本发明专利技术涉及医药领域。特别地，本发明专利技术涉及癌症疗法。更特别地，本发明专利技术涉及溶瘤性人腺病毒载体以及包含所述载体的细胞和药物组合物。本发明专利技术还涉及所述载体在制备用于治疗受试者中的癌症的药物中的用途，以及治疗受试者中的癌症的方法。此外，本发明专利技术涉及产生腺病毒载体的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及医药领域。特别地，本专利技术涉及癌症疗法。更特别地，本专利技术涉及溶瘤性人腺病毒载体以及包含所述载体的细胞和药物组合物。本专利技术还涉及所述载体在制备用于治疗受试者中的癌症的药物中的用途，以及治疗受试者中的癌症的方法。此外，本专利技术涉及产生腺病毒载体的方法。
技术介绍
可用外科手术、激素疗法、化学疗法和/或放射疗法治疗癌症，但是在许多情况下，通常表征为晚期的癌症不能用目前的疗法治愈。因此，需要新的靶向癌细胞的方法，例如基因疗法。在过去20年中，基因转移技术得到了密集的检测。癌症基因疗法的目的是将治疗性的基因引入肿瘤细胞中。这些被引入靶细胞中的治疗性基因可以例如，纠正被突变的基因、抑制活跃的致癌基因或对细胞产生其它的性能。适合的外源治疗性基因包括但不限于免疫治疗性基因、抗血管生成性基因、化学保护性基因和“自杀”基因，并且可利用经修饰的病毒载体或非病毒方法(包括电穿孔、基因枪和脂质或聚合物包被)将它们引入细胞。对最优的病毒载体的要求包括找到特定靶细胞并在靶细胞中表达病毒基因组的有效能力。此外，最优的载体必须在靶组织或细胞中保持是有活性的。在过去的几十年中已经开发了病毒载体的所有这些特性并且在生物医学中广泛地研究了例如逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒载体。为了进一步提高肿瘤穿透性和抗肿瘤效果的局部放大，构建了选择性的溶瘤剂， 例如条件性复制的腺病毒。溶瘤性腺病毒是用于治疗癌症的有希望的工具。肿瘤细胞是由于溶瘤性腺病毒在肿瘤细胞中的复制而被所述病毒杀死的，复制的最后时期导致数千的病毒粒子被释放到周围的肿瘤组织中用于有效的肿瘤穿透和脉管再次感染。治疗方法利用了正常细胞和肿瘤细胞之间的分子差异。肿瘤细胞允许病毒的复制而正常的细胞由于病毒基因组中经改造的变化而幸免，所述变化防止在非肿瘤细胞中复制。最优的溶瘤性腺病毒将仅在癌细胞中感染和复制并且将是足够有效的以在免疫应答中和病毒之前杀死所有的癌细胞。制造某些缺失或添加组织特异性启动子可使得病毒更有选择性，而添加转基因可使得方法更有效。的确，除了复制介导的细胞杀伤，还可用不同的治疗性转基因装备溶瘤性腺病毒。这一方法结合了常规基因递送的优点与能够复制的试剂的效力。装备病毒的一个目标是诱导针对允许病毒复制的细胞的免疫反应。单独的病毒复制虽然是免疫原性的，但是通常不足以诱导有效的抗肿瘤免疫性。为了强化对治疗性免疫的诱导，可用激发性蛋白 (例如细胞因子)装备病毒，以及通过促进将肿瘤抗原引向树突细胞。将免疫治疗性基因引入肿瘤细胞中和蛋白质的翻译，导致免疫应答的活化和有效地破坏肿瘤细胞。腺病毒是中等大小(90-100nm)的无包膜二十面体病毒，其在蛋白衣壳中具有约 3万6千个碱基对的双链线性DNA。病毒衣壳具有纤毛结构，其参与病毒对靶细胞的附着。 首先，纤毛蛋白的节结构域(knob domain)结合靶细胞的受体(例如，CD46或柯萨基病毒腺病毒受体(CAR))；第二，病毒与整联蛋白分子相互作用；和第三，病毒被内吞到靶细胞中。接下来，病毒基因组从胞内体被转运到核中并且还将靶细胞的复制装置用于病毒的目的(Russell W. C. 2000,J General Virol 81,2573-2604)。腺病毒基因组具有早期(E1-E4)、中期(IX和IVa2)和晚期基因(L1-L5)，它们以顺序次序被转录。早期基因的产物影响宿主细胞的防御机制、细胞周期和细胞代谢。中期和晚期基因编码用于生产新的病毒粒子的结构性病毒蛋白OVu和NemerOW，2004，Trends Microbiol 12 :162-168 ；Russell W. C. 2000, J General Virol 81,2573-2604 ；Volpers C.