本发明专利技术公开了一种高胰岛素型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，通过同时检测分析个体的LEP基因、LEPR基因、IL-6基因、ADIPOQ基因SNPs位点基因携带型为所有的受检者提供高胰岛素型肥胖体质评估，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种高胰岛素型肥胖基因体质评估方法，可用于评估高胰岛素型肥胖基因体质情况，针对性的提示受检者根据遗传体质选择不同的减肥策略，属于分子生物学
。
技术介绍
肥胖症是一种热量代谢障碍，摄入热量超过消耗的热量，引起体内脂肪积聚过多所致。一般认为超过按身高所测标准体重20%即可成为肥胖。肥胖症是一种与遗传因素及生活方式密切相关的慢性疾病，它会引发血脂升高，容易造成脂肪肝、动脉血管病变、心脏病、糖尿病，肥胖的儿童还会引发性功能发育不良并导致成人期各种疾病发病率和死亡率上升。因此，若通过有效的方法来预防，就能避免过早地出现高血压、冠心病、糖尿病、脑血管病等疾患，从而提闻人们的生存质量。由于至少有40%躯体脂肪量的差异是由遗传因素引起的，所以很容易明确遗传对肥胖有很大影响。遗传体质不同的人在患肥胖症时应采取不同的减肥策略，利用现代科学研究成果，开发一项基于分子遗传基础的体重管理分子检测产品会对减肥者的减肥计划提供基因减肥概念的个性化体重管理建议，具有较强的社会意义和市场前景。目前肥胖症的临床治疗方法主要是饮食和运动疗法，但存在着碳水化合物、脂肪以及蛋白质摄入量控制“一刀切”和盲目采用减肥药物的非个体化治疗方式。原因主要在于无法明确地将患者区分成为不同的减重体质，从而对不同患者是否需要严格控制碳水化合物的摄入，是否需要控制脂肪的摄入，是否需 要使用减肥药物，以及应该使用哪类减肥药物的治疗措施选择上没有明确指导。高胰岛素型肥胖约占肥胖病患55%的比例，在所有肥胖病患中排名第一！胰岛素作用在于降低血糖，促进脂肪合成。在正常情况下，多余的血糖会被胰岛素扫除，迅速进入饥饿的身体细胞中，被作为能量燃烧掉。如果您胰岛素相关基因变异，血糖的升降导致了胰岛素不能正常发挥作用。研究发现，高胰岛素型肥胖相关基因变异对碳水化合物制品的基础代谢率功能差，影响细胞脂肪代谢，导致热量的代谢缓慢，使细胞囤积脂肪造成肥胖。现代人过于精致的饮食，比如蛋糕、西点面包、巧克力、糖果、甜份过高的饮料等等；最容易被一般人所忽略的水果中所含的高糖分，这些食物都很容易使得胰岛素快速升高，造成脂肪合成增加；东方人主食大多为淀粉类食物，没有吃到饭或面往往会有一种没吃饱的感觉。高胰岛素型基因变异者，饮食重点在于食物的GI值。低GI值的食物在摄食后，使胰岛素上升的速度较慢且上升的幅度较小，如能以此为饮食原则，可减缓胰岛素升高的速度，使血糖维持稳定。研究发现LEP，LEPR，IL6、ADIPOQ基因与高胰岛素型肥胖体质有关。瘦素(LEP)，是肥胖(ob)基因的产物，由146aa组成的单链蛋白质，分子量为IBkDa0瘦素主要由脂肪组织产生，在食欲控制、脂肪代谢和体重调节中发挥重要作用。瘦素主要作用在种属神经系统，尤其是下丘脑来影响食物摄取。瘦素的生物学作用是通过其受体来实现的，它的受体只要表达在下丘脑。在人类，瘦素的水平与身体质量指数(BMI)和脂肪含量百分比有关，在肥胖个体中，瘦素水平是增加的。瘦素具有双重作用，它在降低食欲的同时增加能量消耗，导致更多的脂肪燃烧。瘦素的分泌是遵循人体生理周期的，也就是说，在肥胖和瘦的个体中，瘦素的水平在夜间升高。肥胖基因的突变会导致瘦素缺乏，从而引起肥胖。内源性的瘦素可以标准化人的体重，相反个体对内源性瘦素的不敏感则导致肥胖病人体内的瘦素水平升高。其它导致肥胖的因子可能影响瘦素的作用:如胰岛素、糖皮质激素、儿茶酚胺类和性激素。LEPRQeptin receptor)为瘦素受体编码基因，由该基因编码的蛋白可以识别和转运重要的肥胖相关蛋白瘦素，调节人体的体重、能量代谢和免疫应答等通路，并最终控制的超重或者肥胖的发生或者抑制。国内外的众多研究表明LEPR基因上的多态现象与血糖、胰岛素、血清瘦素、甘油三脂等因素相关。研究发现，生活方式干预(低热卡饮食和运动)3个月后，携带Lys656/Lys656基因型者较携带Lys656/Asn656和Asn656/Asn656基因型者体重、体重指数、体脂、腰围、收缩压和血瘦素水平显著下降。IL-6是一种多功能细胞因子，参与多种细胞的生长、分化和功能调节，在免疫和炎症反应中具有重要作用，是机体重要的免疫-神经-内分泌调节因子。其功能的多样性于许多细胞表面有IL-6受体的表达，IL-6受体和信号传导部分GP130将多种生物信号传给不同的组织和细胞。IL-6可由T细胞、B细胞、单核细胞和非淋巴细胞产生，其基因表达的变化与某些疾病的病理生理和病理变化密切相关。IL-6的表达状况受基因调控，特别是IL-6的基因调控区与IL-6的表达具有更自接的关系；其血清水平的变化与一些疾病的病理生理过程密切相关。携带风险基因型时白细胞介素6表达增加，引起胰岛素抵抗，导致糖尿病易感性增加。ADIPOQ 为 adiponectin,ClQ and collagen domain containing(脂联蛋白的 ClQ和胶原结构域)编码基因，它编码一种在结构上与胶原X和VIII以及补体Clq类似的蛋白质。