【技术实现步骤摘要】
基于AuNPS@AgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器及其 构建与应用
本专利技术属于电化学免疫分析
，具体涉及一种基于AuNPsOAgNCs纳米复合 材料的免疫电化学传感器及其构建与应用方法。
技术介绍
免疫分析通过结合高亲和性的抗原抗体，是特异性检测临床样本中癌症标记物的 一种强大的分析工具。电化学免疫传感器因其使用仪器简单、快速响应和轻便而受到特别 关注，信号放大方法已经广泛用于发展超灵敏的免疫传感器检测肿瘤标志物。基于纳米材 料的多酶探针是最受欢迎的放大检测信号的方法，以过氧化物酶为最常见，但是酶易受温 度、湿度和环境的影响，且容易失活、费时，制备和纯化过程昂贵，由于这些因素的影响，酶 探针的实际应用受到限制。因此，开发稳定、经济和制备简单的探针对免疫传感器的实际应 用非常重要。越来越大的研究者致力于模拟酶的研究，模拟酶比蛋白质稳定，制备更加经济 划算，具有巨大的潜在应用价值，能够用作日常护理和一般体检的诊断试剂盒。磁性纳米粒 子、氧化石墨烯、二氧化铈纳米粒子等许多纳米材料都具有类过氧化物酶的催化活性，已有 文献报道...
【技术保护点】
一种基于AuNPs@AgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器的制备方法，其特征在于，以单链寡聚核苷酸为模板，合成寡聚核苷酸稳定的银纳米簇；带巯基的互补DNA单链通过Au‑S键结合到金纳米粒子表面，再两条互补单链杂交，得到AuNPs@AgNCs复合纳米杂化物；然后以石墨烯为基底固定PSA抗体1，PSA作为分析物，AuNPs@AgNCs标记抗体2，由于抗原抗体之间的特异性结合，得到用于检测乳腺癌患者血清PSA的免疫传感器；或者以石墨烯为基底固定PSA抗体1，free‑PSA和total‑PSA分别作为分析物，AuNPs@AgNCs标记抗体2，由于抗原抗体之间的特异性结合，得到用...
【技术特征摘要】
1. 一种基于AuNPsOAgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器的制备方法，其特征在 于，以单链寡聚核苷酸为模板，合成寡聚核苷酸稳定的银纳米簇；带巯基的互补DNA单链通 过Au-S键结合到金纳米粒子表面，再两条互补单链杂交，得到AuNPsOAgNCs复合纳米杂化 物；然后以石墨烯为基底固定PSA抗体1，PSA作为分析物，AuNPsOAgNCs标记抗体2,由于 抗原抗体之间的特异性结合，得到用于检测乳腺癌患者血清PSA的免疫传感器； 或者以石墨烯为基底固定PSA抗体l，free-PSA和total-PSA分别作为分析物，AuNPsO AgNCs标记抗体2,由于抗原抗体之间的特异性结合，得到用于检测前列腺癌或前列腺增生 患者血清free-PSA和total-PSA的免疫传感器。2. 根据权利要求1所述的基于AuNPsOAgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器的制备 方法，其特征在于， (1) DNA-AgNCs的制备：模板链S2和AgN03溶液加入到磷酸缓冲液中，然后，NaBH4溶液 加入到上述溶液中，得到的溶液震荡，然后放在4°C冰箱中于暗处过夜； (2) AuNPs@AgNCs纳米复合材料的制备：DNA单链S1和链霉亲和素标记的金纳米粒 子混合，震荡后，静置，得到的混合物离心，移去上层清液，加 PBS分散沉淀物，得到S1/ SA-AuNPs ;然后，将步骤（1)得到的S2/AgNCs加入到Sl/SA-AuNPs溶液中加热，冷却至室 温，即制得； (3) AuNPs@AgNCs纳米复合材料标记Ab2 :AuNPs@AgNCs纳米复合材料与生物素修饰的 单克隆抗体Ab2混合反应，得到的AuNPS@AgNCs/Ab 2纳米复合材料溶液离心，用PBS缓冲溶 液洗涤，备用； (4) 免疫传感器的制备：将裸玻碳电极抛光打磨至镜面，超声洗涤，吹干，用于电极修 饰；将壳聚糖修饰的石墨烯纳米杂化片分散液滴于裸玻碳电极表面，自然烘干；再将1-乙 基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的混合液滴于裸玻碳电极 表面，冲洗；然后，抗体Abjf于电极表面，37°C下密封培养后，冲洗；为了阻塞多余的活性 基团及抗原与电极之间的非特异性结合，将电极进一步在BSA中于37°C下培养后，冲洗，不 同浓度的PSA溶液分别滴加到电极表面，37°C下培养，冲洗掉未结合的PSA分子，将制备的 AuNPs@AgNCs/Ab2滴到电极表面，37°C培养后，冲洗，即可制得用于检测乳腺癌患者血清PSA 的电极； 制备用于检测前列腺癌或前列腺增生患者血清free-PSA和total-PSA的免疫传 感器时，将2支同样经过上述处理的裸玻碳电极表面分别滴加不同浓度的free-PSA和 total-PSA溶液，37 °C下培养，冲洗掉未结合的free-PSA和total-PSA分子，将制备的 AuNPs@AgNCs/Ab2滴到电极表面，37°C培养后，冲洗，即可。3. 根据权利要求2所述的基于AuNPsOAgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器的制备 方法，其特征在于， 0嫩-六8从：8的制备具体过程：40-6(^1^10(^]\1的模板链52:3'-六〇6〇六了6〇：66(：〇〇： TAA CTC CCC-5'和0· 6-1. 0 μ L 50mM AgN03溶液加入到pH = 7. 0-8. 0磷酸缓冲液中，使得 Ag+ :S2 = 7-9,然后，0. 6-1. 0μ L 50mM新制的NaBH4溶液加入到上述溶液中，得到的溶液强 烈震荡至少lmin，得到的S2/AgNCs放在4°C冰箱中于暗处过夜。4. 根据权利要求2所述的基于AuNPsOAgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器的制备 方法，其特征在于， AuNPsOAgNCs纳米复合材料的制备具体过程：20-30yL 40μΜ DNA单链SI :3'-SH-TTT 17 6〇：660 416 061'-5'和20-3(^1^链霉亲和素标记的金纳米粒子混合，震荡至少111后， 静置至少24h，得到的混合物以6000-8000r/min离心至少lOmin，移去上层清液，加 PBS分 散沉淀物，再次离心，如此重复至少两次，最后将沉淀物分散在PBS中，得到Sl/SA-AuNPs ; 然后，40-6(^1^2(^]?52/^8从：8加入到40-6(^1^2(^]\131/54-411咿8溶液中，混合液在 85-95°C下加热至少5min，慢慢冷却至室温，即可。...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓留，韩雅静，李理，刘又年，卢红梅，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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