一种用于治疗小鹅瘟的生物制品及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种用于治疗小鹅瘟的生物制品及其制备方法，该技术方案基于抗原抗体复合物对病毒的良好防治效果而设计，并针对小鹅瘟病毒的自身特性确定以VP3蛋白为抗原、以卵黄抗体为抗体的组合方案，在此基础上进一步设计了二者的具体制备方法。该技术方案在原有小鹅瘟卵黄抗体的基础上，加入小鹅瘟VP3蛋白抗原，制成复合物。这种小鹅瘟抗原抗体复合物可以抵抗病原微生物引起的持续性感染，避免抗生素的过量使用，突破母源抗体的干扰，减少活疫苗引起的强烈应激反应，由于使用的抗原不是完整的病毒抗原，而是小鹅瘟的VP3蛋白制成的抗原，可以减少全毒向外散毒的危险，更加安全可靠有效。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制品
，进一步涉复合型生物制品在抗病毒方面的治疗，具体涉及一种用于治疗小鹅瘟的生物制品及其制备方法。
技术介绍
小鹅瘟(Gosling Plague，GP)又称为鹅细小病毒感染(Goose Parvovirus Infection)，是由鹅细小病毒(Goose Parvovirus，GPV)引起的雏鹅急性或亚急性败血性传染病。本病主要侵害4～20天的雏鹅和雏番鸭，以急性肠炎及肝、肾、心脏实质脏器病变为主要特征，具有传播快、发病率和致死率高的特点。该病是危害养鹅业最严重的传染病之一，每年都有不同程度的流行，造成相当大的经济损失，严重危害着集约化养鹅业的持续、稳定、健康发展。目前应用于小鹅瘟的抗感染药品主要包括抗生素、化学合成药品、中药制剂、弱毒活疫苗及卵黄抗体等抗病毒感染生物制剂。对于小鹅瘟病都有一定的疗效，但也有一定的弊端。例如，抗生素容易发生药物残留及沉积，可以通过动物性食物进入人体，导致耐药性增强，抗生素类药物不能更好的发挥作用，引起人类疾病；化学合成药品毒副作用大，不利于动物的身体健康；中药制剂药效慢、用量大、质量不易稳定，使用起来不方便；卵黄抗体对于混合感染和继发感染的治疗作用较弱；活疫苗存在着毒力返强的可能，有潜在的传染性和致病性，且疫苗存在与母源抗体相互作用的问题，接种时间及方式等都可能影响最终的免疫效果。抗原抗体复合物是指由特异性高免血清或抗体按恰当的比例与相应抗原混合而成。这类复合物兼有预防及治疗的双重作用。这种复合物不但能抵抗病原微生物引起的持续性感染，避免抗生素及中药制剂的弊端，而且还可以突破母源抗体干扰，并可减少活疫苗引起的强烈应激反应，还可以与其他疫苗联合使用，做到多病共治。有文献报道，抗原抗体复合物制成的疫苗还可以接种于较大日龄的禽类胚中进行疾病预防，可诱导胚体产生较高水平抗体，同时对出雏率及胚体的生长发育没有影响，对不同高低抗体水平母源抗体的鸡胚免疫经攻毒试验也证明复合物疫苗非常有效。这给今后的禽类疫病防治提供了新的方法，这种方法相较于传统常规疫苗，对鸡的副反应更小，可提高免疫的安全性。针对抗原抗体复合物的作用机理尚不明确，有研究推测抗原抗体复合物可同时激发机体的细胞免疫和体液免疫，而细胞免疫在攻毒保护时起着重要作用。一般认为：①抗原抗体复合物的作用机制与复合物可直接与滤泡树突状细胞结合的能力有关。Jeurissen调查了IBD复合物疫苗中IBDV在不同靶器官中的感染情况，结果表明：免疫复合物进入机体后能与树突状细胞结合并长时间滞留在细胞表面，树突状细胞不能內质化复合物，因而复合物中的病毒也得到保护，可以免受淋巴细胞的攻击。②由于复合物中抗体分子的Fc片段与抗原递呈细胞的Fc受体有很高的亲和性，因而使复合物中病毒更有效的与抗原递呈细胞相结合，复合物被吞噬和內质化后病毒不会被杀灭，最后激活B淋巴细胞和T淋巴细胞，刺激B淋巴细胞成为抗体分泌细胞，从而引起强烈的体液免疫反应和细胞免疫应答。虽然抗原抗体复合物的作用机理未有确切答案，但多项研究结果都显示，抗原抗体以适当的比例结合为抗原抗体复合物后，能突破母源抗体的干扰，对免疫鸡能提供很好的保护，免疫效果比常规疫苗更好。目前此项技术已成功用于鸡传染性法氏囊病、新城疫及呼肠病毒病疫苗的研制，并取得了很好的效果。VP3蛋白是小鹅瘟病毒的主要结构蛋白，约占总蛋白的80％。VP3蛋白是小鹅瘟病毒主要的免疫保护性抗原，能诱导机体产生具有中和作用的抗体，利用GPV的VP3基因构建基因疫苗免疫雏鹅，可以诱导机体产生良好的细胞免疫应答，VP3基因具有较高的遗传稳定性，国内外的鹅细小病毒VP3基因也具有较高相似性，这可能是目前小鹅瘟只有一种血清型的分子基础，为基因工程苗的研制提供了可行性。目前，常规疫苗主要使用的都是全病毒进行试验，存在散毒的危险。
技术实现思路