这种基因主要在脂肪组织中表达，所编码的蛋白质在血液中循环，并且和代谢以及激素产生过程有关。ADIPOQ突变或`异常表达等都会引起血浆脂联素浓度偏低，易导致胰岛素敏感性下降，脂肪酸氧化减少，从而导致肥胖。目前的基础研究已能从理论上证明基因分型检测可以用于判断肥胖体质的类型，而且检测方法简便、检测成本在可接受程度中、检测结果可信。因此，基因分型检测用于评估肥胖体质的可行性是明确的。根据基因检测结果结合体重管理测评系统建立个性化体重健康评估报告，有针对的解决体重控制问题，提高人们生活质量。因此利用现有科学、技术研究成果来开发这样一个产品，时机是成熟的。本专利技术的目的是提供一种高胰岛素型肥胖基因体质评估方法，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高胰岛素型肥胖基因体质评估方法，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。 为实现以上目的，本专利技术提供一种高胰岛素型肥胖基因体质评估方法。其具体步骤为: 步骤1:检测的样品类型与采样方法 用采样拭在口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本； 步骤2:基因组DNA的抽提方法 采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时一 2.5小时，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测； 步骤3:荧光定量PCR反应 将每一个被测者样本分别放入4个反应孔，同时检测4个位点，即瘦素(LEP)rsl3306517 ;瘦素受体(LEPR) rsl805094 ;白介素 6 (IL-6) rsl800795 ;脂联素(ADIPOQ)rs2241766,另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔； 每一个反应孔的基因分型可以根据下表的引本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高胰岛素型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，具体步骤为?步骤1：检测的样品类型与采样方法用采样拭在口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本；步骤2：基因组DNA的抽提方法采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时－2.5小时，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测；步骤3：荧光定量PCR反应将每一个被测者样本分别放入4个反应孔，同时检测4个位点，即瘦素(LEP)?rs13306517；瘦素受体?(LEPR)?rs1805094；白介素6（IL?6）rs1800795；脂联素（ADIPOQ）rs2241766，另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔；每一个反应孔的基因分型可以根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan??MGB技术，进行检测试剂合成；在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μl，即浓度为20ng/μl?的DNA模板2μl?、1μl?10X荧光定量PCR反应缓冲液ABI?Taqman???MGB、0.1μl?25mM?d?NTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5μl?25mM?MgCl2溶液、0.02μl（5units/μl）Taq?DNA聚合酶、去离子水4.98μl、4个位点分别采用不同的正向引物（20μM，0.225μl）、反向引物（20μM，0.225μl）、VIC荧光探针（10μM，0.25μl）和FAM荧光探针（10μM，0.25μl）工具进行检测，引物探针如下：瘦素(LEP)?rs13306517带VIC荧光A型探针???CCAaAAAGTCCAA带FAM荧光G型探针???CCAgAAAGTCCAA正向引物???CTTCTGTTTTCAGGCCCAAG反向引物???CTTTGTCCCCGCATACTCTC瘦素受体?