一种布拉氏酵母菌表面展示系统及其构建方法技术方案

本发明专利技术涉及一种蛋白表面展示系统，具体提供了一种以布拉氏酵母菌为表面展示平台表达外源蛋白质的表面展示系统，本系统从布拉氏酵母菌，购自法国百科达制药厂，进口药品注册证号为s20040038，的DNA组中扩增得到AGA1基因以及AGA2基因，并以pPIC9AGA2质粒为模板扩增AGA2基因表达核,用布拉氏酵母菌的AGA2基因替换上述AGA2基因表达核中的AGA2基因。将获得的AGA1基因和替换后的AGA2基因表达核连接到基础质粒pSP上，分别在超表达启动子TEF1和PGK1控制之下，由此得到能够在布拉氏酵母菌表面表达的通用表面展示表达质粒pSDSb。本发明专利技术能够持续表达和Aga2p融合的异源蛋白质并展示在布拉氏酵母菌地表面，从而超表达某些异源蛋白，将其作为病原活疫苗载体和研究蛋白与蛋白之间的相互作用具有其它微生物载体不可取代的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种蛋白表面展示系统，具体提供了一种能够表达展示异源蛋白质的布拉氏酵母菌(Saccharomyces boulardii)表面展示系统及其构建方法。
技术介绍
布拉氏酵母菌是法国科学家亨利(Henri Boulard)于1920从印尼蒸枝等水果中分离的一种非致病性酵母菌。自1982年Ducluzeau等首次发表布拉氏酵母菌作为益生菌的实验结果以来，对布拉氏酵母菌的抗毒止泻、维持宿主胃肠道微生态平衡、提高机体非特异性免疫力的临床试验和研究越来越多。布拉氏酵母菌现已被公认为最为有价值的益生菌之一，被世界许多国家广泛应用于医学临床和畜牧业生产中。目前，布拉氏酵母菌作为微生态制剂在欧美等广泛用于防治儿童和旅行者的各种腹泻如梭状芽孢杆菌、霍乱弧菌、轮状病毒等感染和抗生素引起的肠炎所致的腹泻。其制剂应用于畜牧业，可有效降低病原菌和有关毒素的浓度，增强非特异性免疫功能，提高生产性能。作为饲料添加剂的应用已得到包括中国、欧盟在内的世界许多国家的认可。随着人们对健康和生态环境的高度重视及在畜禽养殖中的进一步研究，布拉氏酵母菌在医学和畜牧业中必将有更广阔的应用前景。然而，对于布拉氏酵母菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种布拉氏酵母菌表面展示系统，其特征在于：该系统以pSP为基础质粒,将AGA1基因，其基因序列如Seq?ID?No:8所示，AGA2基因表达核，其基因序列如Seq?ID?No:10所示，克隆到基础质粒pSP上构建布拉氏酵母菌表面展示通用表达质粒pSDSb，该通用表达质粒含有在布拉氏酵母菌表面表达和表面展示的所有元件，异源蛋白与该通用质粒的Aga2p的C端融合从而表面展示在布拉氏酵母菌细胞壁上。

【技术特征摘要】
1.一种布拉氏酵母菌表面展不系统，其特征在于该系统以pSP为基础质粒，将AGAl基因，其基因序列如Seq ID No:8所示，AGA2基因表达核，其基因序列如Seq ID No:10所示，克隆到基础质粒PSP上构建布拉氏酵母菌表面展示通用表达质粒pSDSb，该通用表达质粒含有在布拉氏酵母菌表面表达和表面展示的所有元件，异源蛋白与该通用质粒的Aga2p的C端融合从而表面展示在布拉氏酵母菌细胞壁上。2.根据权利要求1所述的展示系统，其特征在于表达质粒pSDSb转化布拉氏酵母菌后，质粒中的Agalp通过GPI锚定在细胞壁上，Aga2p的N端通过两个二硫键与Agalp连接，异源蛋白通过与Aga2p的C端融合从而表...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵孝民，王甜甜，孙慧，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：