多基因修饰iPS细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种多基因修饰iPS细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，包括含目的基因PDX-1，NeuroD，MafA腺病毒包装、小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养细胞的制备、MEFs受染重编程为小鼠iPS细胞、小鼠iPS细胞受染分化为胰岛素分泌细胞。本发明专利技术方法简便、易操作、效果好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种。
技术介绍
诱导多能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells, iPSCs)是将成体细胞重编程为具有多分化潜能的干细胞，它在形态学、表观遗传学、全基因表达谱及分化潜能方面与胚胎干细胞(ESCs)极其相似，其优点是个体特异来源的iPS细胞能避免免疫排斥问题。同时iPS细胞生成技术不涉及胚胎毁损等伦理学问题。科学研究等工作中需要多基因修饰iPS细胞分化为胰岛素分泌细胞。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种方法简便、易操作、效果好的。本专利技术的技术解决方案是:一种，其特征是:包括下列步骤: (一)含目的基因PDX-1，NeuroD,MafA腺病毒包装(I)转染前质粒的准备1.1重组质粒Pac I单酶切，37°C酶切2h ；1.2采用经典酚氯仿抽提法对单酶切质粒进行纯化，用紫外分光光度计测定纯化质权浓度；(2)转染2.1取处于对数生长期的293A细胞，用0.05%胰酶消化，细胞计数后，按照每孔4.5X105个细胞，种于6孔板，37°C，5%C02的培养箱中培养过夜；2.2第二天转染前移去培养液，换2ml Opt1-MEM培养液；2.3取本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多基因修饰iPS细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，其特征是：包括下列步骤：（一）含目的基因PDX?1，NeuroD，MafA腺病毒包装（1）转染前质粒的准备1.1??重组质粒Pac?I单酶切，37℃酶切2h；1.2??采用经典酚氯仿抽提法对单酶切质粒进行纯化，用紫外分光光度计测定纯化质粒浓度；（2）转染2.1取处于对数生长期的293A细胞，用0.05%胰酶消化，细胞计数后，按照每孔4.5×105个细胞，种于6孔板，37℃，5%CO2?的培养箱中培养过夜；2.2第二天转染前移去培养液，换2ml?Opti?MEM培养液；2.3取2μg线性化的质粒加入250μl经37℃预热的Opti?MEM中，混...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王志伟，朱铭岩，范向军，陆玉华，朱沙俊，王尧，郭青松，王雷，黄龑，薄祥坤，常旭，袁骁琪，张太哲，
申请(专利权)人：南通大学附属医院，
类型：发明
国别省市：