重组人VEGF腺病毒载体及其应用制造技术

构建含人血管内皮生长因子的重组腺病毒载体，可用于治疗严重性冠心病和外周严重性缺血性疾病。方法是将人ＶＥＧＦ．ｃＤＮＡ正向插入到穿梭质粒ｐＨＣＭＶＳＰ１Ａ的ＣＭＶ启动子之下，构建穿梭质粒ｐＡｄ－ｈＶＥＧＦ，后者与ｐＪＭ１７通过脂质体共转染２９３细胞，经同源重组获得含人ＶＥＧＦ基因的重组腺病毒Ａｄ－ｈＶＥＧＦ。通过ＰＣＲ共扩增法鉴别Ａｄ－ｈＶＥＧＦ的正确与否，根据２６０ｎｍ的紫外吸光度（Ａ２６０）计算病毒滴度。结果ＶＥＧＦ．ｃＤＮＡ成功地正向插入到ｐＨＣＭＶＳＰ１Ａ载体中，以重组病毒基因组ＤＮＡ为模板，同时扩增出了５７６ｂｐ的ＶＥＧＦ基因片段和８６０ｂｐ的腺病毒骨架基因片段，证实了Ａｄ－ｈＶＥＧＦ的正确性。测Ａ↓［２６０］为０．０９７，病毒滴度为１．９４×１０↑［１２］ｐｆｕ／ｍｌ。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种质粒型腺病毒载体，其特征在于它含有ＶＥＧＦ基因。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张群林，王家宁，黄永章，彭建华，程辉，
申请(专利权)人：山西德元堂药业有限公司，
类型：发明
国别省市：14[中国|山西]