一种依替巴肽的液相合成方法技术

一种依替巴肽的液相合成方法，利用标签分子作为载体辅助依替巴肽链酰胺偶联，偶联结束后的原溶液直接在含巯基化合物

【技术实现步骤摘要】
一种依替巴肽的液相合成方法


[0001]本专利技术属于有机合成及多肽化学合成
，涉及依替巴肽的合成方法，特别是涉及一种依替巴肽的液相合成方法
。

技术介绍

[0002]依替巴肽，英文名称
Eptifibatide
，商品名
Integrelin
，是用于治疗心血管疾病的特效药物，具有药效高
、
副作用低等优势，现已得到临床的广泛使用
。
依替巴肽可以显著改善外周血流和组织灌注，是一种血细胞膜糖蛋白受体拮抗剂（
GPIIb/IIIa
），主要用于治疗急性冠脉综合征（
ACS
）和
ST
段抬高型心梗
。
[0003]依替巴肽最初由美国
COR Therapeutic
公司开发，并于
1998
年在美国上市
。
依替巴肽为六个氨基酸与巯基丙酸组成的环状碳末端酰胺化多肽，化学结构及氨基酸序列结构如下所示
。
[0004][0005]目前，依替巴肽的合成主要包括液相多肽合成（
LPPS
）及固相多肽合成（
SPPS
）技术
。
其中，固相多肽合成是以难溶性的高分子树脂作为依替巴肽的合成载体，在进行氨基酸的非均相偶联及脱保护后，通过溶剂的多次洗涤即可完成中间肽的分离纯化，如
CN 110498834A、CN 105585613A
和
CN105037496A
均公开了基于高分子树脂载体辅助的依替巴肽固相制备方法
。
然而，依替巴肽的固相多肽合成不仅合成树脂载体价格昂贵，装载率较低（
0.3
～
2.0mmol/g
），而且制备路线繁琐，在每一步依替巴肽氨基酸的偶联后，都需要使用大量的非绿色化学试剂对树脂进行反复洗涤，以去除过量原料及副产物
。
同时，依替巴肽的固相合成中氨基酸需要过量3～5倍，才能保证树脂上反应位点的最大化偶联反应，造成依替巴肽的合成成本极高，限制了依替巴肽原料药物的规模化生产制备
。
[0006]而依替巴肽肽链的液相合成则在每次进行偶联后，都需要进行色谱纯化，或通过沉淀方法纯化依替巴肽中间体，如
CN 102924569A
和
CN 103450346A
所公开的有关依替巴肽液相合成方法
。
依替巴肽液相合成方法需要耗费大量的人力及物力，同样需要使用超量的非绿色化学试剂，造成试剂污染物的浪费及排放，不利于大规模化的依替巴肽生产制备和环境保护
。
[0007]目前，依替巴肽原料药物市场需求不断扩大，传统的固相和液相依替巴肽合成面临化学试剂严重浪费
、
难降解高分子污染物排放造成的经济与环境方面的挑战，无论从经济成本还是从社会效益上看，依替巴肽的合成都缺乏经济绿色的合成方案
。
因此，探索开发试剂节约型的绿色依替巴肽合成制备方法，将很大程度上改善依替巴肽生产所面临的挑
战
。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种新的依替巴肽的液相合成方法，通过在原始溶液体系中实现肽链的延伸，以避免溶剂的大量浪费
。
[0009]相比于传统的固相及液相依替巴肽合成，本专利技术方法利用标签分子作为载体辅助依替巴肽链的酰胺偶联，偶联结束后的原溶液直接在
Fmoc
残基捕获试剂的辅助下脱除
Fmoc
保护，经萃取洗涤后进行后续偶联，实现了一锅法的肽链延伸
。
本专利技术能够极大地降低化学试剂的使用并提高合成效率，主要解决了目前依替巴肽固相及液相合成制备过程中所面临的化学溶剂浪费等方面的不足
。
[0010]本专利技术所述的依替巴肽的液相合成方法具体是以下述结构通式（
I
）所示的
Rink
‑
NH2酸二苯基膦酰氧基二苯甲酯（简称为
NH2‑
Rink
‑
DPP
）作为标签分子：
[0011][0012]其中，取代基
R
选自
H、OPOPh2、
卤原子或
NO2；
[0013]以含巯基化合物
R'
‑
SH
作为
Fmoc
残基捕获试剂，
[0014]其中，取代基
R'
选自含有一个或多个
‑
COOH
侧链基团的烷基链；
[0015]按照下述步骤一锅法制备依替巴肽：
[0016]1）在反应媒介中以脱
Fmoc
试剂和
Fmoc
残基捕获试剂处理下述结构通式（
II
）所示的处于
Fmoc
保护状态下的
Rink Amide