禾口 Kochanek S. 2004, J Gene Med 6 suppl 1，S164-71 ；Kootstra N. Α.禾口 Verma I. Μ· 2003，Annu Rev Pharmacol Toxicol 43,413-439)。在人中已发现了腺病毒的超过50种不同的血清型。血清型被分为6个亚组A-F 并且不同的血清型已知与不同的病况(即呼吸系统疾病、结膜炎和肠胃炎)相关联。然而， 所有利用重组腺病毒的癌症试验均以亚组C病毒为特征，其在大多数情况中是Ad5。也认可了血清型嵌合衣壳在否则为血清型5的病毒的情境中的优势。虽然血清型嵌合允许部分地逃避所存在的抗Ad5的中和抗体(Nab)，病毒衣壳的大部分仍然是来自Ad5的这一事实使得所述逃避是不完全的(Sarkio ja,M.等人，2008，GeneTher 15 =921-929) 因此，需要完全非-Ad5的溶瘤性病毒，其能够逃避所存在的抗Ad5的Nab。这些病毒特别在预先存在抗Ad5的NAb的情境中是有用的。这种情况可由于下述而产生天然的感染或用基于Ad5的溶瘤性病毒治疗之后。目前，在基因治疗的情境中关于血清型3腺病毒的公开发表还很少。野生型Ad3已知在人中主要引起呼吸系统的感染和结膜炎。在2005年报导了其完整的DNA序列而其与血清型5仅有62. 75%的同一性。其基因组的组织与其它具有早期和延迟的早期转录单元的人腺病毒相似，包括晚期和主要晚期单元(Sirena D等人，2005，Virology 343:283-298)。 数年前，在含氧量正常和含氧量低的条件下研究了野生型Ad3病毒(Shen，B.H.等人，2006， Gene Ther 13:986-990)。最近，同一小组发表了 ColoAdl，其为复合的Ad3/Adllp嵌合病毒(Kuhn I等人2008，PLoS 0NE3 :e2409)。通过集合大量的血清型、然后在引起血清型间重组的条件下使所述集合体(pools)传代而制造了 ColoAdl。所述作者称这一方法为"定向进化"。然后，将这些高度多样性的病毒集合体置于严紧的定向选择之下以产生并鉴别有效的试剂。在他们的实验中，他们发现了在体外，与亲本血清型或临床上最先进的溶瘤性 Ad，0NYX-015相比，Ad3/Adllp嵌合病毒是2_3倍更有效和更有选择性的。这些结果得到了体内和离体研究的进一步支持。然而，基于用来开发ColoAdl的方法，ColoAdl缺少对于肿瘤选择性的合理基础。此外，对其在体内的活性和安全性的了解甚少，因为仅在一种动物模型中对其进行过研究，所述动物模型的特征是小鼠中的结肠癌异种移植。因此，保证了更有效和准确的基于非-Ad5载体的基因递送以及非-Ad5基因疗法的增加的特异性和足够的肿瘤杀伤能力。治疗性载体的安全性记录必须也是出色的。本专利技术通过利用溶瘤性人非_Ad5病毒而提供了具有前述特性的癌症治疗工具。专利技术简述本专利技术的目的是提供用于实现腺病毒的上述特性的新的方法和手段，并从而解决目前癌症疗法的问题。更特别地，本专利技术提供了用于基因疗法的新方法和手段。本申请描述了溶瘤性人Ad3载体的构建，及它们在肿瘤细胞系和动物模型及中的用途，并且提供了病毒疗法中对于溶瘤性血清型5腺病毒载体的备选方案。本专利技术的载体是第一个仅基于血清型3的选择性溶瘤性人腺病毒。本载体也是第一个由肿瘤特异性启动子控制的、基于非_Ad5的溶瘤性腺病毒。本专利技术涉及完全血清型3溶瘤性人腺病毒载体本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．完全血清型３溶瘤性人腺病毒载体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：O·海明基，
申请(专利权)人：昂克斯治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：FI
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