重组谷氨酸棒杆菌及在发酵合成微生物靛蓝色素的应用以及定量分析L-谷氨酰胺的方法技术

本发明专利技术公开了重组谷氨酸棒杆菌及在发酵合成微生物靛蓝色素的应用以及定量分析L‑谷氨酰胺的方法，通过将来源于Vogesella Indigofera的新型靛蓝合成酶IgiD重组至穿梭表达载体pEKEX2的tac启动子下，以Corynebacterium glutamicum ATCC14067为表达宿主，构建了重组谷氨酸棒杆菌C.glutamicum IgiD；该重组菌在发酵培养基中，经30℃，250rpm培养6h后0.5mM IPTG诱导，25℃发酵72h时，靛蓝色素产量达到2.8g/L；快速定量检测L‑谷氨酰胺的方法：发酵菌体经破壁后制备的粗酶液检测L‑谷氨酰胺线性范围为0‑1000μM，纯化酶液检测L‑谷氨酰胺线性范围为0‑3000μM；本发明专利技术所建立的快速分析方法可以在25分钟内完成复杂生物样品中L‑谷氨酰胺的快速定量分析，具有较高的准确度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种重组谷氨酸棒杆菌，及重组谷氨酸棒杆菌在发酵合成微生物靛蓝色素的应用，本专利技术还涉及定量分析l-谷氨酰胺的方法，属于生物。

技术介绍

1、微生物合成的靛蓝色素由l-谷氨酰胺(gln)通过4’-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶活化的非核糖体多肽合成酶(nrps)催化合成，相对人工化学合成的靛蓝色素，微生物合成过程有安全性高、污染低、成本低等优点，可以作为环保型天然色素，具有较为广阔的应用前景。然而天然的靛蓝色素生产菌种的色素合成因受到严格调控，其产量都很低，通过将靛蓝色素合成酶及相关基因转移到模式发酵菌株中，可以有效提高靛蓝色素产量。相比常用的靛蓝合成重组宿主大肠杆菌而言，corynebacterium glutamicum atcc14067具有如下优点：(1)生物安全性高，并兼有营养需求低、生长速度快等特点；(2)更强的l-谷氨酸合成能力，可大量合成靛蓝合成的底物gln；(3)具有能活化靛蓝合成酶的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶。

2、另外，gln是动物细胞生长重要的能量和营养物质，但因其稳定性较差，在培养过程中需要临用时或定时补充，在细本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于：通过将来源于Vogesella Indigofera的靛蓝合成酶IgiD重组至穿梭表达载体pEKEX2的tac启动子下，以Corynebacterium glutamicumATCC14067为表达宿主，构建重组谷氨酸棒杆菌；所述靛蓝合成酶IgiD序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌在发酵合成微生物靛蓝色素的应用。

3.根据权利要求2所述的重组谷氨酸棒杆菌在发酵合成微生物靛蓝色素的应用，其特征在于：在发酵合成过程中，发酵培养基中无需添加L-谷氨酰胺。

4.利用权利要求1所述的重组谷氨...

【技术特征摘要】

1.重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于：通过将来源于vogesella indigofera的靛蓝合成酶igid重组至穿梭表达载体pekex2的tac启动子下，以corynebacterium glutamicumatcc14067为表达宿主，构建重组谷氨酸棒杆菌；所述靛蓝合成酶igid序列如seq id no.1所示。

2.权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌在发酵合成微生物靛蓝色素的应用。

3.根据权利要求2所述的重组谷氨酸棒杆菌在发酵合成微生物靛蓝色素的应用，其特征在于：在发酵合成过程中，发酵培养基中无需添加l-谷氨酰胺。

4.利用权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌发酵生产靛蓝色素废弃细胞中重组靛蓝合成酶粗酶液快速定量分析复杂样品中l-谷氨酰胺的方法，其特征在于：利用废弃细胞破壁获得的重组靛蓝合成酶粗酶液专一性催化l-谷氨酰胺合成高消光系数的靛蓝色素这一特性，在25-35℃，以样品中l-谷氨酰胺为底物，在反应体系...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱益波，袁天慧，张怡婷，赵钰，成琦，彭锐洪，任聪，徐得磊，
申请(专利权)人：常熟理工学院，
类型：发明
国别省市：