再水合缓冲溶液和方法技术

酸、1mM至200mM的量的2

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】再水合缓冲溶液和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年12月31日提交的美国临时申请第63/132,482号的权益，该美国临时申请以全文引用的方式并入本文。

技术介绍

[0003]生物和医疗研究日益转向用于增强生物研究和医学的核酸测序。例如，生物学家和动物学家正转向用以研究动物迁移、物种进化和性状来源的测序。医学团体正使用测序来研究疾病的起因、对药品的敏感性和感染的起因。因此，测序在生物学、治疗学、诊断学、法医学和研究的许多方面都具有广泛适用性。
[0004]然而，测序的使用会受到测定可用性、测序运行时间、准备时间和成本的限制。另外，质量测序在历史上一直是一种昂贵的过程，因此限制了其实践。
[0005]特别地，试剂溶液的运输和储存是昂贵的。此外，试剂溶液的组成可影响靶核酸的扩增。
附图说明
[0006]通过参考附图，可以更好地理解本公开，并且本公开的许多特征和优点对于本领域的技术人员而言变得显而易见。
[0007]图1包括示出用于扩增核酸的示例方法的方框流程图。
[0008]图2包括示例性测序系统的图示。
[0009]图3包括示例性系统的图示，该系统包括传感器阵列。
[0010]图4包括示例性传感器和相关的孔的图示。
[0011]图5包括用于制备测序装置的示例性方法的图示。
[0012]在不同的附图中使用相同的附图标记指示类似或相同的项。
具体实施方式
[0013]在一个示例中，再水合缓冲液用于再水合核苷酸以形成核苷酸溶液。可向核苷酸溶液中加入其它组分以形成可用于进行扩增反应的扩增溶液。这种扩增溶液在扩增靶核苷酸以形成单克隆群体中特别有用。在一个示例中，此类单克隆群体可在基质上或微孔中形成。
[0014]在一个示例中，再水合缓冲溶液可以是包含2
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[4
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(2
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羟乙基)哌嗪
‑1‑
基]乙磺酸(HEPES)、[2
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(甲基丙烯酰氧基)乙基]二甲基
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(3
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磺丙基)氢氧化铵(DMAPS)和三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)的水性溶液。任选地，再水合缓冲溶液可包含聚乙二醇(PEG)。在另一个示例中，它们的再水合缓冲溶液可以包含聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(TWEEN)。再水合核苷酸之后，可以向核苷酸溶液中加入另外的溶液以形成扩增溶液。特别地，扩增溶液可以包含酶、引物和稳定剂。
[0015]特别地，可用作再水合缓冲液或扩增溶液的试剂溶液是包含2
‑
[4
‑
(2
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羟乙基)哌
嗪
‑1‑
基]乙磺酸、[2
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(甲基丙烯酰氧基)乙基]二甲基
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(3
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磺丙基)氢氧化铵和三(羟甲基)氨基甲烷的水性溶液。当用作扩增溶液时，试剂溶液还可包含核苷酸、引物和酶。
[0016]例如，试剂溶液可以包含1mM至200mM的量，诸如10mM至100mM或10mM至50mM的量的2
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[4
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(2
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羟乙基)哌嗪
‑1‑
基]乙磺酸。试剂溶液可包含1mM至200mM，例如10mM至150mM或10mM至100mM的量的[2
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(甲基丙烯酰氧基)乙基]二甲基
‑
(3
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磺丙基)氢氧化铵。此外，试剂溶液可以包含1mM至100mM，诸如10mM至100mM或10mM至50mM的量的三(羟甲基)氨基甲烷。
