两个对虾新型表达载体构建方法技术

本发明专利技术公开了两个对虾新型表达载体构建方法。本发明专利技术通过设计基因特异性引物，以对虾WSSV病毒为模板，扩增早期基因启动子IE1不同长度片段IE（-94/+52）和IE（-945/+52）；利用限制性酶切及连接的方法，以IE（-94/+52）和IE（-945/+52）替换真核表达载体pcDNA3.1-GFP的CMV启动子，构建了含对虾病毒启动子的两个新型表达载体pcDNA3.1-IE（-94/+52）-GFP、pcDNA3.1-IE（-945/+52）-GFP。将构建好的表达载体与阳离子脂质体转染试剂TransLipidTM混合肌肉注射对虾，结果证明两种表达载体均能在对虾体细胞良好表达，同时宿主对虾没有呈现任何明显的毒害作用。因此，这两种表达载体可望用于对虾口服疫苗或者对虾细胞生物学的研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及对虾细胞分子生物学研究以及对虾抗病药物开发领域，具体是。
技术介绍
凡纳滨对奸(Litopenaeus vannamei)在我国海水养殖业中占有极为重要的地位。然而，由于对虾病毒的广泛传播，每年给对虾养殖业造成数百亿元的经济损失，严重影响对虾养殖业可持续发展。虽然目前在对虾病原诊断技术方面已取得了较大进展，但是在病毒防治方面仍然没有很好的解决办法。对虾抗病毒药物尚处在研究阶段，主要研究方向有亚单位疫苗、核酸疫苗、卵黄抗体、中草药等，其中，在亚单位疫苗方研究报道较多，VP28蛋白 已在家蚕蛹、昆虫细胞、毕赤酵母菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等不同宿主表达系统内表达，通过腹肌注射或口服途径，发现表达产物对日本对虾、斑节对虾、克氏原螯虾等具有提高免疫力和抗WSSV感染的作用。孟小林等将WSSV衣壳蛋白基因克隆到表达载体pcDNA3. 1，获得重组表达载体pcDNA-VP28,该表达载体转化沙门氏菌(Salmonella typhimurium)后经口服途径进入对虾体内，并使对虾产生了对WSSV的抗病力。攻毒实验表明，口服基因工程菌后第7、15、25天的保护率分别达到83. 3%本文档来自技高网...

【技术保护点】
两个对虾新型表达载体构建方法，其特征是两个对虾新型表达载体是双链环状DNA，是通过改造真核表达载体PCDNA3.1获得的，方法如下：1）引物设计与合成：参照GenBanK中WSSV基因组序列合成WSSV病毒早期基因启动子IE（?94/+52）和IE（?945/+52）引物，见表1：表1引物Tab,1Primer引物由华大基因生物工程有限公司合成；2）IE（?94/+52）和IE（?945/+52）的扩增：PCR反应采用25.0μL体系：WSSV?DNA模板2μL，2xPCR?mix?12.5μL，上下游引物(25μmol/L)各1μL，超纯水8.5μL；IE（?94/+52）PCR反应程序：9...

【技术特征摘要】
1.两个对虾新型表达载体构建方法，其特征是两个对虾新型表达载体是双链环状DNA，是通过改造真核表达载体TCDNA3. I获得的，方法如下 1)引...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎铭，陈晓汉，马春霞，谢达祥，赵永贞，
申请(专利权)人：广西壮族自治区水产研究所，
类型：发明
国别省市：