In some embodiments, the present invention generally relates to a composition comprising a single reaction mixture comprising a plurality of discrete carrier groups and a plurality of different target nucleic acid groups. The single reaction mixture may contain the first bead bead group; second groups; the first group of target nucleic acid, wherein at least two different nucleic acid targets of the first group of target nucleic acids can bind to the first group of beads beads; and second nucleic acid target groups, at least two different nucleic acid targets of the in the second groups of target nucleic acids can bind to the second groups of bead bead. The single reaction mixture may be used to amplify the first target nucleic acid on the first bead, and to amplify the second target nucleic acid on the second beads.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
本申请要求2014年6月13日提交的美国临时申请第62/012,213号和2015年2月6日提交的美国临时申请第62/113,257号的优先权，所述临时申请中的每一者以全文引用的方式并入本文中。在本申请通篇，引用各种公开、专利和/或专利申请。所述公开、专利和/或专利申请的公开内容在此以全文引用的方式并入本申请中以便更充分地描述本专利技术所涉及的目前最先进的水平。许多核酸分析平台，包括“下一代测序(NGS)”、PCR和/或遗传分析平台，利用与一个或多个单克隆扩增子连接的珠粒或单一表面(例如，阵列)(例如，模板化珠粒或模板化阵列)。这些模板化珠粒和/或阵列典型地经由基于扩增的方法产生。举例来说，模板化珠粒可以使用如乳液PCR的方法形成，所述乳液PCR采用油包水乳液。此类型的乳液形成众多彼此由油相分隔的水性微液滴。理想地，微液滴含有单一模板核酸和一个珠粒，以及酶、核苷酸和用于执行核酸扩增反应的其它试剂。每个微液滴充当单独隔室，在所述隔室内进行克隆扩增。当此类微液滴在适合扩增条件下孵育时，个别微液滴产生一个连接到模板核酸的单克隆扩增子的珠粒。以其它方法，核酸模板可以与珠粒混合并且克隆地扩增到珠粒上而不需要乳液。参看例如，美国序列号13/328,844(美国专利公开第20120156728号)和13/842,296(美国专利公开第20130225421号)，以全文引用的方式并入本文中。然而，此类方法典型地需要对模板核酸和珠粒的相对浓度进行紧密控制的稀释和/或小心的调节以便稀释核酸分子的数目，以使得仅一个模板核酸分子扩增到任何既定珠粒上。这实现起来可能具挑战性。...
【技术保护点】
一种核酸合成方法，其包含：a)提供含有以下的单一反应混合物：第一类型的多个珠粒，所述第一类型的所述珠粒包括第一捕获引物；第二类型的多个珠粒，所述第二类型的所述珠粒包括第二捕获引物，其中所述第一与第二捕获引物不同；第一靶核酸群体，其中所述第一群体包括至少一个结合到所述第一捕获引物的第一类型的靶核酸；第二靶核酸群体，其中所述第二群体包括至少一个结合到所述第二捕获引物的第二类型的靶核酸；b)通过扩增所述第一群体的一个或多个靶核酸来形成第一扩增核酸群体，其中所述第一扩增群体连接到所述第一类型的一个或多个珠粒；以及c)通过扩增所述第二靶核酸群体的一个或多个靶序列来形成第二扩增核酸群体，其中所述第二扩增群体连接到所述第二类型的一个或多个珠粒。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.13 US 62/012,213;2015.02.06 US 62/113,2571.一种核酸合成方法，其包含：a)提供含有以下的单一反应混合物：第一类型的多个珠粒，所述第一类型的所述珠粒包括第一捕获引物；第二类型的多个珠粒，所述第二类型的所述珠粒包括第二捕获引物，其中所述第一与第二捕获引物不同；第一靶核酸群体，其中所述第一群体包括至少一个结合到所述第一捕获引物的第一类型的靶核酸；第二靶核酸群体，其中所述第二群体包括至少一个结合到所述第二捕获引物的第二类型的靶核酸；b)通过扩增所述第一群体的一个或多个靶核酸来形成第一扩增核酸群体，其中所述第一扩增群体连接到所述第一类型的一个或多个珠粒；以及c)通过扩增所述第二靶核酸群体的一个或多个靶序列来形成第二扩增核酸群体，其中所述第二扩增群体连接到所述第二类型的一个或多个珠粒。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述形成所述第一扩增群体包括通过PCR扩增、等温扩增、滚环扩增或基于乳液的扩增来扩增所述第一靶序列。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述形成所述第二扩增群体包括通过PCR扩增、等温扩增、滚环扩增或基于乳液的扩增来扩增所述第二靶序列。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一扩增群体共价连接到所述第一类型的一个或多个珠粒。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二扩增群体共价连接到所述第二类型的一个或多个珠粒。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述单一反应混合物包括至少两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或更多种类型的珠粒，每种类型的珠粒包括不同类型的捕获引物。7.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含对所述第一扩增群体的一个或多个核酸和所述第二扩增群体的一个或多个核酸平行测序。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述测序包括检测一种或多种核苷酸掺入副产物。9.根据权利要求7所述的方法，其中所述测序包括检测氢离子或焦磷酸酯。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一与第二捕获引物以大致相同浓度存在。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述形成所述第一扩增群体包括使所述第一群体的至少一个靶序列与所述第一类型的珠粒上的第一捕获引物杂交；并且所述形成所述第二扩增群体包括使所述第二群体的至少一个靶序列与所述第二类型的珠粒上的第二捕获引物杂交。12.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括以模板依赖性方式延伸一个或多个第一和第二捕获引物。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一扩增群体大体上是单克隆的。14.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二扩增群体大体上是单克隆的。15.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一扩增群体、所述第二扩增群体或这两者大体上是单克隆的。16.一种单克隆地扩增第一靶核酸群体的第一靶序列和第二靶核酸群体的第一靶序列的方法，其包含：(a)提供单一反应混合物，所述单一反应混合物具有：多个第一类型的珠粒，所述珠粒包括第一捕获引物；多个第二类型的珠粒，所述珠粒包括第二捕获引物，其中所述第一与第二捕获引物不同；第一靶核酸群体，其中所述第一群体包括至少一个结合...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·朱恩，CY·李，B·里德，C·奥贝格费尔，D·德勒斯曼，A·罗森鲍姆，S·班森，A·布罗卡，S·高希，
申请(专利权)人：生命技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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