本发明专利技术采用了物理、化学等多重灭活技术，使用酸化水稀释法结合辛酸法、高速离心、超滤等现代生物技术，将蛋黄中的免疫球蛋白进行有效的分离纯化。不含任何有害物质和外源性污染，安全性高，不会在注射部位残留，对机体无刺激及毒副作用，对胴体品质无影响。携带方便，使用时无需解冻，用灭菌生理盐水溶解至冻干前体积即可，注射方便快捷；抗逆性强，效价稳定，保存时间长。常温条件下保存24个月抗体仍然有效，2～8℃条件下可大大延长保存期。本专利为联合抗体，可以对小鹅瘟等多种鹅传染疾病起到良好的预防及治疗效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及禽类生物制药
，具体地说，本专利技术涉及。
技术介绍
我国是水禽生产大国，尤其是养鹅业。近几年来随着产业结构的调整，养鹅业发展的速度更快，但疫病也不断增加。在多种鹅传染病中，小鹅瘟、鹅禽流感、鹅副黏病毒病、鹅出血性坏死性肝炎、鹅鸭瘟病毒感染等均具有很高的发病率和死亡率，常造成巨大的经济损失，严重影响养鹅业的健康发展。由于多种传染病的发生，鹅病少、好养鹅的格局已经改变为鹅病多、生物制剂少、病死率高及难养的局面。小鹅瘟是由小鹅瘟病毒(鹅细小病毒，Goose Parvovirus, GPV)引起的一种雏鹅的急性或者亚急性败血性传染病，以渗出性肠炎、肝、肾、心等实质器官炎症为特征，致病性强，死亡率高。本病最早由方定一教授在1956年发现，在我国的江苏、安徽、广东、广西、湖南、湖北、河南、河北、山东、吉林、内蒙古等地流行，目前已在匈牙利、法国、德国、意大利、荷兰、英国、俄罗斯等世界范围内的养鹅国家流行。该病在新疫区往往导致雏鹅的100%死亡，在老疫区也会导致雏鹅40% 60%的死亡率，造成巨大的经济损失，是养鹅业威胁最大的疾病之一。小鹅瘟病毒主要自然感染I月龄以内的雏鹅，10日龄以内的雏鹅最为易感，死亡率可达到90% 100%，一月龄以上的鹅少有发病，发病雏鹅从粪便中排出大量的病毒，可通过直接或者间接接触而迅速传播。该病流行有一定的周期性，大流行每2 4年一次，小流行一年一次。1977年Kisary指出，20日龄以内的雏鹅免疫功能并未完全发育成熟，导致弱毒疫苗免疫后难以达到理想的预防效果，通过免疫种鹅虽然可使雏鹅获得较高的母源抗体保护，可由于种鹅的个体差异以及饲养管理较差，导致母源抗体参差不齐，所以在一些管理较差的地区仍经常发生该病的流行。在这种情况下，利用小鹅瘟抗体进行被动保护来预防该病的发生，是一种除疫苗之外非常有效的方法。传统的蛋黄抗体制备方法存在如下缺点1.蛋黄内含有一些可以垂直传播的病原，如在蛋黄抗体生产中未进行严格消毒和灭活，即可导致人为传毒。2.蛋壳表面污染的常在菌，用粗制方法无法灭活；3.高浓度蛋黄液为污染菌的繁殖提供了最有利的条件；4.贮存不便，贮存成本较高；5.含有大量蛋白质、磷脂等大分子结构物质，容易引起注射后难以吸收，并会造成肿胀、出血等，影响抗体作用；6.使用极不方便，因其粘度大，易堵塞注射器。所以通过更先进的方法制备高纯度高效价的精致蛋黄抗体尤为必要。IgY分离的关键是除去蛋黄中高含量的脂肪及脂蛋白，以获得水溶性组分，目前常用的方法有以下几种:有机物沉淀法、有机溶剂抽提法、天然胶法、中链脂肪酸法、去污剂分离法、水稀释法等。IgY的提纯主要通过超滤法或沉淀法来完成。沉淀法所用的沉淀剂可以是无机物、有机物或有机溶剂，也可以采用多种方法联合沉淀，或超滤法和沉淀法结合提取。