一种基于高通量测序检测子宫平滑肌瘤FH和MED12基因突变的文库构建方法技术

本发明专利技术公开了一种基于高通量测序检测子宫平滑肌瘤FH和MED12基因突变的文库构建方法，属于生物技术领域。本发明专利技术基于多重PCR的扩增子靶向测序，先使用针对目标区域的特异修饰性扩增引物SEQ ID NO.1‑82(GSP)对DNA模板的靶序列进行精准PCR扩增富集，再使用一对带有测序接头序列的接头扩增引物SEQ ID NO.83‑84，对富集产物进行扩增并加上测序接头，通过两步PCR完成测序文库的构建。本发明专利技术提供的建库方法可用于定性检测子宫肌瘤组织样本/外周血样本中的FH基因和MED12突变，辅助遗传性平滑肌瘤病及肾细胞癌(HLRCC)综合征筛查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，尤其涉及一种基于高通量测序检测子宫平滑肌瘤fh和med12基因突变的文库构建方法。

技术介绍

1、子宫平滑肌瘤是女性生殖系统中最常见的良性肿瘤，主要的基因变异包括med12突变，hmga2、hmga1重排，col4a5、col4a6缺失，fh突变。其中，fh基因编码延胡索酸水合酶(fumarate hydratase)，位于染色体1q42.3-q43，大小约22kb，含有10个外显子，基因产物为fh，是三羧酸循环中催化延胡索酸+h2o--苹果酸反应的关键酶。fh基因胚系突变引起遗传性平滑肌瘤病和肾细胞癌综合征(hlrcc)，是一种常染色体显性综合征，以子宫、皮肤平滑肌瘤和肾细胞癌(rcc)为特征。fh基因突变引起双等位基因失活导致fh活性完全丧失或降低，造成细胞内延胡索酸积累，糖酵解加强，引起不依赖低氧环境的低氧诱导因子1α(hif-1α)稳定表达，细胞内微环境改变，从而有利于肿瘤发生。

2、fh缺陷型平滑肌瘤基因突变类型包括体系突变和胚系突变两种，研究表明fh基因的体系突变较胚系突变更常见，fh基因的体系突变与hlrcc无本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于高通量测序构建子宫平滑肌瘤FH和MED12基因突变文库的多重PCR引物，其特征在于，所述PCR引物序列如SEQ ID NO.1-82所示。

2.一种基于高通量测序检测子宫平滑肌瘤FH和MED12基因突变的文库构建方法，其特征在于，所述文库构建方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中多重PCR反应的体系如下表所示：

4.根据权利要求3所述的文库构建方法，其特征在于，所述引物MIX的具体组成如下表所示：

5.根据权利要求4所述的文库构建方法，其特征在于，所述多重PCR反应的程序如下表所示...

【技术特征摘要】

1.一种基于高通量测序构建子宫平滑肌瘤fh和med12基因突变文库的多重pcr引物，其特征在于，所述pcr引物序列如seq id no.1-82所示。

2.一种基于高通量测序检测子宫平滑肌瘤fh和med12基因突变的文库构建方法，其特征在于，所述文库构建方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中多重pcr反应的体系如下表所示：

4.根据权利要求3所述的文库构建方法，其特征在于，所述引物mix的具体组成如...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志宏，钟镇涛，郑甜，吴志煌，陈琰，
申请(专利权)人：厦门飞朔生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：