应用腺病毒载体介导RNA干扰技术沉默固醇调控元件结合蛋白基因1的方法技术

本发明专利技术公开了一种应用腺病毒载体介导RNA干扰技术沉默固醇调控元件结合蛋白基因1的方法，该方法包括以下步骤：A1，克隆秦川牛固醇调控元件结合蛋白1基因（SREBP1）；A2，psiCHECK-Ⅱ-SREBP1表达载体的构建；A3，靶向SREBP1基因shRNA的设计、合成；A4，pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA表达载体的构建；A5，shRNA干扰效率的测定、筛选；A6，重组腺病毒载体的构建；A7，腺病毒包装、扩增、滴度测定；为应用RNA干扰技术研究秦川牛SREBP1基因的功能提供一种有效的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种应用腺病毒载体介导RNA干扰技术沉默固醇调控元件结合蛋白基因I (SREBPl)的方法
技术介绍
固醇调节兀件结合蛋白(Sterolreg μ latory element binding proteins:SREBPs)是一种膜结合蛋白，属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族，它主要通过促进糖酵解和脂肪生成而在能量平衡中发挥重要作用(Eberle et al., 2004 ；Shimomuraet al., 1997 ；ffang et al.，1994)研究已经表明SREBPs家族是通过结合下游基因(包括SCD)启动子中的SRE (5，-TCACNCCAC-3，)序列来调控基因的转录(Shimano，2001 )。SREBP-1c能够促进PPAR Y的表达和内源性PPAR Y的产生，并与PPAR Y和CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT enhancer binding protein, C/EBPs)共同调控脂肪细胞分化(Kim etal.，1998)。过表达SREBP-1c增加了 3T3-L1前体脂肪细胞中脂肪酸合酶(fatty本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用腺病毒载体介导RNA干扰技术沉默固醇调控元件结合蛋白基因1的方法，其特征在于，包括以下步骤：A1步骤，克隆秦川牛固醇调控元件结合蛋白1基因（SREBP1）；A2步骤，psiCHECK?Ⅱ?SREBP1表达载体的构建；A3步骤，靶向SREBP1基因shRNA的设计、合成；A4步骤，pENTR/CMV?GFP/U6?shRNA表达载体的构建；A5步骤，shRNA干扰效率的测定、筛选；A6步骤，重组腺病毒载体的构建；A7步骤，腺病毒包装、扩增、滴度测定；其中：所述A1步骤包括：步骤A11，设计、合成PCR扩增引物，具体执行以下操作：根据GenBank收录的牛的SREBP1基因序列（Acces...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：昝林森，付常振，成功，王洪宝，王虹，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：