IgY的纯化目前主要采用层析方法:凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等等。从目前工艺路线上看水稀释法、无机物沉淀法、超临界气体提取 、有机物沉淀法工艺路线较短，而其他方法需两步或更多步骤获的沉淀；从工艺条件上看有机溶剂沉淀法需-20°C冷冻，超临界气体法需要超临界气体抽提设备，对设备要求较高；从原材料成本看，天然胶法采用的是天然胶，成本较高；从回收率和纯度方面看，水稀释法和超临界气体法的产品纯度和回收率都较高。精制蛋黄抗体在使用时，目前市场多以一种液态抗体为主，而且绝大部份都没有很好的对蛋黄液内的脂肪进行提取，致使抗体在常温下保存随着温度和时间的增长抗体的效价受到相当大的影响。有时没有使用冷链运输，使得液态抗体效价降低，不能达到理想的效果。市场上有称小鹅瘟、鹅副粘病毒病二联抗体销售，但效果有待确实。其它产品未见有应用于大规模生产。对于这些疾病及其混合感染仍缺乏相关高效的生物制品。刘力威等人，“鸡抗小鹅瘟病毒卵黄抗体的研制与应用，[J].黑龙江畜牧兽医，2006，(9):78 80”，采用黑龙江兽医研究所第一研究室自制的GPV免疫用抗原、GPV琼括抗原及阳性血清和抗小鹅瘟鹅源血清琼括抗体(效价416)以及蛋鸡制备鸡抗小鹅瘟卵黄抗体，将免疫蛋用自来水洗去蛋表面的污物，再用0.5%新洁尔灭或拜洁等溶液浸泡消毒，去蛋壳、蛋清，收集卵黄。卵黄\生理盐水\氯仿按1: 2: I的比例依次加入充分混匀，置室温静止。待卵黄及氯仿沉淀，析出上清液即为卵黄抗体提取液，收集上清液，按卵黄抗体量加入0.01%柳硫汞(终浓度)和1000IU/mL青霉素、链霉素，加入后充分摇匀，分装，4°C保存。该方法制备工艺简单便于操作，但蛋黄提取、纯化、浓缩、灭活等仅靠一步操作难以得到高纯度，高效价的抗体。不足以保证最终产品的使用及储存效果。专利CN1927886A公开了一种防治小鹅瘟病的异源抗小鹅瘟蛋黄抗体的制备方法，该方法改变了使用母鹅进行高免用于制备抗小鹅瘟病的先例，改用鸭和鸡以及效价大于1: 16的自制琼括抗体，制备抗小鹅瘟蛋黄抗体，包括小鹅瘟种毒的制取，高免抗原的制取，蛋黄抗体的制取。该方法所制备的抗小鹅瘟蛋黄抗体的效价大于1: 16，但是该方法没有采用冷冻干燥或其它技术，并缺少保存期试验数据，无法得知此方法制备的液体蛋黄抗体保存条件及保存期的效果。专利CN1509765A提供了蛋黄抗体冻干制剂，该制剂是抗产肠素大肠西氏菌(ETEC)的三个菌型K88/K89/987P的多价蛋黄抗体冻干制剂。该制剂是利用酸化蒸馏水去除高免蛋黄中的脂类，再用 少量氯仿去除残余不溶性物质，经超滤浓缩及冻干制得。该技术冻干过程中，未使用冻干保护剂，所获得的产品所需保存温度较低，保存成本较高，保存时间受限。专利CN101113176A公开了一种鸡传染性法氏囊精制蛋黄冻干抗体的制备方法，该方法将所获得的高免蛋黄液用蒸馏水稀释、灭活后，再进行萃取、离心及杀死外源病毒的处理，然后加入黄芪多糖、多粘菌素、山梨醇、甘露醇作为保护剂进行冻干，制得固体鸡传染性法氏囊精制蛋黄抗体。采用该方法制得的抗体需要在2 8°C条件下保存，而且冻干过程中保护剂组成较多，配制过程复杂，成本较高。因此，目前缺乏一种高纯度、高效价、能够有效控制多种鹅传染病，便于保存，且具有较好的存储效果，生产方法简单，成本低廉，易于操作，并可应用于大规模生产的抗小鹅瘟蛋黄抗体的制备技术。