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一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强葡萄糖氧化酶分泌的方法技术

技术编号:8484855 阅读:362 留言:0更新日期:2013-03-28 04:14
本发明专利技术公开了一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强分泌表达葡萄糖氧化酶的方法,属于基因工程技术领域。本发明专利技术采用基因重组技术将毕赤酵母UPR关键基因Haclp与下游靶基因Pdi1、Ero1、Lhs1、Kar2、Sil1分别克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZα与pPIC3.5K,并转化入Pichia?pastoris?GS115-pPIC9K-GOD保藏编号为CCTCC?NO:M?2012266的菌株中,经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在3L发酵罐上酶活585U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。

【技术实现步骤摘要】

一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强分泌表达葡萄糖氧化酶的方法,属于基因工程

技术介绍
葡萄糖氧化酶是生物领域中最主要的工具酶之一。自1967年Updike和Hicks将GOD固定在Clark氧电极表面,将其应用于血糖测定以来,GOD被广泛应用于食品、饲料、医药等许多相关领域。在食品工业中,由于氧的存在,引起许多不利于产品质量的化学反应,并为许多微生物生长创造了条件。目前,许多国家已将GOD作为工人的安全抗氧剂而广泛应用于各种食品和食品加工工艺中。虽然用途多样,GOD的作用主要在于除葡萄糖、除氧、形成过氧化氢、形成葡萄糖酸四个方面。利用其专一氧化酶的原理,制成葡萄糖氧化酶分析仪,能快速准确简易地测定各种食品中的葡萄糖含量,指导生产。在医药工业中,GOD作为试剂盒、酶电极等用于血清(浆)、尿液及脑脊液中葡萄糖的体外定量分析;G0D制成的酶制剂还可用于除去或缓解牙斑、牙垢和龋齿的形成防止口腔疾病和牙病的发生。此外,由于可以催化生成H2O2,还可用于对H2O2敏感的淋巴瘤的导向目标的治疗。GOD还是一种新型的酶饲料添加剂,能够改善动物肠道环境,调节饲粮消化,促进动物生长。含本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强葡萄糖氧化酶分泌的方法,其特征在于,是将毕赤酵母UPR关键基因Haclp连接到毕赤酵母表达载体pPICZα上,将其下游靶基因连接到表达载体pPIC3.5K上,并将下游靶基因表达质粒与Haclp表达质粒一起转化入Pichia?pastoris?GS115?pPIC9K?GOD中得到的基因工程菌。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:陈坚顾磊张娟堵国成沈伊娜闻一凡李梦洁李婷丁雪
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:

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