(LEPR)?rs1805094带VIC荧光C型探针???AAAcGAGAAAAAT带FAM荧光G型探针???AAAgGAGAAAAAT正向引物???TGAGAGGACCTGAATTTTGGA反向引物???TGCTTCAGCCACTGTACATCTT白介素6（IL?6）rs1800795带VIC荧光C型探针???TGCcATGCTAAAG带FAM荧光G型探针???TGCgATGCTAAAG正向引物???GCCTCAATGACGACCTAAGC反向引物???ACTCATGGGAAAATCCCACA脂联素（ADIPOQ）rs2241766带VIC荧光G型探针???CGGgCATGACCAG带FAM荧光T型探针???CGGtCATGACCAG正向引物???TGGACGGAGTCCTTTGTAGG反向引物???AGTCGTGGTTTCCTGGTCAT将反应孔和空白对照在PCR扩增仪上进行反应，先进行预热：50℃、2分钟，95℃、10分钟，然后再进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟、反应结束后取出后再放入荧光定量PCR仪上读取样品荧光量，得到瘦素(LEP)?rs13306517，瘦素受体?(LEPR)?rs1805094，白介素6（IL?6）rs1800795，脂联素（ADIPOQ）rs2241766四张图；步骤4：SNP基因型分析将荧光定量PCR仪上显示的最终样本荧光信号的4个图和一个NTC空白对照进行比较，每个位点理论上存在三种不同的信号，纯VIC荧光信号、VIC和FAM杂合荧光信号以及纯FAM荧光信号，分别代表该位点三种不同的基因型；（1）、瘦素(LEP)?rs13306517在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为AA基因型、坐标轴右上区域为AG基因型、坐标轴右下区域为GG基因型，?（2）、瘦素受体?(LEPR)?rs1805094在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为CC基因型、坐标轴右上区域为CG基因型、坐标轴右下区域为GG基因型，?（3）、白介素6（IL?6）rs1800795在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为CC基因型、坐标轴中间区域为CG基因型、坐标轴右下区域为GG基因型，?（4）、脂联素（ADIPOQ）rs2241766在检测结果图中，坐标轴左下区域为空白对照、坐标轴左上区域为GG基因型、坐标轴右上区域为GT基因型、坐标轴右下区域为TT基因型。...
【技术特征摘要】
1.一种高胰岛素型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，具体步骤为 步骤1:检测的样品类型与采样方法 用采样拭在口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本； 步骤2:基因组DNA的抽提方法 采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时一 2.5小时，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测； 步骤3:荧光定量PCR反应 将每一个被测者样本分别放入4个反应孔，同时检测4个位点，即瘦素(LEP)rsl3306517 ;瘦素受体(LEPR) rsl805094 ;白介素 6 (IL-6) rsl800795 ;脂联素(ADIPOQ)rs2241766,另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔； 每一个反应孔的基因分型可以根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan?_MGB技术，进行检测试剂合成； 在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为IOMl,即浓度为20ng/m的DNA模板2W ,m IOX荧光定量PCR反应缓冲液ABI Taqman ? MGB、0.1W 25mMd NTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5W 25mM MgCl2溶液、0.02W (5unitsM)TaqDNA聚合酶、去离子水4.98W、4个位点分别采用不同的正向引物(20剛，0.225W )、反向弓丨物(20剛，0.225|^1)、￥1(:荧光探针(10剛，0.25W )和FAM荧光探针(10剛，0.25W)工具进行检测，引物探针如下: 瘦素(LEP) rsl3306517 带VIC荧光A型探针 CCAaAAAGTCCAA 带FAM荧光G型探针 CCAgAAAGTCCAA 正向引物 CTTCTGITITCAGGCCCAAG 反向引物 CTTTGTCCCCGCATACTCTC 瘦素受体(LEPR) rs 1805094 带VIC荧光C型探针 AAAcGAGAAAAAT 带FAM荧光G型探针 AAAgGAGAAAAAT 正向引物 TGAGAGGACCTGAAITITGGA 反向引物 TGCTTCAGCCACTGTACATCTT 白介素 6 (IL-6)rsl800795 带VIC荧光C型探针 TGCcATGCTAAAG ...
【专利技术属性】
技术研发人员：傅咏南，王校，毛丹丹，张奕，卞雪莲，潘峰，乐涵骏，
申请(专利权)人：上海中优医药高科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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