用于肠源exo-miRNA表达谱分析的组合物和方法技术

技术编号：41580348 阅读：15 留言：0更新日期：2024-06-06 23:56

本发明专利技术涉及结直肠癌血浆肠源外泌体中微小RNA(miRNA)表达谱分析的组合物和方法。特别地，本发明专利技术涉及用于诊断结直肠癌、监测癌症治疗和/或治疗结直肠癌的血液分子标记物诊断试剂盒，该试剂盒包括多核酸分子，每种核酸分子编码一微小RNA序列，其中一或多种核酸分子在结直肠癌血浆和健康对照血浆中有差异表达，其中一或多种差异表达的核酸分子一起代表一个核酸表达特征，该核酸表达特征是预示结直肠癌存在的指征。本发明专利技术进一步涉及使用该核酸表达特征确定结直肠癌、同时预防或治疗这种病症的相应方法。最后，本发明专利技术直接关系预防和/或治疗结直肠癌的药物组合物。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物，涉及用于结直肠癌血浆肠源外泌体微小rna(肠源exosome microrna，简称肠源exo-mirna表达谱分析的组合物和方法。用于结直肠癌血浆肠源(a33阳性)外泌体微小rna表达谱分析的组合物和方法

技术介绍

1、据资料记载，结直肠癌(colorectal cancer，crc)是世界范围内最常见的肿瘤之一。据统计，在中国新发肿瘤中，crc占比排名已升至第二(12.2％)，新增肿瘤死亡病例中crc占比排名位列第五(9.5％)，高达59.4％的患者会发生转移(lnadomi j.(2020).gatstroenterology，158(2)：289-290)。若能在病变进展的早期诊断，crc是可治愈的。但在疾病早期，大部分患者没有疾病的表现症状，因此筛查对于早期发现crc是有必要的。证据表明早期发现crc可以明显降低其发病率和致死率(anwar，r.(2006)digestive andliver disease 34，279-282)。

2、起初，crc以肠上皮细胞出现过度增生(非典型增生)为特征，病变首先在结肠或直肠内膜形成炎性腺瘤状息肉，后变成异常的赘生物腺瘤(即良性肿瘤)。一般情况下，腺瘤形成后(60岁时发病率约为60-70％)仅有一小亚群细胞恶变成为恶性的腺癌，而超过95％的crc病例已被证明是腺癌(muto，t.et al.(1975)cancer 36，2251-2270；fearon，e.r.andvogelstein，b.(1990)cell 61，759-767)。

3、目前公认的crc筛查方法包括结肠镜检查和粪便隐血试验。然后，这两个试验都有其严重的弊端。结肠镜检查虽然效果不错，但由于其费用高、不适感强、可能副作用大，许多人都迟疑做这个检查。另一方面，粪便隐血试验是一个既简单又便宜的检查，但其结果相对不准确。不管怎样，迄今为止还没有找到特异性的分子标记物能被用于可靠地诊断crc，特别是已被证实为腺癌的crc，和/或正从良性腺瘤转变成为恶性肿瘤这一进程中的crc。

4、因此，发现新的生物标记物将有极大的临床重要性，特别是如果这些标记物能使得在肿瘤发展的早期进行诊断，从而允许癌症的早期治疗。理想的是这些标记物应该能使得在恶性细胞的存在尚不能由原位技术或活检或切除材料的显微镜分析检测到的阶段就能鉴定癌症。

5、许多诊断试验也被限制了，它们是通常基于分析仅仅单个分子标记物，这可能影响检测可靠性和/或精确性。另外，单个标记物通常不能进行有关潜伏期、肿瘤发展等的详细预测。因此，仍然持续需要鉴定其它的分子标记物和克服这些限制的其他测定形式。

6、一种解决这一问题的方法可以基于小调节rna分子，特别是微小rna(mirna)，它们是一类进化保守的内源表达的非编码小rna，大小为20-25个核苷酸(nt)，可以调节靶mrna的表达。自从它们在大约10年前被发现就被认为在细胞发育、分化、增殖和凋亡中有重要功能。(bartel，d.p.(2004)cell 116，281-297，ambros,v.(2004)nature 431，350-355；he.l.et al.(2004)nat rev genet 5，522-531)。此外，由于mirna在体外很稳定、体内存在时间长，它比mrna更有优势来作为癌症标记物(lu，j.et al.(2005)nature 435，834-838；lim，l.p.et al.(2005)nature 433，769-773)。

