一种用于检测B‑RAF基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测B‑RAF基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒，包括：B引物组、E‑4引物组、B检测探针、E‑4检测探针和内标检测探针；K检测探针和E‑4检测探针的5’端均修饰有第一荧光报告基团，3’端均修饰有第一荧光猝灭基团；内标检测探针的序列与E‑2检测探针的序列相同，其5’端修饰有与第一荧光报告基团不同的第二荧光报告基团，3’端均修饰有第二荧光猝灭基团。本发明专利技术以人类B‑RAF基因突变为检测对象，通过特异引物的优化组合以及荧光探针，从而实现准确、简单、快速地同时检测B‑RAF基因突变，而且检测突变的能力高。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测B-RAF基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于检测B-RAF基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒。
技术介绍
B-raf基因全名为鼠类肉瘤滤过性毒菌(V-raf)致癌同源体B1，定位于人染色体7q34，其具有功能的编码区由2150对碱基组成，编码MAPK通路中的丝氨酸苏氨酸蛋白激酶，该酶将信号从Ras转导至MEK1/2，从而参与调控细胞内多种生物学事件。B-raf基因突变能激活ERK信号，诱导细胞增殖，防止细胞凋亡。约70％的恶性黑色素瘤和15％的结肠癌中存在体细胞B-raf基因错义突变。B-raf基因作为raf-MEK-ERK信号转导通路中的重要成员，在肿瘤细胞增殖、分化和凋亡等方面发挥重要作用。正常的B-raf蛋白的功能是传递来自细胞膜的信号。B-raf蛋白通常只在需要传递信号时保持活性状态。然而，突变的B-raf则一直保持活性状态，并因此干扰了细胞信号传递链的正常功能，引起细胞的异常。利用B-raf基因在临床上可对肿瘤(包括癌前病变)进行诊断，预后评估和治疗。通过检测基因突变来推测肿瘤所处的阶段和分化的程度，从而对病情和预后本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测B‑RAF基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括：B引物组、E‑4引物组、B检测探针、E‑4检测探针和内标检测探针；B检测探针和E‑4检测探针的5’端均修饰有第一荧光报告基团，3’端均修饰有第一荧光猝灭基团；内标检测探针的序列与E‑4检测探针的序列相同，其5’端修饰有与第一荧光报告基团不同的第二荧光报告基团，3’端均修饰有第二荧光猝灭基团；其中，B引物组由正向引物B‑M‑F和反向引物B‑M‑R组成，依次包括如SEQ ID NO 01和02所示的序列；E‑4引物组由正向引物E‑4‑F和反向引物E‑4‑R组成，依次包括如SEQ ID NO 03和04所示的序列；该多重荧光...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测B-RAF基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括：B引物组、E-4引物组、B检测探针、E-4检测探针和内标检测探针；B检测探针和E-4检测探针的5’端均修饰有第一荧光报告基团，3’端均修饰有第一荧光猝灭基团；内标检测探针的序列与E-4检测探针的序列相同，其5’端修饰有与第一荧光报告基团不同的第二荧光报告基团，3’端均修饰有第二荧光猝灭基团；其中，B引物组由正向引物B-M-F和反向引物B-M-R组成，依次包括如SEQIDNO01和02所示的序列；E-4引物组由正向引物E-4-F和反向引物E-4-R组成，依次包括如SEQIDNO03和04所示的序列；该多重荧光PCR检测试剂盒的每一反应体系的组成如下：B引物组B检测探针和/或E-4检测探针E-4引物组内标检测探针1×PCR缓冲液MgCl2dNTPsTaq酶H2ODNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈琰，郭飞飞，
申请(专利权)人：厦门飞朔生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35