本专利技术旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种用于治疗小鹅瘟的生物制品及其制备方法，以解决现有技术的小鹅瘟治疗药物疗效较低的技术问题。本专利技术要解决的另一技术问题是现有技术的小鹅瘟治疗药物安全性较低。为实现以上技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一种用于治疗小鹅瘟的生物制品，所述生物制品中含有小鹅瘟病毒V3蛋白和小鹅瘟病毒卵黄抗体。作为优选，所述生物制品中琼扩效价为1:32的小鹅瘟病毒VP3蛋白与琼扩效价为1:32的小鹅瘟病毒卵黄抗体体积比为1:1。作为优选，所述生物制品的剂型为液体制剂、油水混合制剂或冻干固体制剂。作为优选，所述液体制剂是通过以下方法制备的：取配方量的小鹅瘟病毒VP3蛋白及小鹅瘟病毒卵黄抗体加入至PBS缓冲液中，而后无菌过滤。作为优选，所述油水混合制剂是通过以下方法制备的：将含配方量小鹅瘟病毒VP3蛋白和小鹅瘟病毒卵黄抗体的水相与油相佐剂缓慢混合乳化。作为优选，所述冻干固体制剂是通过以下方法制备的：取配方量的小鹅瘟病毒VP3蛋白、小鹅瘟病毒卵黄抗体混合液体加入冻干保护剂，而后冷冻干燥。一种上述生物制品的制备方法：包括以下步骤：1)制备小鹅瘟病毒VP3蛋白抗原溶液。2)利用小鹅瘟病毒灭活疫苗免疫蛋鸡，制备高免卵黄抗体。3)将步骤1)所得的小鹅瘟病毒VP3蛋白抗原溶液与步骤2)所得的小鹅瘟病毒卵黄抗体混合。作为优选，还包括步骤4)：向步骤3)所得的混合物中加入佐剂。作为优选，步骤1)具体包括以下操作：利用GenBank中的小鹅瘟病毒毒株VP3蛋白表达基因共保守区域，设计上下游引物，利用小鹅瘟病毒总RNA反转录获得的cDNA为模板，进行PCR，将扩增产物克隆至表达载体后进行VP3蛋白的表达，表达产物经纯化检测后即得VP3蛋白抗原溶液。作为优选，步骤2)具体包括以下操作：用小鹅瘟病毒灭活疫苗对产蛋鸡进行免疫，每两次免疫之间间隔14-21天，三免后14天收集高免鸡蛋，并进行琼扩双向扩散试验检测，琼扩效价≥1：64的高免蛋加辛酸等进行卵黄抗体提取，提取后除菌浓缩即得到所述高免卵黄抗体。本专利技术提供了一种用于治疗小鹅瘟的生物制品及其制备方法，该技术方案基于抗原抗体复合物对病毒的良好防治效果而设计，并针对小鹅瘟病毒的自身特性确定以VP3蛋白为抗原、以卵黄抗体为抗体的组合方案，在此基础上进一步设计了二者的具体制备方法。该技术方案在原有小鹅瘟卵黄抗体的基础上，加入小鹅瘟VP3蛋白抗原，制成复合物。这种小鹅瘟抗原抗体复合物可以抵抗病原微生物引起的持续性感染，避免抗生素的过量使用，突破母源抗体的干扰，减少活疫苗引起的强烈应激反应，由于使用的抗原不是完整的病毒抗原，而是小鹅瘟的VP3蛋白制成的抗原，可以减少全毒向外散毒的危险，更加安全可靠有效。本专利技术所获得的抗原抗体复合物具有安全性好，免疫效果佳，免疫作用产生快，保护率高的特点。附图说明图1是本专利技术实施例6中不同实验组实验动物的血清抗体水平比较。图2是本专利技术实施例7中不同实验组实验动物发病率、死亡率、保护率比较。具体实施方式以下将对本专利技术的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。实施例1(小鹅瘟卵黄抗体IgY制备)(1)高免蛋的制备：利用小鹅瘟灭活疫苗对产蛋鸡进行免疫，免疫剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗小鹅瘟的生物制品，其特征在于所述生物制品中含有小鹅瘟病毒V3蛋白和小鹅瘟病毒卵黄抗体。

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗小鹅瘟的生物制品，其特征在于所述生物制品中含有小鹅瘟病毒V3蛋白和小鹅瘟病毒卵黄抗体。2.根据权利要求1所述的一种用于治疗小鹅瘟的生物制品，其特征在于所述生物制品中琼扩效价为1:32的小鹅瘟病毒VP3蛋白与琼扩效价为1:32的小鹅瘟病毒卵黄抗体体积比为1:1。3.根据权利要求1所述的一种用于治疗小鹅瘟的生物制品，其特征在于所述生物制品的剂型为液体制剂、油水混合制剂或冻干固体制剂。4.根据权利要求3所述的一种用于治疗小鹅瘟的生物制品，其特征在于所述液体制剂是通过以下方法制备的：取配方量的小鹅瘟病毒VP3蛋白及小鹅瘟病毒卵黄抗体加入至PBS缓冲液中，而后无菌过滤。5.根据权利要求3所述的一种用于治疗小鹅瘟的生物制品，其特征在于所述油水混合制剂是通过以下方法制备的：将含配方量小鹅瘟病毒VP3蛋白和小鹅瘟病毒卵黄抗体的水相与油相佐剂缓慢混合乳化。6.根据权利要求3所述的一种用于治疗小鹅瘟的生物制品，其特征在于所述冻干固体制剂是通过以下方法制备的：取配方量的小鹅瘟病毒VP3蛋白、小鹅瘟病毒卵黄抗体混合液体加入冻干保护剂，而...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘冠星，苏建东，杨保收，付旭彬，李守军，
申请(专利权)人：天津瑞普生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12