抗焦虑活性肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于蛋白质技术领域，涉及一种抗焦虑活性肽及其制备方法和应用，该抗焦虑肽的序列为LHPEWQQLVR。该抗焦虑肽通过增强神经营养功能，促进HPA轴正常化，使小鼠在高架十字迷宫开臂中的时间和进入次数显著升高，从而缓解小鼠的焦虑行为。本发明专利技术还提供了该抗焦虑活性肽的制备方法及其应用。的制备方法及其应用。的制备方法及其应用。

【技术实现步骤摘要】
抗焦虑活性肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于蛋白质
，尤其涉及一种抗焦虑活性肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]焦虑是指对危险或紧张状况的异常反应，它伴随着我们的生活。但是当一些压力越来越大时，焦虑就会变为焦虑症，导致心理及身体的出现各种症状，如恐惧、疲劳、担忧或激动、心悸、易受惊吓和烦躁易怒等。根据世界心理健康调查，大约1/4的人可能患有或曾经患有焦虑症。焦虑症的终生患病率约为14％。高患病率、慢性和共病等特点导致世卫组织将焦虑症列为第9大与健康相关的致残原因。
[0003]目前焦虑症治疗方式采用心理治疗和药物治疗相结合，其中药物治疗大部分采用选择性5
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羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)、5
‑
羟色胺
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去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)和苯二氮卓类(BDZ)等药物，但是会存在很多副作用，如口干、恶心、头痛、嗜睡、体重增加等，所以找到新的安全替代物是治疗焦虑症的有效手段。
[0004]大豆肽是大豆蛋白的酶解产物，分子量较低，大部分由3
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20个氨基酸组成，既保留了蛋白营养丰富、氨基酸平衡等优点，同时易溶解、易被吸收利用，具有抗氧化、抗炎、降血压和免疫调节等生物活性。而有关神经调节方面，国内外研究学者发现低分子量肽可以缓解甚至治疗精神疾病(抑郁、焦虑和双相情感障碍)和神经退行性疾病(脑缺血、阿尔兹海默症、帕金森病等)。因此，利用大豆肽原料进行分离，探索关键有效成分进行营养补充从而缓解焦虑，具有较大的实际应用价值。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种抗焦虑活性肽、其制备方法以及和应用，以期通过营养补充缓解焦虑，避免传统药物带来的副作用，切实帮助到焦虑症患者。
[0006]本专利技术的目的及其技术问题的解决，可以通过以下技术方案来实现。
[0007]一方面，本专利技术提供了一种抗焦虑活性肽，该肽的氨基酸序列为Leu
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His
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Pro
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Glu
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Trp
‑
Gln
‑
Gln
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Leu
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Val
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Arg，或者以LHPEWQQLVR(SEQ ID NO:1)来表示，分子量为1305.70Da。
[0008]另一方面，本专利技术提供了制备上述抗焦虑活性肽的方法，包括以下步骤：
[0009]1)将大豆肽进行体外模拟消化，利用胃蛋白酶和胰酶进行酶解，得到大豆肽消化产物，2)将大豆肽消化产物进行体外模拟吸收，利用Caco
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2单层细胞模型分离得到吸收大豆肽，以及3)对吸收大豆肽进行肽段鉴定，得到抗焦虑活性肽LHPEWQQLVR。
[0010]在本专利技术方法的实施方案中，步骤1)具体包括以下步骤：
[0011]1.1)将大豆肽溶解于水中，加入模拟口腔液，并振荡反应，得到大豆肽口腔消化液，
[0012]1.2)向大豆肽口腔消化液中加入模拟胃液，调节pH为3.0，然后加入胃蛋白酶，并振荡反应，得到大豆肽胃消化液，
[0013]1.3)向大豆肽胃消化液中加入模拟肠液，调节pH为7.0，然后加入胰酶，振荡反应，得到大豆肽肠消化液，以及
[0014]1.4)将大豆肽消化液冷冻干燥，得到消化大豆肽粉末，即大豆肽消化产物。
[0015]在本专利技术方法的实施方案中，模拟口腔液包含15.1mMKCl、3.7mM KH2PO4、13.6mM NaHCO3、0.15mM MgCl2(H2O)6、0.06mM(NH4)2CO3、1.1mM HCl、1.5mM CaCl2(H2O)2。
[0016]在本专利技术方法的实施方案中，模拟胃液包含6.9mM KCl、0.9mM KH2PO4、25mM NaHCO3、47.2mM NaCl、0.12mM MgCl2(H2O)6、0.5mM (NH4)2CO3、15.6mM HCl、0.15mM CaCl2(H2O)2。
