定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法技术

本发明专利技术公开了一种定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法，包括以下步骤：a.检测样本RNA的提取；b.将步骤a中获得RNA逆转录为cDNA；c．以步骤b中获得的cDNA为模板，应用上、下游引物和探针，进行荧光定量PCR，测定样本中HERC2P2表达量。所述上游引物的核酸序列如Seq ID NO.1所示；下游引物的核酸序列如 Seq ID NO.2所示；Taqman探针核酸序列如Seq ID NO.3所示。本发明专利技术有效的填补定量检测HERC2P2表达量方法领域的空白，能够快速、精确、有效的检测胶质瘤中HERC2P2表达量，对临床胶质瘤病人级别和生存期预测具有指导意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于核酸的测定和检测方法领域，具体是一种定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法。
技术介绍
长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)是近年来发现的RNA家族重要成员，是指长度在200nt以上，并且不编码蛋白的RNA。最初，这些非编码的转录本被认为是“暗物质”或“噪音”。近年来，随着RNA研究技术和水平的不断提高，人们发现非编码RNA在生物体中发挥着十分重要的功能。LncRNA能够参与免疫系统的调控，X染色体的沉默，蛋白质功能的调控等一系列生理功能。近期发现，HERC2P2也是一个lncRNA，位于15号染色体上，是HERC2的假基因，共有6075个碱基，其与肿瘤的关系也十分密切。所以定量测定HERC2P2的表达量对肿瘤的预防和治疗具有重要的临床意义。Taqman探针法是高度特异性的定量PCR技术。其核心是利用Taq酶的3’-5’外切酶活性，切断探针，产生荧光信号。由于探针与模板是特异性结合，所以荧光信号的强弱就代表了模板的数量。在Taqman探针法的定量PCR反应体系中，包括一对PCR引物和一条探针。探针只与模板特异性结合，其结合位点在两条引物之前。探针的5’端标记有报告基团（Reporter，R），如FAM，VIC等，3’端标记有荧光淬灭基团（Quencher，Q），如TAMRA等。当探针完整的时候，报告基团所发射的荧光能量被淬灭基团吸收，仪器检测不到信号。随着PCR的进行，Taqman酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针，其3’-5’外切核酸酶活性就会将探针切断，报告基因远离淬灭基团，其能量不能被吸收，及产生荧光信号。所以，每经过一个PCR循环，荧光信号也和目的片段一样，有一个同步指数增长的过程，信号强度就代表了模板DNA的拷贝数。普通的SYBRGreenRealTimePCR，荧光染料非特异性的结合在双链DNA上，容易受到非特异性扩增和引物二聚体的影响，而Taqman探针法能够显著提高PCR检测的灵敏性和准确度。并且还能够利用多种荧光同时进行多重分析，这也是普通SYBR等DNA结合荧光基团所不具备的。
技术实现思路
本专利技术就是为了填补定量检测HERC2P2表达量方法领域的空白，所提出的一种定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法。本专利技术是按照以下技术方案实现的。一种用于定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的探针和引物，上游引物的核酸序列如SeqIDNO.1所示；下游引物的核酸序列如SeqIDNO.2所示；Taqman探针核酸序列如SeqIDNO.3所示。一种应用上述的探针和引物定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法，包括以下步骤：a.检测样本RNA的提取；b.将步骤a中获得RNA逆转录为cDNA；c．以步骤b中获得的cDNA为模板，应用权利要求1所述的引物和探针，进行荧光定量PCR，测定样本中HERC2P2表达量。本专利技术获得了如下的有益效果。本专利技术有效的填补定量检测HERC2P2表达量方法领域的空白，能够快速、精确、有效的检测胶质瘤中HERC2P2表达量，对临床胶质瘤病人级别和生存期预测具有指导意义。附图说明图1是本专利技术Taqman探针PCR过程图；图2是本专利技术HERC2P2的表达量与胶质瘤级别之间的关系图；图3是本专利技术HERC2P2的表达量与病人存活率之间的关系图。具体实施方式1.HERC2P2基因的核苷酸序列（GeneID:400322）tcggcccgcccctcgggccgcgagaggcgccgggatcgcgggcgccggctgagccagcgg60ctcttgggaggctgcgtccgcgcgccggcggggcgaggcggccgggccctgcgcgtcagg120cctgagacctgggaggaagctggagaaaagatgccctctgaatctttgtgtttggctgcc180caggctcgcctcgactccaaatggttgaaaacagatatacagcttgcattcacaagagat240gggctctgtggtctgtggaatgaaatggttaaagatggagaaattgtatacactggaaca300gaatcaacccagaacggatagctccctcctggaaaagcttttgtctggtcctctgagccc360cagtgagagtttcctgaggtacctcacccttccacaagacaacaggcttgccattgatct420gcaacaaacggcggttgttgtcatggcccatttagaccgtctggctacaccctgtagatg480cctcctctgtgtagctctccgacgtctcataagagtcattttttacaggtcagaactgta540gaaataatgagaaagtgacatttgtacgcatagctgatttggagaaccataataacgatg600gaggcttctggactgtgattgacgggaaagtgtatgatataaaggacttccagacacagt660cgttaacagaaaatagtattcttgctcagtttgcaggggaagacccagtggtagctttgg720aagctgctttgcagtttgaagacacccgggaatccatgcacgcattttgtgttggccagt780atttggagcctgaccaagaaggcgtcaccataccagatctggggagtctctcctcacctc840tgatagacacagagaggaatctgggcctgcttctcggattacacgcttcctatttagcaa900tgagcacaccgctgtctcctgtcgagattgaatgtgccaaatggcttcagtcatccatct960tctctggaggcctgcagaccagccagatccactacagctacaacgaggagaaagacgagg1020accactgcagctccccagggggcacacctgccagcaaatctcgactctgctcccacagac1080gggccctgggggaccattcccaggcatttctgcaagccattgcagacaacaacattcagg1140atcacaacgtgaaggactttttgtgtcaaatagaaaggtactgtaggcagtgccatttga1200ccacaccgatcatgtttccccccgagcatcccgtggaagaggtcg本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的探针和引物，其特征在于：上游引物的核酸序列如Seq ID NO.1所示；下游引物的核酸序列如 Seq ID NO.2所示；Taqman探针核酸序列如Seq ID NO.3所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的探针和引物，其特征在于：上游引物的
核酸序列如SeqIDNO.1所示；下游引物的核酸序列如SeqIDNO.2所示；Taqman探针核酸
序列如SeqIDNO.3所示。
2.一种应用权利要求1所述的探针和引物定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法，其
特征在于：包括以下步骤：
a.检测样本RNA的提取；
b.将步骤a中获得RNA逆转录为cDNA；
c．以步骤b中获得的cDNA为模板，应用权利要求1所述的引物和探针，进行荧光定量
PCR，测定样本中HERC2P2表达量。
3.根据权利要求2所述的定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法，其特征在于：所述
步骤a中提取样本RNA的步骤为：取小块样本，加入Trizol溶液并研磨；按照体积比为Trizol
溶液﹕三氯甲烷=5:1的比例加入三氯甲烷，2-8℃，12000-13000rpm离心12-18min；取上层
水相加入等体积的异丙醇，2-8℃，12000-13000rpm离心10min；弃上清，先后用与...

【专利技术属性】
技术研发人员：康春生，王琦雪，韩磊，周俊虎，
申请(专利权)人：天津医科大学总医院，
类型：发明
国别省市：天津;12