一种利用大肠杆菌系统制备小鹅瘟病毒样颗粒的方法技术方案

本发明专利技术涉及一种利用大肠杆菌系统可溶性表达小鹅瘟VP2蛋白制备小鹅瘟病毒样颗粒方法，一种可溶性表达小鹅瘟病毒VP2蛋白的方法，对鹅细小病毒VP2基因进行密码子优化，定点突变包括将密码子AGA突变为CGC和GGA突变为GGT,并克隆到pET‑Sumo载体上，构建重组表达载体pET‑Sumo‑VP2，并将pET‑Sumo‑VP2转化至原核表达菌，通过IPTG在37℃下诱导，获得可溶性重组VP2重组蛋白；将重组蛋白用ULP酶酶切后通过Ni柱纯化得到纯化的VP2蛋白。电镜结果显示酶切后的VP2蛋白可形成小鹅瘟病毒样颗粒，并且纯化后的VP2蛋白具有良好的反应原性，可用于小鹅瘟病毒基因工程亚单位疫苗的制备。

【技术实现步骤摘要】
一种利用大肠杆菌系统制备小鹅瘟病毒样颗粒的方法
本专利技术涉及生物
，更具体地，涉及一种利用大肠杆菌系统可溶性表达小鹅瘟VP2蛋白制备小鹅瘟病毒样颗粒方法。
技术介绍
鹅细小病毒（Gooseparvovirus,GPV）感染起初不同国家的学者将其称为鹅流感，又称鹅瘟或小鹅瘟、鹅肠炎、鹅肝炎、鹅传染性心肌炎等。本病名称的多样性反映了其病理学特征的多样性和对易感动物危害的严重性。不同日龄的雏鹅感染病毒后会出现不同的临床症状，分别表现为慢性型、亚急性型和急性型，其中急性型病程经过可以导致被感染鹅100%死亡。小鹅瘟病毒（Goslingplaguevirus，GPV）属细小病毒科，病毒粒子无囊膜，核酸为单股DNA，GPV基因组两个主要的开放阅读框中的3-ORF编码3种结构蛋白VP1、VP2、和VP3，其中VP2是病毒的主要衣壳蛋白，具有高度的保守性，能诱导机体产生中和抗体，是GPV主要的免疫保护性抗原。针对小鹅瘟传统诊断和治疗措施中存在的诸如使用的高免血清产量低、成本高、易发生排异；卵黄抗体存在污染外源病毒的风险：弱毒疫苗则存在毒力返强的的风险等的诸多问题，而基因工程疫苗能够克服上述方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可溶性表达小鹅瘟病毒VP2蛋白的方法，其特征在于，对鹅细小病毒VP2基因进行密码子优化得到优化后的VP2基因序列，扩增所述的优化后的VP2基因序列，并克隆到pET‑Sumo载体上，构建表达载体pET‑Sumo‑VP2，将pET‑Sumo‑VP2转化至原核表达菌，通过IPTG在37℃下诱导获得可溶性重组VP2蛋白，将重组VP2蛋白用ULP酶进行30℃酶切2 h,使VP2蛋白与Sumo标签分开，酶切后的蛋白用Ni柱纯化，可得到纯化的VP2蛋白，将纯化好的VP2蛋白透析到PBS中，通过电镜观察，该重组蛋白VP2可形成病毒样颗粒。

【技术特征摘要】
1.一种可溶性表达小鹅瘟病毒VP2蛋白的方法，其特征在于，对鹅细小病毒VP2基因进行密码子优化得到优化后的VP2基因序列，扩增所述的优化后的VP2基因序列，并克隆到pET-Sumo载体上，构建表达载体pET-Sumo-VP2，将pET-Sumo-VP2转化至原核表达菌，通过IPTG在37℃下诱导获得可溶性重组VP2蛋白，将重组VP2蛋白用ULP酶进行30℃酶切2h,使VP2蛋白与Sumo标签分开，酶切后的蛋白用Ni柱纯化，可得到纯化的VP2蛋白，将纯化好的VP2蛋白透析到PBS中，通过电镜观察，该重组蛋白VP2可形成病毒样颗粒。2.根据权利要求1所述的可溶性表达小鹅瘟病毒VP2蛋白的方法，其特征在于，所述密码子优化采用定点突变的手段，定点突变包括将密码子AGA突变为CGC和GGA突变为GGT，定点突变的部位包括位于鹅细小病毒VP2如下氨基酸残基位点:第39位、第40位、第57位、第58位、第157位、第257位、第403位、第483位和第487位，优化后的VP2基因为SEQIDNo：1。3.根据权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于，将原核表达菌在培养至OD600值为0.5～0.7后，加入IPTG进行诱导。4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，IPTG诱导的浓度为0.25mM，诱导时间为6h。5.根据权利要求1至4任一项所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲光刚，沈志强，金婷婷，李书光，武曰星，王长江，
申请(专利权)人：山东省滨州畜牧兽医研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37