7、根据mirna与其靶之间的互补性程度，mirna可以指导不同的调节过程。与mirna高度互补的靶mrna通过与rna干扰(rnai)相同的机制被特异切割。可获得的现有数据表明mirna在癌症中起着原癌基因或抑癌基因的作用，如癌症中mir-17-92的过表达起着原癌基因的作用，促进癌症发展，负调节肿瘤抑制基因和/或控制细胞分化、凋亡的基因；它也下调let-7a表达，而let-7a通过调节原癌基因和/或控制细胞分化、凋亡的基因起着肿瘤抑制基因的作用(zhang，b.(2007)dev biol 302，1-12)。这些表明了mirna在癌症发展过程中的作用。.

8、高通量的mirna量化技术如mirna芯片、实时rt-pcr为基础的taqman荧光定量检测mirna等等，为研究整个癌症基因组中mirna表达谱提供了有力的工具。越来越多的证据表明许多mirna在癌症中表达失调，包括白血病、淋巴瘤、恶性胶质瘤、结肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、肝癌、卵巢癌，并且其在正常组织和癌组织中表达有差异(zhang,l.(2008)adv exp med biol 622，69-78)。因此，mirna谱可用于设计识别各种癌症的特征，表明其可以帮助进一步建立分子诊断、预后和治疗。mirna在癌症中的异常表达表明这些mirna可能用于生物标记物和分子治疗的靶点。

9、在许多可能样品种类中，血液是筛查高危人群最理想的，它可以以微创方式易于收集，可以早期检测、早期诊断、监测和有效治疗癌症。已证明肿瘤细胞产生的mirna在人的血浆或血清中以相当稳定的形式存在，它可以免受内源性rnase降解。血浆或血清中肿瘤细胞产生的mirna的水平足够被测量出来，用其作为生物标记物来发现癌症。再者，血浆和血清中mirna的水平强烈关联，表明临床应用mirna为生物标记物用于癌症诊断中无论用血浆或是血清样品都是合适的(mitchell，p.s.et al.(2008)proc natl acad sci usa 105，10513-10518；gilad，s.et al.(2008)plos one 3，e3148；chen，x.et al.(2008)cell res18，997－1006)。

10、一些研究报道了人crc中血浆或血清mirna的表达谱(chen，x.(2008)cell res18，997-1006；ng ek.o.(2009)gut 58，1375-1381；huang z.2009，iht j cancer,published on line)。健康人的血液中可以检测出100多种循环中的mirna(mitchell，p.s.(2008)proc natl acad sci usa 105，10513-10518)，而这个表达谱与大肠癌患者的表达谱有明显区别，患者有几种肿瘤特异性的mirna。陈和同事们证明在大肠癌患者血清里有69种mirna是健康人所没有的(chen，x.(2008)cell res 18，997-1006)。但是，如此大的表达谱很难运用到临床早筛早诊中。

11、然而，外周血游离的mirna来源于各种组织细胞：上皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞以及大量的白细胞，尤其在组织损伤和炎症发生的情况下。此外，若未能严格遵循采血和运输的规范化操作的话，在血液凝固过程中细胞破裂和释放出的核酸也会对外周血游离mirna的检测产生干扰，从而较难确保临床检验的准确性本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.miRNA作为结直肠癌检测或治疗靶点的用途，其特征在于，所述miRNA选自miR-21-5p，hsa-miR-92a-3p,hsa-miR-122-5p，hsa-miR-124-3p，hsa-miR-146a-5p，miR-150-5p，hsa-miR-184，hsa-miR-196a-5p，hsa-miR-204-5p及hsa-miR-486-5p的一种或多种。