[0017]在本专利技术方法的实施方案中，模拟肠液包含6.8mM KCl、0.8mM KH2PO4、85mM NaHCO3、38.4mM NaCl、0.33mM MgCl2(H2O)6、8.4mM HCl、0.6mM CaCl2(H2O)2。
[0018]在本专利技术方法的实施方案中，在步骤1)中，利用胃蛋白酶和胰酶进行酶解对大豆肽进行体外模拟消化，胃蛋白酶的添加量以质量分数计可以为大豆肽的0.2
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0.4％，酶解时间可以为1
‑
3h，酶解温度可以为35
‑
40℃，pH 2.5
‑
3.0。在本专利技术的具体实施方案中，胃蛋白酶的添加量以质量分数计可以为所述大豆肽的0.2％、0.25％、0.3％、0.35％或0.4％，酶解时间可以为1h、1.5h、2.5h、2.6h、2.7h、2.8h、2.9h、3h，酶解温度可以为35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃，pH可以为2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0。
[0019]在本专利技术方法的实施方案中，胰酶的添加量以质量分数计可以为大豆肽的0.02
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0.04％。酶解时间可以为1
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3h，酶解温度可以为35
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40℃，pH7.0
‑
7.5。在本专利技术的具体所述方案中，胰酶的添加量以质量分数计为所述大豆肽的0.02％、0.03％、0.04％，酶解时间可以为1h、1.5h、2.5h、2.6h、2.7h、2.8h、2.9h、3h，酶解温度可以为35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃，pH可以为7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5。
[0020]在本专利技术方法的实施方案中，在酶解结束之后，可以通过95℃水浴10min，使酶灭活。
[0021]在本专利技术方法的实施方案中，在步骤2)中，将大豆肽消化产物溶于HBSS缓冲液，并接种Caco
‑
2单层细胞，其中，大豆肽消化产物在HBSS缓冲液的浓度为4mg/mL。
[0022]在本专利技术方法的实施方案中，在步骤2)中，利用Caco
‑
2单层细胞模型对大豆肽消化产物进行体外模拟吸收，将大豆肽消化产物分离为吸收大豆肽和未吸收大豆肽。在具体实施方案中，通过将Caco
‑
2细胞培养21天使其电阻值达到稳定，为400
‑
600Ω，实现Caco
‑
2单层细胞模型的构建，然后经过1.5
‑
2.5h的吸收，将消化大豆肽分离为吸收大豆肽和未吸收大豆肽。在具体实施方案中，Caco
‑
2单层细胞的电阻值可以为410、420、430、440、450、480、490、500、550、560、570、580、590、600Ω。
[0023]在第三方面，本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗焦虑活性肽，其特征在于，所述肽的氨基酸序列为LHPEWQQLVR，分子量为1305.70Da。2.制备权利要求1所述抗焦虑活性肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将大豆肽进行体外模拟消化，利用胃蛋白酶和胰酶进行酶解，得到大豆肽消化产物，2)将所述大豆肽消化产物进行体外模拟吸收，利用Caco
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2单层细胞模型分离得到吸收大豆肽，以及3)对所述吸收大豆肽进行肽段鉴定，得到所述抗焦虑活性肽LHPEWQQLVR。3.根据权利要求2所述抗焦虑活性肽的制备方法，其特征在于，步骤1)具体包括以下步骤：1.1)将所述大豆肽溶解于水中，加入模拟口腔液，并振荡反应，得到大豆肽口腔消化液，1.2)向所述大豆肽口腔消化液中加入模拟胃液，调节pH为3.0，然后加入胃蛋白酶，并振荡反应，得到大豆肽胃消化液，1.3)向所述大豆肽胃消化液中加入模拟肠液，调节pH为7.0，然后加入胰酶，振荡反应，得到大豆肽肠消化液，以及1.4)将所述大豆肽消化液冷冻干燥，得到消化大豆肽粉末，即所述大豆肽消化产物，其中，所述模拟口腔液包含15.1mM KCl、3.7mM KH2PO4、13.6mM NaHCO3、0.15mM MgCl2(H2O)6、0.06mM(NH4)2CO3、1.1mM HCl、1.5mM CaCl2(H2O)2，所述模拟胃液包含6.9mM KCl、0.9mM KH2PO4、25mMNaHCO3、47.2mM NaCl、0.12mM MgCl2(H2O)6、0.5mM(NH4)2CO3、15.6mM HCl、0.15mM CaCl2(H2O)2，所述模拟肠液包含6.8mM KCl、0.8mM KH2PO4、85mM NaHCO3、38.4mM NaC...

【专利技术属性】
技术研发人员：李赫，李雯晖，王俊茹，刘新旗，张弛，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：