一种用于糖原合成激酶3β基因突变检测的试剂及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种糖原合成激酶（GSK3β）基因突变检测的试剂、PCR检测方法及应用，属于基础生物研究及生物检测技术领域。检测试剂包括引物、肽核酸荧光探针及野生型互补的肽核酸序列，正向引物如序列表中SEQ ID NO.1、NO.3；反向引物如序列表中SEQ ID NO.2、NO.4；肽核酸荧光探针如序列表中SEQ ID NO.5、NO.6；野生型互补肽核酸序列如序列表中SEQ ID NO.7、NO.8。本发明专利技术从转录水平能快速发现Wnt信号通路中GSK3β基因突变情况，具有特异性强、灵敏度高等显著优点，为抗癌药物筛选，新靶向药物探讨、基础科学研究提供工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学及临床分子诊断
，特别是涉及一种用于糖原合成激酶3β(GSK3β)基因突变检测的试剂、PCR检测方法及应用。
技术介绍
Wnt信号通路广泛存在于无脊椎动物和脊椎动物中，是一类在物种进化过程中高度保守的信号通路。Wnt信号在动物胚胎的早期发育、器官形成、组织再生和其它生理过程中，具有至关重要的作用。如果这条信号通路中的关键蛋白发生突变或者异常表达，导致信号异常活化，就可能诱导癌症的发生。Wnt信号通路包括经典的Wnt信号通路与非经典的Wnt信号通路，在经典通路即Wnt-β-catenin信号通路中，Wnt因子通过激活细胞膜上的Frizzle/LRP5/6协同受体后抑制细胞内游离β-catenin蛋白的磷酸化和降解，细胞质中的β-catenin蛋白水平升高后将发生β-catenin蛋白的核移位，导致细胞核中β-catenin蛋白升高，胞核中β-catenin蛋白能够联合Pygo2、Bcl-9以及FoxM1蛋白共同与TCF/LEF-1转录因子家族形成复合体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于糖原合成激酶3βGSK3β基因突变检测的试剂，其特征在于，包括用于阻断野生型GSK3β基因扩增的野生型PNA序列、用于特异性扩增Y140C、E249K突变型GSK3β基因序列的一组引物对及突变型PNA荧光探针：所述检测GSK3β基因Y140C突变正向引物如序列表中SEQ ID NO.1；所述检测GSK3β基因Y140C突变反向引物如序列表中SEQ ID NO.2；所述检测GSK3β基因E249K突变正向引物如序列表中SEQ ID NO.3；所述检测GSK3β基因E249K突变反向引物如序列表中SEQ ID NO.4；所述检测GSK3β基因Y140C突变PNA荧光探针如序列表中SEQ I...

【技术特征摘要】
1.一种用于糖原合成激酶3βGSK3β基因突变检测的试剂，其特征在于，包括
用于阻断野生型GSK3β基因扩增的野生型PNA序列、用于特异性扩增Y140C、
E249K突变型GSK3β基因序列的一组引物对及突变型PNA荧光探针：
所述检测GSK3β基因Y140C突变正向引物如序列表中SEQIDNO.1；
所述检测GSK3β基因Y140C突变反向引物如序列表中SEQIDNO.2；
所述检测GSK3β基因E249K突变正向引物如序列表中SEQIDNO.3；
所述检测GSK3β基因E249K突变反向引物如序列表中SEQIDNO.4；
所述检测GSK3β基因Y140C突变PNA荧光探针如序列表中SEQIDNO.5；
所述检测GSK3β基因E249K突变PNA荧光探针如序列表中SEQIDNO.6；
所述特异性结合包含GSK3β基因140密码子野生型PNA序列如序列表中
SEQIDNO.7；
所述特异性结合包含GSK3β基因249密码子野生型PNA序列如序列表中
SEQIDNO.8；
所述PNA荧光探针的5'端的荧光报告基团为：FAM、HEX、TET、JOE、
VIC、ROX、Cy3或Cy5，3'端的淬灭基团为：TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、
BHQ3或DABCYL。
2.根据权利要求1所述的用于糖原合成激酶3βGSK3β基因突变检测的试剂，
其特征在于，所述的检测试剂还包括PCR反应液、140密码子和249密码子突
变型参考品、140密码子和249密码子野生型参考品，其中PCR反应液包括：
DEPC水、具有5'→3'外切活性的DNA聚合酶、dNTPs、10×PCRBuffer、RNASIN、
M-MLV逆转录酶、oli...

【专利技术属性】
技术研发人员：周策凡，唐景峰，陈兴珍，张毅，秦文英，
申请(专利权)人：湖北工业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42