【技术实现步骤摘要】
利用家蚕生物反应器表达轮状病毒VP6蛋白的方法
本专利技术是一种新的方式生产轮状病毒VP6蛋白的方法以及所用的重组病毒 BmNPV-RVVP6的获得方法。
技术介绍
一、家蚕生物反应器家蚕生物反应器是利用家蚕BmNPV表达系统生产外源蛋白，其外源蛋白表达量高，产物的天然性质好。它没有哺乳类细胞培养系统外源蛋白生产效率低、设备条件要求高等问题，也没有大肠杆菌的内毒素、表达产物糖苷化及生物活性低等缺陷。由于该系统潜在的诸多优势，为人类生产急需的蛋白质类药物、基因工程疫苗和基因工程杀虫剂等提供了崭新的途径，因此近年来受到广泛重视。BmNPV基因组是超螺旋的闭环双链DNA，主要编码100余种结构蛋白和非结构蛋白。多角体蛋白基因不是病毒复制的必需基因，在感染晚期进行高效表达。其编码的多角体蛋白只起到包埋病毒粒子的作用，与病毒粒子的形成没有直接关系。多角体蛋白基因即使部分或全部被其他外源基因取代，仍能形成有感染性的病毒粒子。根据这一特性，将外源基因通过基因操作手段替换BmNPV基因中的多角体蛋白基因，从而使BmNPV在蚕体细胞内大量表达外源蛋白。Bm-BacPAK6 DNA ...
【技术保护点】
重组病毒BmNPV?RVVP6的获得方法，其特征是包括以下步骤：1）、选用A组轮状病毒VP6?基因，该基因编码的序列为SEQ?ID?NO:1所示；2）、构建重组转移载体质粒pBacPAK8?RVVP6；3）、将构建所得的重组转移载体质粒pBacPAK8?RVVP6与已线性化的病毒Bm?BacPAK6?DNA经脂质体介导共转染家蚕细胞，获得重组病毒BmNPV?RVVP6。
【技术特征摘要】
1.重组病毒BmNPV-RVVP6的获得方法，其特征是包括以下步骤 1)、选用A组轮状病毒VP6基因，该基因编码的序列为SEQID NO: I所示； 2)、构建重组转移载体质粒pBacPAK8-RVVP6； 3)、将构建所得的重组转移载体质粒pBacPAK8-RVVP6与已线性化的病毒Bm_BacPAK6DNA经脂质体介导共转染家蚕细胞，获得重组病毒BmNPV-RVVP6。2.根据权利要求I所述的重组病毒BmNPV-RVVP6的获得方法，其特征是所述步骤2)为 VP6基因的PCR扩增产物经纯化后，得纯化后PCR产物，用限制性内切酶EcoR I和BamH I双酶切，随后插入经过同样酶切的转移质粒PBacPAK8中，并转化到大肠杆菌TGl感受态细胞进行阳性菌落筛选，得质粒pBacPAK8-RVVP6。3.根据权利要求2所述的重组病毒BmNPV-RVVP6的获得方法，其特征是...
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