【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，特别涉及一种缬氨酸抗噬菌体菌株及抗噬菌体技术。
技术介绍
1、l-缬氨酸作为三大支链氨基酸(branched-chain amino acid，bcaa)的一种，属于必需氨基酸，在人和动物中不能合成，只能通过从外界补充获得。目前，l-缬氨酸被广泛用于食品和医药领域，主要包括食品添加剂、营养增补液及风味剂等；广泛用于化妆品制备、以及用作抗生素或者除草剂前体等；另外，随着对饲料质量和配比需求的提高，在未来l-缬氨酸在饲料添加剂行业中的作用将越来越重要，需求量会越来越大，未来市场具有极大的潜力。我公司已经具有大规模缬氨酸生产能力，构建的缬氨酸生产菌株(如cn2020104014225)在生产中取得了巨大的成功。
2、噬菌体是侵染细菌和放线菌的病毒，具有超显微、无细胞结构、专性活细胞寄生等特征。噬菌体污染现象普遍在氨基酸发酵工业存在，会造成发酵周期延长、发酵产量降低、倒罐、经济损失、浪费时间等问题。为解决噬菌体污染的问题，通常采用多方面综合治理的措施，即控制生产环境质量、化学防治及更换或轮流使用不同的生长菌株等方法。然而防治过程往往不够彻底，这是由于噬菌体分布极其广泛，凡是有细菌的地方就可能存在相应的噬菌体，而且噬菌体体积较小，一般的过滤装置难以将其完全除去。
3、因此人们开始改变“预防为主，防重于治”的思路，开始探索从菌株本身即具有抗噬菌体的特性。从而从根本上防止噬菌体的污染对工业化大生产的危害。抗噬菌体生产菌株的选育可以从根本上解决这一问题，从而保证发酵过程连续、稳定地进行。王强等筛序到了
技术实现思路
1、本专利技术通过紫外照射诱变，筛选得到了一株具有噬菌体抗性的缬氨酸生产菌株，并对其进行进一步研究发现，该菌株的编码一种插入元件蛋白(insertion elementprotein)的ecolc_1612基因发生一段776个核苷酸的缺失。以同样方法缺失该片段获得了具有抗噬菌体性能的菌株。
2、本专利技术的第一个方面涉及通过紫外照射诱变，筛选得到了一株具有噬菌体抗性的缬氨酸生产菌株。
3、本专利技术的第二个方面，涉及一种缺失插入元件蛋白(insertion elementprotein)的ecolc_1612基因在构建基因工程菌株中的用途。
4、在一个实施例中，本专利技术抗噬菌体菌株的筛选方法为：
5、(一)紫外诱变
6、(1)在酒精灯火焰的保护下在培养皿中放入无菌转子，菌株经过活化培养，取对数生长期菌液10-20ml至两个无菌空平皿中，搅拌条件下，在距离菌液表面50cm处，紫外照射照射时间60min；
7、(2)照射结束后，关闭搅拌；将照射后的菌液转接到摇瓶中37℃下，200rpm培养24h；
8、(3)所得培养物继续进行紫外照射，重复30次，获得紫外诱变后的菌株培养物；
9、(二)噬菌体筛选
10、(1)紫外诱变传代结束后菌液直接平板划线挑取100个单菌落进行噬菌体侵染工作，取单菌落分别接入lb培养基中，37℃培养24h。
11、(2)将大肠杆菌t1、t4、ms2混合噬菌体液接入生长好的菌液中继续培养24h，分别观察其生长状况。菌株培养液在变清后又逐渐变浑浊，镜检结果显示培养液中出现少量正常形态的菌体；将该部分出现再次生长的菌液进行lb培养基传代培养，获得具有抗噬菌体性能的菌株。
12、在一个实施例中，本申请鉴定了具有抗噬菌体性能菌株的基因型。并利用该基因构建了具有抗噬菌体性能的工程菌
13、与现有技术相比，本专利技术具有下述有益技术效果：
14、1、本专利技术提供了一种具有噬菌体抗性的缬氨酸生产菌株；可以有效防止在发酵过程中噬菌体污染的问题，降低发酵失败而倒罐的风险，避免经济损失，避免浪费生产时间，具有极高的工业利用价值。
15、2、本专利技术提供了一种抗噬菌体大肠杆菌的构建方法。通过该方法可以获得具有抗噬菌体性能的基因工程菌。为发酵产业抗噬菌体菌株的构建提供了一种途径。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种抗噬菌体的缬氨酸发酵菌株，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2022703。
2.一种构建抗噬菌体菌株的方法，其特征在于，敲除编码插入元件蛋白的基因片段。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，敲除的片段包含编码序列3所示蛋白的基因片段。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，敲除的片段包含序列2所示的片段。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，敲除的片段为序列1所示的核苷酸片段。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述菌株为大肠杆菌。
7.一种插入元件基因在构建抗噬菌体菌株中的用途，其特征在于，敲除编码插入元件蛋白的基因片段。
8.如权利要求6所述的用途，其特征在于：敲除的片段包含编码序列3所示蛋白的基因片段；优选缺失片段包含序列2所示的片段。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，敲除的片段为序列1所示的核苷酸片段。
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述菌株为大肠杆菌。
【技术特征摘要】
1.一种抗噬菌体的缬氨酸发酵菌株，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctcc no：m 2022703。
2.一种构建抗噬菌体菌株的方法，其特征在于，敲除编码插入元件蛋白的基因片段。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，敲除的片段包含编码序列3所示蛋白的基因片段。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，敲除的片段包含序列2所示的片段。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，敲除的片段为序列1所示的核苷酸片...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩成秀，张学礼，刘树蓬，刘萍萍，常柯欣，李妍茜，樊飞宇，
申请(专利权)人：安徽华恒生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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