本发明专利技术公开一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法及该方法在果蔬农药残留快速检测中的应用，所述的在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法即在酶抑制反应后将有色的果蔬样液排走，使之不进入快速检测中的显色反应体系，从而排除果蔬本底色对最终检测结果的干扰。所述的在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法在果蔬农药残留快速检测中的应用，由于酶抑制反应、酶催化底物水解反应全部都在同一个封闭的反应器内进行，因此环境因素变化带来的影响也控制在最低限度，使得检测结果相对更准确。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法及其在果蔬农药残留快速检测中的应用，属农药残留快速检测领域。
技术介绍
使用酶抑制法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留已经有50余年的历史，其基本原理是根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯 酶的活性。根据这一毒理学原理，目前果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测主要采用胆碱酯酶作为检测用酶，并同时采用光度法来检测该酶被抑制的程度，从而判断出样品中农药残留的闻低。然而，果蔬样品本身通常带有颜色，即本底色，为保证样品中可能含有的微量农药残留尽可能地被萃取出来，在提取样品溶液过程中一般要经过切碎、搅打等混合操作，因此果蔬样液中也会有颜色。虽然目前在光度法快速检测农药残留时，已扣除了样液颜色引起的吸光度值，但由于果蔬样液颜色较深时，可能会超过光度计的有效测量极限，即便未超极限，本底过高也会给检测带来严重干扰，导致检测结果准确度差或根本无法检测。
技术实现思路
本专利技术的目的之一为了解决上述的技术问题而提供一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法及其在果蔬中农药残留量快速检测的应用，该排除果蔬本底色干扰的方法应用后，对果蔬中农药残留量检测的准确性高，并且检测结果不受果蔬本底色的干扰。本专利技术的技术方案一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法，具体操作步骤如下 (1)、将待测果蔬样品溶液推入固定化有农药快速检测所用酶的反应器内，于该农药快速检测所用酶的最适温度范围内进行酶抑制反应； 所述的农药快速检测所用酶为胆碱酯酶、非胆碱酯酶的B-酯酶、酪氨酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶或乙酰乳酸合酶； 其中所述的胆碱酯酶可为乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶； 其中农药快速检测所用酶在反应器中的固定化方法可以采用物理吸附、包埋、共价结合、交联或两种以上固定化方法的结合使用，如吸附+交联、吸附+包埋等；本专利技术的实施例中仅以物理吸附中的离子交换吸附或共价结合中碳二亚胺法进行举例，但并不限于其他的固定化方法在本专利技术中的应用； (2)、步骤(I)中酶抑制反应完成后将足量的缓冲液持续推入该固定化有农药快速检测所用酶的反应器，将经酶抑制反应后的果蔬样品溶液持续带出固定化有农药快速检测所用酶的反应器至废液池，直至待测果蔬样品溶液颜色全部被带走为止，从而实现了排除果蔬农药残留快速检测中果蔬本底色的干扰。上述的一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法在果蔬农药残留快速检测中的应用，具体包括如下步骤 (I)、将待测果蔬样品溶液推入固定化有农药快速检测所用酶的反应器内，于农药快速检测所用酶的最适温度范围内的某个恒定温度下进行酶抑制反应； 所述的固定化有农药快速检测所用酶的反应器，该反应器可以实现液体自由进出反应器，而固定化的农药快速检测所用酶不能流出反应器； 所述的农药快速检测所用酶为胆碱酯酶、非胆碱酯酶的B-酯酶、酪氨酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶或乙酰乳酸合酶； 其中所述的胆碱酯酶可为乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶； 所述的待测果蔬样品溶液的制备过程如下 切碎的果蔬按料液质量体积比I :1-5加入磷酸盐缓冲液混合，在室温下搅拌，经过滤后获得的滤液即为待测果蔬样品溶液； (2 )、步骤(I)酶抑制反应后将足量的磷酸盐缓冲液持续推入该固定化有农药快速检测所用酶的反应器，将经酶抑制反应后的果蔬样品溶液带出固定化有农药快速检测所用酶的反应器至废液池，直至待测果蔬样品溶液颜色全部被带走为止，而固定化的农药快速检测所用酶留在反应器中； (3 )、步骤(2 )果蔬样品溶液颜色全部被带走后，将底物推入固定化有农药快速检测所用酶的反应器中，于农药快速检测所用酶的最适温度范围内进行酶催化水解反应； (4)、步骤(3)酶催化水解反应完成后推入适量磷酸盐缓冲液，将固定化有农药快速检测所用酶的反应器中酶催化水解反应产生的产物全部带出至显色池中，加入显色剂与其进行显色反应后，测定吸光度值A3 ； (5)、将等比例的磷酸盐缓冲液和显色液推入显色池混合，作为空白对照，测得吸光度值Al ； 待测果蔬样品溶液和对照样液都使用该吸光度值作为空白对照吸光度； (6)、用等量的磷酸盐缓冲液代替待测果蔬样品溶液作为对照样液，重复上述步骤(I)至步骤(4)，测定显色池中的显色反应后所得的对照样液的吸光度值A2; (7)、通过上述的测定结果，计算农药快速检测所用酶的抑制率，并根据国标GBT5009. 