本发明专利技术公开了一种卵巢反应相关基因检测方法，其特征在于，通过检测分析个体的FSHR基因SNPs位点基因携带型为所有的受检者提供卵巢反应相关基因检测，用以对中国女性人群中不孕易感个体进行筛查，在给出个体不育发病风险的基础上，为广大的中国女性提供对不孕遗传易感性早知道、早预防、早治疗的契机。
【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
步骤1：检测的样品类型与采样方法用采样拭在口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本；步骤2：基因组DNA的抽提方法采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时－2.5小时，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测；步骤3：荧光定量PCR反应将每一个被测者样本分别放入反应孔，即卵泡刺激素受体(FSHR) rs6166，另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔；每一个反应孔的基因分型可以根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan®‑MGB技术，进行检测试剂合成；在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10µl，即浓度为20ng/µl 的DNA模板2µl 、1µl 10X荧光定量PCR反应缓冲液ABI Taqman ® MGB、0.1µl 25mM d NTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5µl 25mM MgCl2溶液、0.02µl（5units/µl）Taq DNA聚合酶、去离子水4.98µl、3个位点分别采用不同的正向引物（20µM，0.225µl）、反向引物（20µM，0.225µl）、VIC荧光探针（10µM，0.25µl）和FAM荧光探针（10µM，0.25µl）工具进行检测，基因序列及其引物探针如下：卵泡刺激素受体(FSHR) rs6166ggtgagcatc tgcctgccca tggatattga cagccctttg tcacagctgt atgtcatgtccctccttgtg ctcaatgtcc tggcctttgt ggtcatctgt ggctgctata tccacatctacctcacagtg cggaacccca acatcgtgtc ctcctctagt gacaccagga tcgccaagcgcatggccatg ctcatcttca ctgacttcct ctgcatggca cccatttctt tctttgccatttctgcctcc ctcaaggtgc ccctcatcac tgtgtccaaa gcaaagattc tgctggttctgtttcacccc atcaactcct gtgccaaccc cttcctctat gccatcttta ccaaaaactttcgcagagat ttcttcattc tgctgagcaa gtgtggctgc tatgaaatgc aagcccaaatttataggaca gaaacttcat ccactgtcca caacacccat ccaaggaatg gccactgctcttcagctccc agagtcacca ntggttccac ttacatactt gtccctctaa gtcatttagcccaaaactaa aacacaatgt gaaaatgtat ctgagtattg aatgataatt cagtcttgcctttgaagggt atgtcacaaa agctgacagt gcttctacac atttcatcta atttaatattcctggcatac ctttaaggta aattggtcag gaactattaa ttccatgtga tacattaggaagctgaatta ttagtaacaa caataataat taaagaatgc aatactgtat tacatattttatccttatat atgttatttt tgcacgttat gttcaaagtg cttttgttca gatatctcaagtgatccctg ttaaataagc aggacaggga ttattcttgg agttttacaa atgaggaaaccacgactcaa agagttaagt gacttgttca aaattgttta gtttgtaaga ggcagagccaggattaggta ttccgactcc cagagaattt cccagagaag带VIC荧光A型探针 CCAaTGGTTCCAC带FAM荧光G型探针 CCAgTGGTTCCAC正向引物 TGGCTGCTATGAAATGCAAG反向引物 CCCTTCAAAGGCAAGACTGA将反应孔和空白对照在PCR扩增仪上进行反应，先进行预热：50℃、2分钟，95℃、10分钟，然后再进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟、反应结束后取出后再放入荧光定量PCR仪上读取样品荧光量，得到卵泡刺激素受体(FSHR) rs6166图片；步骤4：SNP基因型分析将荧光定量PCR仪上显示的最终样本荧光信号的图和一个NTC空白对照进行比较，每个位点理论上存在三种不同的信号，纯VIC荧光信号、VIC和FAM杂合荧光信号以及纯...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：傅咏南，王校，张奕，
申请(专利权)人：上海中优医药高科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。