酸二苯基膦酰氧基二苯甲酯，分别以无机酸和无机碱水溶液洗涤萃取反应液，得到结构通式（
I
）所示的脱除
Fmoc
保护基团的
Rink
‑
NH2酸二苯基膦酰氧基二苯甲酯标签分子溶液；
[0017][0018]2）将
Fmoc
与
Trt
保护的半胱氨酸
Fmoc
‑
Cys(Trt)
‑
OH
直接加入上述
Rink
‑
NH2酸二苯基膦酰氧基二苯甲酯标签分子溶液中，在偶联试剂作用下进行酰胺偶联反应，生成标签装载的中间体化合物
Fmoc
‑
Cys(Trt)
‑
CONH
‑
Rink
‑
DPP
溶液；
[0019]3）在偶联结束后的反应溶液中直接加入脱
Fmoc
试剂和
Fmoc
残基捕获试剂，再次脱除
Fmoc
保护基团，分别以无机酸和无机碱水溶液洗涤萃取反应液，得到脱除
Fmoc
保护基团的中间体
NH2‑
Cys(Trt)
‑
CONH
‑
Rink
‑
DPP
溶液；
[0020]4）依次以
Fmoc
保护的氨基酸
Fmoc
‑
Pro
‑
OH、Fmoc
‑
Trp(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
Asp(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Gly
‑
OH、Fmoc
‑
Har(PG)
‑
OH
和氨基酸
Mpa(Trt)
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种依替巴肽的液相合成方法，是以下述结构通式（
I
）所示的
Rink
‑
NH2酸二苯基膦酰氧基二苯甲酯（简称为
NH2‑
Rink
‑
DPP
）作为标签分子：，其中，取代基
R
选自
H、OPOPh2、
卤原子或
NO2；以含巯基化合物
R'
‑
SH
作为
Fmoc
残基捕获试剂，其中，取代基
R'
选自含有一个或多个
‑
COOH
侧链基团的烷基链；按照下述步骤一锅法制备依替巴肽：1）在反应媒介中以脱
Fmoc
试剂和
Fmoc
残基捕获试剂处理下述结构通式（
II
）所示的处于
Fmoc
保护状态下的
Rink Amide
酸二苯基膦酰氧基二苯甲酯，分别以无机酸和无机碱水溶液洗涤萃取反应液，得到结构通式（
I
）所示的脱除
Fmoc
保护基团的
Rink
‑
NH2酸二苯基膦酰氧基二苯甲酯标签分子溶液；，2）将
Fmoc
与
Trt
保护的半胱氨酸
Fmoc
‑
Cys(Trt)
‑
OH
直接加入上述
Rink
‑
NH2酸二苯基膦酰氧基二苯甲酯标签分子溶液中，在偶联试剂作用下进行酰胺偶联反应，生成标签装载的中间体化合物
Fmoc
‑
Cys(Trt)
‑
CONH
‑
Rink
‑
DPP
溶液；3）在偶联结束后的反应溶液中直接加入脱
Fmoc
试剂和
Fmoc
残基捕获试剂，再次脱除
Fmoc
保护基团，分别以无机酸和无机碱水溶液洗涤萃取反应液，得到脱除
Fmoc
保护基团的中间体
NH2‑
Cys(Trt)
‑
CONH
‑
Rink
‑
DPP
溶液；4）依次以
Fmoc
保护的氨基酸
Fmoc
‑
Pro
‑
OH、Fmoc
‑
Trp(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
Asp(tBu)
‑
OH、Fmoc
‑
Gly
‑
OH、Fmoc
‑
Har(PG)
‑
OH
和氨基酸
Mpa(Trt)
‑
OH
为原料，在偶联试剂
、
脱
Fmoc
试剂和
Fmoc
残基捕获试剂作用下，在原反应溶液中重复进行酰胺偶联反应和脱除
Fmoc
保护基团，并以无机酸和无机碱水溶液洗涤萃取反应液，肽链延伸得到标签装载的依替巴肽前体化合物
Mpa(Trt)
‑
Har
‑
Gly
‑
Asp(tBu)
‑
Trp(Boc)
‑
Pro
‑
Cys(Trt)
‑
CONH
‑
Rink
‑
DPP
溶液；5）采用酸性裂解试剂对上述依替巴肽前体化合物溶液进行裂解处理，脱除依替巴肽前体化合物上的标签基团和侧链...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁泰刚，李海迪，段陈平，罗霞，王廉峻，张林艳，靳元逵，段玥如，
申请(专利权)人：山西德元堂药业有限公司，
类型：发明
国别省市：