199-2003进行判断农药超标或符合标准抑制率= / (A2-A1) *100% ； 其中，Al为空白对照的吸光度值； A2为对照样液的吸光度值； A3为待测果蔬样品溶液最终经显色反应后的吸光度值。另外，本专利技术仅以农药快速检测所用的乙酰胆碱酯酶为例，应用本专利技术的在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法在果蔬农药残留量快速检测方面进行应用。但并不限制其他适用于农药快速检测所用的非胆碱酯酶的B-酯酶、酪氨酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶或乙酰乳酸合酶等酶应用本专利技术的在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法在果蔬农药残留量快速检测方面的应用，只是在使用其他适用于农药快速检测所用的非胆碱酯酶的B-酯酶、酪氨酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶或乙酰乳酸合酶等酶时，对于其作用的底物及显色所用的显色液，缓冲液等都要根据所用的酶进行相应的调整，但整个机理是一致的。本专利技术的有益技术效果 本专利技术的一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法，由于是将果蔬残留农用检测所用的酶进行固定化后再进行酶抑制反应，并且在酶抑制反应后用足量的缓冲液持续推入该固定化有农药快速检测所用酶的反应器，将酶抑制反应后的样品溶液带出固定化有农药快速检测所用酶的反应器，因此使得样品溶液本底色即随之被带走，并进一步的到达了避免果蔬本身颜色对农药残留量快速检测过程中后续检测结果的影响。进一步，本专利技术的一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法在果蔬农药残留快速检测中，由于通过酶抑制反应后，将待测的果蔬样液排空，使样液脱离与底物的水解反应及显色反应产物的接触，因此由于含有残留农药的待测样品溶液颜色物质与最终反应产物完全被物理隔离，可完全排除待测果蔬样液本身颜色对检测结果的干扰。 进一步，本专利技术的一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法在果蔬中农药残留量快速检测中的应用，由于酶抑制反应、酶催化底物水解反应全部都在同一个封闭的反应器内进行，因此环境因素变化带来的影响也控制在最低限度，使得检测结果相对更准确。具体实施例方式下面通过实施例，对本专利技术进一步详细描述，但不用来限制本专利技术的范围。所述方法如无特别说明，均为常规方法。所述材料如无特别说明，均能从公开商业途径购买得到。本专利技术的各实施例中所用的试剂的配制如下 1、pH8.0的磷酸盐缓冲溶液按每升计算，分别取11. 9g无水磷酸氢二钾与3. 2g磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解后并定容至IOOOmL即可； 2、显色剂溶液分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15. 6mg碳酸氢钠，用20mL, pH8. 0的磷酸盐缓冲溶液溶解，4°C冰箱中保存； 3、底物溶液取25.Omg硫代乙酰胆碱，加本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种在果蔬农药残留快速检测中排除果蔬本底色干扰的方法，其特征在于具体包括如下步骤：（1）、将待测果蔬样品溶液推入固定化有农药快速检测所用酶的反应器内，于该农药快速检测所用酶的最适温度范围内进行酶抑制反应；所述的农药快速检测所用酶为胆碱酯酶、非胆碱酯酶的B？酯酶、酪氨酸酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶或乙酰乳酸合酶；其中所述的胆碱酯酶为乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶；所述的固定化有农药快速检测所用酶的反应器，该反应器可以实现液体自由进出反应器，而固定化的农药快速检测所用酶不能流出反应器；（2）、将足量的缓冲液持续推入该固定化有农药快速检测所用酶的反应器，将步骤（1）进行酶抑制反应后的果蔬样品溶液持续带出固定化有农药快速检测所用酶的反应器至废液池，直至待测果蔬样品溶液颜色全部带走为止。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赖智勇，
申请(专利权)人：赖智勇，
类型：发明
国别省市：
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