一种多肽及其在制药中的用途制造技术

本发明专利技术提供一种多肽及其在制药中的用途，属于多肽制备技术领域。本发明专利技术多肽使用固相合成的方法制得，包括如下步骤：树脂预处理；树脂

【技术实现步骤摘要】
一种多肽及其在制药中的用途


[0001]本专利技术涉及多肽制备
，具体涉及一种多肽及其在制药中的用途。

技术介绍

[0002]多肽可以通过化学合成、生物工程、蛋白质水解、动植物及微生物中提取等多种方法获取。在多肽类药物的研究中，化学合成方法显示了高效简便、可获得不同类型产物（天然多肽及非天然修饰多肽）的优势。利用多肽化学合成方法，可依照目标产物的氨基酸序列，通过定向连接形成肽键而获得具有特定氨基酸序列的天然生物活性多肽及衍生物。
[0003]乳铁蛋白，亦称乳转铁蛋白，主要存在于哺乳动物乳清中的球蛋白，牛乳铁蛋白肽（LactoferricinB，简写为LfcinB）是牛乳铁蛋白在酸性条件下经由胃蛋白酶作用水解出的一段25个氨基酸残基的多肽。进一步研究发现这段多肽的其中一段氨基酸序列为RRWQWR，不仅具有完整乳铁蛋白的多样生物活性功能，且针对某些疾病，这个短肽甚至比完整乳铁蛋白功能更强。LfcinB含有许多正电基团和疏水基团，具有耐热，在消化道不易被降解的特征，因此具有该结构的生物多肽被研究者认为是药物设计的理想结构。
[0004]提高多肽的酶解稳定性，一直是多肽工作者的研究热点话题，天然抗菌肽的酶解稳定性差，阻碍了其进一步开发和应用。目前，研究者常采用不同策略对其稳定性进行改善，常见的提高稳定的办法有以下2种：（1）分子内环化修饰，常见的是利用分子内形成酰胺键或二硫键将抗菌肽的序列进行首尾环化，或中间部位片段环化修饰。该方法的应用较为成熟，通过形成特定的化学键，使多肽的结构更加刚性化，达到提高能耐受酶降解的目的；（2）引入非天然的氨基酸，因为哺乳动物体内存在的蛋白酶对非天然氨基酸无法识别，从而提高耐受酶降解的能力。比如α
‑
氨基异丁酸，D型氨基酸，N
‑
甲基化的氨基酸等。尤其是引入D型氨基酸在序列中是一种最常见的，简单有效的方法来减少多肽被蛋白酶降解。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种热稳定性高、贮存稳定性高并且具有抗菌性的多肽；本专利技术的另一个目的在于提供一种得率高的固相合成多肽的方法。
[0006]为达到上述专利技术目的，采用如下技术方案。
[0007]一种多肽，其特征在于，序列为RRWQWRGGG。
[0008]优选地，多肽使用D型氨基酸合成序列为RRWQWRGGG的多肽。
[0009]本专利技术中多肽在RRWQWR的基础上进行修饰和设计，增加了多肽的热稳定性和贮存稳定性，并且该多肽仍具有抗菌的效果；此外，本专利技术制得的多肽抗炎活性较现有技术中的多肽RRWQWR更好。
[0010]优选地D型氨基酸包括D
‑
Arg、D
‑
Trp中的一种或两种。
[0011]现有技术中，常通过使用非天然氨基酸，如D型氨基合成多肽，增加多肽的耐受酶降解的能力；本专利技术中使用D型氨基合成的多肽RRWQWRGGG还表现出了热稳定性高、贮存稳定性高的特点。
[0012]本专利技术还公开了一种制备上述多肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：树脂预处理；树脂
‑
GlyGlyGlyArgTrpGlnTrpArgArg的合成；脱保护；纯化。
[0013]优选地，树脂预处理的步骤包括：将哌啶和DMF制成树脂预处理液；将树脂完全没入预处理液搅拌后滤出树脂；使用异丙醇和DMF洗涤即得预处理树脂。
[0014]更优选地，树脂预处理的步骤包括：将哌啶和DMF按照1:2
‑
3.5的比例混合制成树脂预处理液；将树脂完全没入10
‑
15倍体积的预处理液搅拌3
‑
5min后滤出树脂；重复浸泡3
‑
5次后使用异丙醇和DMF洗涤即得预处理树脂。
[0015]优选地，树脂
‑
GlyGlyGlyArgTrpGlnTrpArgArg的合成步骤包括：将树脂、Fmoc
‑
D
‑
Arg(Pbf)
‑
OH、HATU、DIPEA按照0.5
‑
1:1.5
‑
3:2
‑
5:2.5
‑
5的摩尔比混合，加入10
‑
15倍体积DMF，室温搅拌反应30
‑
40min后滤出树脂，使用DMF洗涤后加入10
‑
15倍体积的封闭溶液，搅拌封闭30
‑
40min后滤出树脂并使用DMF和NMP溶液洗涤即得树脂
‑
Gly；按照上述方法依次使用Fmoc
‑
Gly
‑
OH、Fmoc
‑
Gly
‑
OH、Fmoc
‑
D
‑
Trp(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
Gln(Trt)
‑
OH、Fmoc
‑
D
‑
Trp(Boc)
‑
OH、Fmoc
‑
D
‑
Arg(Pbf)
‑
OH、Fmoc
‑
D
‑
Arg(Pbf)
‑
OH进行反应，最终制得树脂
‑
GlyGlyGlyArgTrpGlnTrpArgArg。
[0016]优选地，上述树脂为Wang树脂。
[0017]优选地，封闭溶液由乙酸酐和吡啶按1:1
‑
2的体积比配制。
[0018]优选地，脱保护的步骤包括：将TFA、蒸馏水和TIS配制成切割试剂，加入树脂
‑
GlyGlyGlyArgTrpGlnTrpArgArg，搅拌反应后滤出树脂；加入无水乙醚进行沉淀，滤出沉淀并洗涤，溶于双蒸水后即得粗肽。
[0019]更优选地，脱保护的步骤包括：将TFA、蒸馏水和TIS按照90
‑
100:3
‑
5:3
‑
5体积比配制成切割试剂，加入树脂
‑
GlyGlyGlyArgTrpGlnTrpArgArg，搅拌反应2
‑
3h后滤出树脂；加入无水乙醚进行沉淀，滤出沉淀并洗涤，溶于双蒸水后即得粗肽。
[0020]更进一步优选地，切割试剂还包括亚磷酸二苯酯和4
‑
氯
‑1‑
丁醇。
[0021]更进一步优选地，脱保护的步骤包括：将TFA、蒸馏水、TIS、亚磷酸二苯酯和4
‑
氯
‑1‑
丁醇按照90
‑
100:3
‑
5:3
‑
5:3
‑
5:1
‑
2体积比配制成切割试剂，加入树脂
‑
GlyGlyGlyArgTrpGlnTrpArgArg，搅拌反应2
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，序列为RRWQWRGGG。2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽使用D型氨基酸合成序列为RRWQWRGGG的多肽。3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述D型氨基酸包括D
‑
Arg、D
‑
Trp中的一种或两种。4.一种制备如权利要求1
‑
3中任一项所述的多肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：树脂预处理；树脂
‑
GlyGlyGlyArgTrpGlnTrpArgArg的合成；脱保护；纯化。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述树脂预处...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈旭，
申请(专利权)人：沈旭，
类型：发明
国别省市：