2.测量miRNA表达水平的试剂在制备结直肠癌诊断试剂中的用途，所述miRNA为miR-21-5p，hsa-miR-92a-3p,hsa-miR-122-5p，hsa-miR-124-3p，hsa-miR-146a-5p，miR-150-5p，hsa-miR-184，hsa-miR-196a-5p，hsa-miR-204-5p，hsa-miR-486-5p的一种或多种，所述诊断试剂通过测量样品中所述miRNA的表达水平来诊断受试者是否患有结直肠癌或处于结直肠癌的风险中，其中与对照样品相应的miRNA表达水平相比，hsa-miR-21-5p、hsa-miR-92a-3p、hsa-miR-124-3p、hs

3.一种结直肠癌检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有能够检测miRNA表达水平的试剂，所述miRNA为miR-21-5p，hsa-miR-92a-3p,hsa-miR-122-5p，hsa-miR-124-3p，hsa-miR-146a-5p，miR-150-5p，hsa-miR-184，hsa-miR-196a-5p，hsa-miR-204-5p和/或hsa-miR-486-5p。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述检测miRNA表达水平的试剂为多核酸分子，每个多核酸分子编码相应的miRNA序列或者与相应的miRNA部分或全部互补，所述miRNA为miR-21-5p，hsa-miR-92a-3p,hsa-miR-122-5p，hsa-miR-124-3p，hsa-miR-146a-5p，miR-150-5p，hsa-miR-184，hsa-miR-196a-5p，hsa-miR-204-5p和/或hsa-miR-486-5p。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，进一步含有内部稳定对照RNU6。

6.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，用于检测血浆肠源(A33阳性)外泌体中miRNA表达水平，所述miRNA为miR-21-5p，hsa-miR-92a-3p,hsa-miR-122-5p，hsa-miR-124-3p，hsa-miR-146a-5p，miR-150-5p，

7.测量miRNA表达水平的试剂在制备监测结直肠癌治疗进程中的用途，所

8.促进hsa-miR-21-5p、hsa-miR-92a-3p、hsa-miR-124-3p、hsa-miR-184、hsa-miR-196a-5p、hsa-miR-204-5p和/或hsa-miR-486-5p表达下调，或者hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-122-5p和/或hsa-miR-150-5p表达上调的一种或多种多核酸分子在制备治疗或预防结直肠癌药物中的用途。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述一种或多种核酸分子编码

10.如权利要求8所述的用途，所述一种或多种多核酸分子与相应的miRNA

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【技术特征摘要】

1.mirna作为结直肠癌检测或治疗靶点的用途，其特征在于，所述mirna选自mir-21-5p，hsa-mir-92a-3p,hsa-mir-122-5p，hsa-mir-124-3p，hsa-mir-146a-5p，mir-150-5p，hsa-mir-184，hsa-mir-196a-5p，hsa-mir-204-5p及hsa-mir-486-5p的一种或多种。

2.测量mirna表达水平的试剂在制备结直肠癌诊断试剂中的用途，所述mirna为mir-21-5p，hsa-mir-92a-3p,hsa-mir-122-5p，hsa-mir-124-3p，hsa-mir-146a-5p，mir-150-5p，hsa-mir-184，hsa-mir-196a-5p，hsa-mir-204-5p，hsa-mir-486-5p的一种或多种，所述诊断试剂通过测量样品中所述mirna的表达水平来诊断受试者是否患有结直肠癌或处于结直肠癌的风险中，其中与对照样品相应的mirna表达水平相比，hsa-mir-21-5p、hsa-mir-92a-3p、hsa-mir-124-3p、hsa-mir-184、hsa-mir-196a-5p、hsa-mir-204-5p和/或hsa-mir-486-5p表达上调，或者hsa-mir-146a-5p，hsa-mir-122-5p和/或hsa-mir-150-5p表达下调，指示着受试者患有结直肠癌或处于发生结直肠癌的风险中。

3.一种结直肠癌检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有能够检测mirna表达水平的试剂，所述mirna为mir-21-5p，hsa-mir-92a-3p,hsa-mir-122-5p，hsa-mir-124-3p，hsa-mir-146a-5p，mir-150-5p，hsa-mir-184，hsa-mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：王漱阳，杨乐梅，项建斌，娄加陶，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：

全部详细技术资料下载我是这个专利的主人