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对上述现有技术的不足，提供一种抗小鹅瘟蛋黄抗体的制备方法。该方法通过对蛋黄抗体液进行提取、脱脂、冻干，制备出高纯度、高效，存储效果好，便于保存使用的抗小鹅瘟蛋黄抗体。为此，本专利技术提供了一种一种抗小鹅瘟蛋黄抗体，其中，所述抗小鹅瘟蛋黄抗体为异源抗小鹅瘟脱脂蛋黄抗体浓缩提取液的冻干制剂为实现本专利技术，本专利技术还提供了一种抗小鹅瘟蛋黄抗体的制备方法，包括:步骤A，将小鹅瘟病毒HN株接种到制备抗原用材料进行孵育，并将孵育后的鹅胚冷却，将所收获的鹅胚尿囊液经透析浓缩制得无污染小鹅瘟种毒液；步骤B，向由无污染小鹅瘟种毒液经分离纯化及灭活获得的纯化灭活的无污染小鹅瘟种毒液中加入油溶性表面活性剂，完全溶解后制成水相；将白油/油溶性表面活性剂混合物与硬脂酸铝混合、灭菌后制成油相；将水相与油相混合乳化，加入硫柳汞，制成小鹅瘟灭活油乳剂免疫原；步骤C，用小鹅瘟灭活油乳剂免疫原免疫非免疫产蛋鸡，收集高免蛋本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗小鹅瘟蛋黄抗体，其特征在于，所述抗小鹅瘟蛋黄抗体为异源抗小鹅瘟脱脂蛋黄抗体浓缩提取液的冻干制剂。
【技术特征摘要】
1.一种抗小鹅瘟蛋黄抗体，其特征在于，所述抗小鹅瘟蛋黄抗体为异源抗小鹅瘟脱脂蛋黄抗体浓缩提取液的冻干制剂。2.一种根据权利要求1所述的抗小鹅瘟蛋黄抗体的制备方法，包括: 步骤A，将小鹅瘟病毒HN株接种到制备抗原用材料进行孵育，并将孵育后的鹅胚冷却，将所收获的鹅胚尿囊液经透析浓缩制得无污染小鹅瘟种毒液； 步骤B，向由无污染小鹅瘟种毒液经分离纯化及灭活获得的纯化灭活的无污染小鹅瘟种毒液中加入油溶性表面活性剂，完全溶解后制成水相；将白油/油溶性表面活性剂混合物与硬脂酸铝混合、灭菌后制成油相；将水相与油相混合乳化，加入硫柳汞，制成小鹅瘟灭活油乳剂免疫原； 步骤C，用小鹅瘟灭活油乳剂免疫原免疫非免疫产蛋鸡，收集高免蛋； 步骤D，从收集高免蛋中收集蛋黄液、并进行灭菌及灭活处理制得灭菌灭活高免蛋黄液； 步骤E，从灭菌灭活高免蛋黄液中提取蛋黄抗体，经灭活，过滤除菌，超滤除病毒以及超滤浓缩，制得脱脂蛋黄抗体浓缩提取液； 步骤F，冷冻干燥脱脂蛋黄抗体浓缩提取液/冻干保护剂混合物，制备固态脱脂蛋黄抗体； 其特征在于:步骤F冷冻干燥脱脂蛋黄抗体浓缩提取液/冻干保护剂混合物的程序包括将装有脱脂蛋黄抗体浓缩提取液/冻干保护剂混合物的西林瓶放入冻干箱；将温度降低到_40°C ;在_40°C保持4h ;以1.(TC /h的速度升温18 20h ;以4 6°C /h的速度升温至25°C，干燥，制得固态脱脂蛋黄抗体。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:步骤F中所述冻干保护剂包括甘露醇和海藻糖，其中甘露醇的含量为2wt % 5wt %，海藻糖的含...
【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，白朝勇，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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