一种新的腺病毒载体及其生产方法技术

本发明专利技术涉及一种新的腺病毒载体及其生产方法。该载体生产包括两个主要步骤，一是把外源的基因克隆到穿梭载体里面，二是穿梭载体和腺病毒骨架载体的重组。本发明专利技术所用穿梭载体是在pShuttle-CMV载体基础上改进的—pCMV-FH；所用腺病毒骨架载体是在现有腺病毒骨架载体内克隆进了一个表达ISceI的酵母基因；所用重组菌株是SW102。本发明专利技术穿梭载体克隆方法及穿梭载体和腺病毒骨架载体的重组方法均采用高通量的生产方法。采用高通量穿梭载体的克隆方法和高通量的重组方法重复操作至第五轮就可以把99%的穿梭载体克隆重组到腺病毒载体之内。本发明专利技术的高通量腺病毒载体生产方法重组效率高达85-90%，大幅简化实验步骤，时间也大大缩短，且实验成本明显降低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，涉及，具体涉及一种高通量腺病毒载体及其生产方法。
技术介绍
腺病毒载体是转染人类细胞最有效的，多样化的系统，它被广泛的应用在生物医学研究和基因疗法领域。腺病毒载体能够有效的转染分裂或不分裂的细胞，其转染效率可达到百分之百。腺病毒载体进入细胞后不整合到人类基因组，所以它相对比较安全。腺病毒的生产比较容易达到很高的滴度，并且能够容纳多达30kb以上的外源基因。腺病毒重组蛋白的表达可以达到20-30%的细胞重量。尽管腺病毒载体有很多优点，但是它的生产过程比较繁琐，生产周期也比较长。一个腺病毒的生产大约需要6-8周的时间。到目前为止还没有高通量的生产技术。腺病毒是线性的，双链DNA病毒。因为它有三万六千个碱基对，所以直接克隆外源的基因会非常困难。克隆外源基因到腺病毒载体有很多种不同的方式，但最常见的是Agilent的pAdEasy 系统。这个系统利用大肠杆菌{Escherichia co7i)BJ5183和同源重组的方式。重组是在一个含有外源基因的穿梭载体和含有腺病毒基因组的质粒载体之间进行的。然而BJ5183生长缓慢，质粒产量非常微量。因为用来重组的一整套酶在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新的腺病毒载体，其特征在于，一是把外源的基因克隆到穿梭载体里面，二是穿梭载体和腺病毒骨架载体的重组，腺病毒骨架载体内克隆进了一个表达ISceI的酵母基因。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙在仁，
申请(专利权)人：山东维真生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：