一种血液EGFR基因T790M突变的检测方法技术

本发明专利技术属于生物医学技术领域，具体地说是一种血液EGFR基因T790M突变的检测方法，包括以下步骤：1)提供引物及探针；2)从待测样本中提取DNA模板；3)配制荧光PCR扩增突变基因序列的反应体系；4)将步骤2)提取的DNA模板加到步骤3)所得的PCR反应体系中，用步骤1)提供的引物扩增待测的基因序列，用步骤1)提供的探针所扩增的产物杂交，并检测反应体系的荧光基团的荧光信号，根据荧光信号结果分析，判断样本是否存在突变以及突变的比例；本发明专利技术同现有技术相比，灵敏度高，检测速度快，能够适用于高通量的样本检测，且检测结果可实时观察，产物不需要凝胶电泳检测，完全闭管操作，有效地降低了PCR产物污染的风险。

【技术实现步骤摘要】
一种血液EGFR基因T790M突变的检测方法[
]本专利技术属于生物医学
，具体地说是一种血液EGFR基因T790M突变的检测方法。[
技术介绍
]近年来，表皮生长因子受体.酪氨酸激酶抑制剂(epidermalgrowthfactorreceptor-tyrosinekinaseinhibitors，EGFR—TKIs)等靶向药物已经成为晚期非小细胞肺癌(NSCLC)重要的治疗方式之一。EGFR是一种跨膜酪氨酸激酶受体，该受体激酶域的激活对癌细胞增殖、生长的相关信号传递具有重要意义。通过对患者EGFR基因的突变检测，可辅助临床医生筛选可受益于分子靶向抗肿瘤药物如易瑞沙、特罗凯和凯美纳等的肿瘤患者。但是，随着其在临床上的广泛应用，耐药问题日益突出。其中，EGFR-T790M突变约占临床耐药病人的60％以上。因此，对T790M的检测十分必要。临床上大都采用病理组织标本提取DNA进行EGFR检测，但晚期肺癌病人有时无法获取肿瘤标本。很多权威研究认为肿瘤组织存在异质性，肿瘤组织不同部位的体细胞基因突变谱并不相同，血清或血浆肿瘤基因突变检测方便在不同时间点获取样本，没有空间抽样偏差，已逐本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血液EGFR基因T790M突变的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提供引物及探针；2)从待测样本中提取DNA模板；3)配制荧光PCR扩增突变基因序列的反应体系；4)将步骤2)提取的DNA模板加到步骤3)所得的PCR反应体系中，用步骤1)提供的引物扩增待测的基因序列，用步骤1)提供的探针所扩增的产物杂交，并检测反应体系的荧光基团的荧光信号，根据荧光信号结果分析，判断样本是否存在突变以及突变的比例。

【技术特征摘要】
1.一种血液EGFR基因T790M突变的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提供引物及探针；2)从待测样本中提取DNA模板；3)配制荧光PCR扩增突变基因序列的反应体系；4)将步骤2)提取的DNA模板加到步骤3)所得的PCR反应体系中，用步骤1)提供的引物扩增待测的基因序列，用步骤1)提供的探针所扩增的产物杂交，并检测反应体系的荧光基团的荧光信号，根据荧光信号结果分析，判断样本是否存在突变以及突变的比例。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，引物及探针为：上游引物：5’-CCGAAGGGCATGAGCTGCG-3’；下游引物：5’-TCCAGGAAGCCTACGTGATC-3’；探针：FAM-CGGTGGAGGTGAGGCAGATC-BHQ1。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2)中，待测样本为血浆游离DNA。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤3)中，PCR反应体系包括酶、dNTP、PCR缓冲液、引物、探针。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，PCR反应体系的反应液成分及用量为：成分...

【专利技术属性】
技术研发人员：张群，祝琳，
申请(专利权)人：上海浦美生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31