检测点突变基因的方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种检测点突变基因的方法，以突变基因为模板，通过连接反应将两条与点突变基因互补且相邻的寡核苷酸探针连接成一条完整寡核苷酸链，并在寡核苷酸链上标记电化学发光分子。然后通过磁性微球捕获并分离出完整寡核苷酸链，最后用电化学发光分析仪检测完整寡核苷酸链上标记的电化学发光分子，通过比较待检测基因样品与空白溶液的电化学发光信号强度的差异检测出点突变基因。本发明专利技术还公开了检测点突变基因的试剂盒，包含：两条与点突变基因序列互补的寡核苷酸探针、连接酶、以及表面标记有捕获分子的磁性微球。本发明专利技术检测点突变基因的方法，检测灵敏度高，检测结果准确、可靠，在肿瘤分子诊断、遗传分子诊断等领域有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测点突变基因的方法及试剂盒。
技术介绍
随着分子生物学的发展，越来越多的证据显示恶性肿瘤、遗传性疾病等困扰人类的重大疾病与基因突变存在密切联系，而在基因突变类型中又以点突变最为常见，相关的点突变基因检测技术得到了较快发展。目前，基因测序技术是检测基因突变的“金标准”，但是由于检测突变基因时往往存在野生型基因背景的干扰，测序技术受限于灵敏度，难以检测出丰度低于10%的突变基因。同样由于野生型基因的干扰作用，聚合酶链式反应(PCR)也无法对低丰度的突变基因进行扩增和富集，难以提高突变基因在检测样本中的比例。为了提高点突变基因的检测灵敏度，发展出了基于连接反应的点突变检测技术，包括连接酶检测反应(LDR)和连接酶聚合反应(LCR)。两种方法均采用荧光染料作为信号报告分子，通过检测报告分子的荧光信号获得突变基因的信号，提高了突变基因检测的灵敏度。但是在连接反应中无法分离出突变基因，野生型基因的干扰作用仍无法忽视，限制了检测灵敏度的提高。而且在荧光信号检测过程中，每一条突变基因仅标记一个荧光分子，难以获得足够高的检测信号，容易造成假阴性的结果。此外，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测点突变基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：设计两条与点突变基因序列互补且相邻的寡核苷酸探针，即探针Ⅰ和探针Ⅱ，其中探针I的5’端标记有识别分子，其3’端的最后一个碱基与点突变的碱基互补配对；探针Ⅱ的5’端的第一个碱基与点突变碱基相邻的碱基互补配对，其3’端标记有电化学发光分子；将所述寡核苷酸探针与待检测基因混合，该两条寡核苷酸探针以点突变基因为模板，在连接酶的作用下通过连接反应连接成一条完整的寡核苷酸链探针，其5’端标记有识别分子，3’端标记有电化学发光分子；将表面标记有捕获分子的磁性微球与连接反应产物混合，通过捕获分子与识别分子的特异性结合，将连接后完整的寡核苷酸链探针固定在磁性微...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：程昌明，汪杰，杨超，
申请(专利权)人：上海生物芯片有限公司，
类型：发明
国别省市：