一种诺如病毒实时等温扩增检测试剂盒及其引物和探针制造技术

技术编号:8410161 阅读:288 留言:0更新日期:2013-03-14 00:44
本发明专利技术涉及一种基于实时核酸序列依赖性扩增(Nucleic?acid?sequence-based?amplification,NASBA)技术的肠道病原体快速检测技术,具体提供了一种诺如病毒实时等温扩增检测试剂盒及其一对引物和一条分子信标探针。所述试剂盒包括含有上述引物和探针的2×实时NASBA反应液、5×酶混合液及阳性对照模板、阴性对照和空白对照。所述引物和探针序列是序列编号为SEQ?ID?NO:1~3所示的序列,能特异性扩增和检测诺如病毒ORFs1基因片段。本发明专利技术的试剂盒具有快速、高效、敏感特异和实时检测分析等特点,可应用于临床和口岸的常规检测和疾病防控领域。????

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于实时核酸序列依赖性扩增(Nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)技术的肠道病原体快速检测技术。具体涉及诺如实时NASBA等温扩增快速检测试剂盒;还涉及所述试剂盒中使用的对于诺如病毒基因组具有特异性的引物对和分子信标探针。
技术介绍
诺如病毒(Norovirus,NV)又称诺瓦克样病毒,以诺瓦克病毒(Norwalk virus)为代表,是一种分布很广泛的,可导致成人和儿童急性胃肠炎的病毒,是除轮状病毒外引起腹泻的最主要的病毒病原,与食物、水源等的污染造成的急性胃肠炎暴发密切相关。诺如病毒基因组是单股正链RNA,全长7642nt,包括3个开放阅读框(open reading frames,ORFs)ORFs1、ORFs2和ORFs3。ORFs1编码保守的具有RNA多聚酶活性的非结构蛋白;ORFs2编码分子量约为56Kda的衣壳蛋白;ORFs3编码一种分子量约为22.5Kda的强碱性微小结构蛋白,部分区域与衣壳蛋白发生交互作用,共同形成衣壳。尽管诺如病毒引起的急性胃肠炎症状(呕吐、腹泻和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诺如病毒检测用引物,其特征在于,包括正向引物F1和反向引物R1,所述正向引物F1和所述反向引物R1的碱基序列表示如下:正向引物F1:5’?TGGAAYTCCATYGCCCACTG?3’;反向引物R1:5’?AATTCTAATACGACTCACTATAGGGGTRCTNACAATYTCATCATCACC?3’。

【技术特征摘要】
1.一种诺如病毒检测用引物,其特征在于,包括正向引物F1和反向引物R1,所述正向引物F1和所述反向引物R1的碱基序列表示如下:
正向引物F1:5’-TGGAAYTCCATYGCCCACTG-3’;
反向引物R1:
5’-AATTCTAATACGACTCACTATAGGGGTRCTNACAATYTCATCATCACC-3’。
2.根据权利要求1所述的一种诺如病毒检测用引物,其特征在于:所述反向引物R1的5’端的25个碱基是增加的T7噬菌体启动子序列,而3’端23个碱基是与诺如病毒ORFs1互补的特异性序列,所述正向引物F1和所述反向引物R1的3’端的病毒核酸变异位点使用简并碱基。
3.一条诺如病毒检测用分子信标探针,其特征在于,所述分子信标探针的碱基序列表示如下:
分子信标探针P1:
5’-ROX-CCGAGCTGTGCVCTBTCYGARRTBACGCTCGG-DABCYL-3’,
所述分子信标探针P1在其寡核苷酸DNA分子的5’端标记荧光报告基团ROX,3’端标记荧光淬灭基团DABCYL。
4.根据权利要求3所述的一条诺如病毒检测用分子信标探针,其特征在于:所述分子信标探针P1的5’端和3’端的...

【专利技术属性】
技术研发人员:莫秋华冯子力李卫岗杨泽林继灿刘志明杜坚
申请(专利权)人:珠海国际旅行卫生保健中心
类型:发明
国别省市:

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