGATCCTACTTACGTAGCTATTGATCCTAGGATGATCCTATATGACCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCTTGATCCTATGATGATCCTATCCTACCTAGGCCGTATGACGTAGCTAGTACGTGATCCTAACCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCTCGATCTGATCCCTACCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCTCCTATACTAGGTGATCCTATGACCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCTCCTATGATCACCTATACTAGGTGATCCTATGACCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCTCCTATGATCCTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCTGATCCTACTAGATTGATCCTACGACCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCCCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCCCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCCCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCTCCCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCGTAGTAGCTGATCCTACTAGCTAGCTAGCTTCCCTTGATCCTATAGCTGATTGATCCTACTATAGTGATCCTACCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCCCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCGATCTGATCCTGATCCTATGATCCTATACTAGGTGATCCTATGATCCTATGATCCTATGATCCTATATTGCTTTG。然后将该设计的新的乙酰胆碱酯酶基因bmace重组到融合表达载体（优选地，所用的融合表达载体可以是pET28(a)，pUC118或pEZZ318等）中，并转化到大肠杆菌中，通过大肠杆菌的培养获得了具有与天然乙酰胆碱酯酶相同生物活性的表达产物重组乙酰胆碱酯酶。更具体地，上述重组乙酰胆碱酯酶的制备步骤如下：（1）序列设计：如上所述，设计好新的乙酰胆碱酯酶基因bmace片段；（2）构建重组表达载体：用NdeⅠ、BamHⅠ将新的乙酰胆碱酯酶基因bmace片段从重组质粒pUC118-CM中切下，插入到用NdeⅠ、BamHⅠ消化的载体pET28(a)中，转化大肠杆菌BL21，得到的重组质粒命名为pET28(a)-CM；（3）转化大肠杆菌：借助NdeⅠ、BamHⅠ消化载体pET28(a)的作用，将重组质粒pET28(a)-CM转化大肠杆菌BL21；（4）培养大肠杆菌获得重组乙酰胆碱酯酶：重组质粒pET28(a)-CM转化大肠杆菌BL21后，乙酰胆碱酯酶在T7启动子控制下，与一个分子量仅2000的小肽融合表达，最终获得重组乙酰胆碱酯酶。另外，优选地，所述抗生物酶抗体IgG为兔多克隆抗体，其制备方法为将生物酶乳化后免疫新西兰大白兔，经过筛选获得的兔抗血清。另外，优选地，所述底板1为一面涂有不干胶且不吸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留胆碱酯酶免疫层析速测卡，其特征在于，所述速测卡包括底板 1和封盖板9；所述底板 1上包括若干组缓冲垫2，每个缓冲垫2上横跨若干个样品垫3，紧接着样品垫3还依次排列有酶垫4、检测膜5和吸水垫8；所述样品垫3、酶垫4、检测膜5和吸水垫8依次粘贴在底板1上；所述封盖板9上包括若干个加样孔10和若干个可视窗11；其中，所述检测膜5上表面并列包被有机磷与氨基甲酸酯类农药蛋白偶联物和抗生物酶抗体IgG。

【技术特征摘要】
1.一种有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留胆碱酯酶免疫层析速测卡，其特征在于，所述速测卡包括底板(1)和封盖板(9)；所述底板(1)上包括若干组缓冲垫(2)，每个缓冲垫(2)上横跨若干个样品垫(3)，紧接着样品垫(3)还依次排列有酶垫(4)、检测膜(5)和吸水垫(8)；所述样品垫(3)、酶垫(4)、检测膜(5)和吸水垫(8)依次粘贴在底板(1)上；所述封盖板(9)上包括若干个加样孔(10)和若干个可视窗(11)；其中，所述检测膜(5)上表面并列包被有机磷与氨基甲酸酯类农药蛋白偶联物和抗生物酶抗体IgG；所述检测膜(5)上包被有机磷与氨基甲酸酯类农药蛋白偶联物作为检测线(6)，包被1条抗生物酶抗体IgG线作为质控线(7)；所述酶垫吸附有胶体金或量子点标记的胆碱酯酶；所述有机磷与氨基甲酸酯类农药蛋白偶联物的结构如下：。2.根据权利要求1所述有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留胆碱酯酶免疫层析速测卡，其特征在于，所述抗生物酶抗体IgG中的生物酶为来源于家蚕并通过基因改造的重组乙酰胆碱酯酶。3.根据权利要求1所述有机磷及氨基甲酸酯类农药多残留胆碱酯酶免疫层析速测卡，其特征在于，所述抗生物酶抗体IgG为兔多克隆抗体，其制备方法为将生物酶乳化后免疫新西兰大白兔，经过筛选获得的兔抗血清。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨金易，曾道平，
申请(专利权)人：广州万联生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44