[0017]在另一个示例中，试剂溶液可以包含聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(TWEEN)。例如，该聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯可以是聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯。在一个示例中，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯0.001体积％至0.5体积％的量，诸如0.01体积％至0.5体积％或0.05体积％至0.25体积％的量被包含。
[0018]在另一个示例中，试剂溶液可包含谷氨酸钾。例如，试剂溶液可以包含10mM至500mM的量的谷氨酸钾。例如，谷氨酸钾可以10mM至250mM，诸如50mM至250mM的量被包含。
[0019]在另一个示例中，试剂溶液包含聚乙二醇。例如，试剂溶液可包含0.1体积％至7体积％的量的聚乙二醇。例如，聚乙二醇可以为0.5体积％至6.1体积％，诸如0.9体积％至4体积％的量被包含。聚乙二醇可具有在10K至50K的范围内，诸如在10K至40K的范围内或在15K至40K的范围内的分子量。在一个具体示例中，试剂溶液包含不同分子量的聚乙二醇。例如，试剂溶液可包含分子量在10K至200K范围内的第一聚乙二醇和分子量在30K至50K范围内的第二聚乙二醇。
[0020]在另一个示例中，试剂溶液可以包含杀生物剂。例如，杀生物剂可包括甲基异噻唑啉酮或异噻唑啉酮。特别地，杀生物剂可以0.001体积％至0.1体积％的量被包含。
[0021]在另一个示例中，试剂溶液可以包含乙酸。例如，试剂溶液可以包含1mM至100mM，诸如1mM至50mM的量的乙酸。
[0022]在另一示例中，试剂溶液可以包含二硫苏糖醇。例如，试剂溶液可以包含0.1mM至20mM，诸如0.1mM至10mM或1mM至10mM的量的二硫苏糖醇。
[0023]在另一个示例中，试剂溶液可以包含海藻糖。例如，试剂溶液可以包含0.15体积％至20体积％的量，诸如0.1体积％至10体积％的量或1体积％至10体积％的量的海藻糖。
[0024]在另一个示例中，该溶液可以包含三磷酸腺苷。例如，试剂溶液可以包含0.1mM至50mM的量，诸如0.1mM至20mM或0.9mM至10mM的量的三磷酸腺苷。
[0025]在另一个示例中，试剂溶液可以包含乙酸镁。例如，试剂溶液可以包含0.1mM至20mM的量的乙酸镁。
[0026]任选地，试剂溶液还可以包含甲基纤维素。例如，试剂溶液可以包含0.01体积％至10体积％的量，诸如0.01体积％至5体积％或0.1体积％至2体积％的量的甲基纤维素。
[0027]在另一个示例中，试剂溶液可以包含1mM至200mM，诸如10mM至150mM或10mM至100mM的量的磷酸肌酸。
[0028]当形成扩增溶液时，试剂溶液可以包含核苷酸。例如，试剂溶液可以包含一定量的A、G、C和T核苷酸中的每一种或任选的通用或修饰的核苷酸。在一个示例中，核苷酸以0.1μM至100μM的量存在于试剂溶液中。在具体示例中，核苷酸以0.1μM至50μM，诸如0.5μM至100μM的量被包含。
[0029]试剂溶液还可包含引物。例如，这种引物可以与靶核苷酸上的位置互补。在一个示
例中，引物是具有10至100个碱基的多核苷酸。任选地，引物可以包含接头部分。例如，引物可以与生物素、链霉亲和素、中性亲和素或亲和素本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种试剂溶液，所述试剂溶液包括：水性溶液，所述水性溶液包含：1mM至200mM的量的2
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羟乙基)哌嗪
‑1‑
基]乙磺酸；1mM至200mM的量的[2
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(甲基丙烯酰氧基)乙基]二甲基
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(3
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磺丙基)氢氧化铵；和1mM至200mM的量的三(羟甲基)氨基甲烷。2.根据权利要求1所述的试剂溶液，其中所述2
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[4
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羟乙基)哌嗪
‑1‑
基]乙磺酸以10mM至100mM的量被包含。3.根据权利要求2所述的试剂溶液，其中所述2
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(2
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羟乙基)哌嗪
‑1‑
基]乙磺酸以10mM至50mM的量被包含。4.根据权利要求1至3中任一项所述的试剂溶液，其中所述[2
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(甲基丙烯酰氧基)乙基]二甲基
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(3
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磺丙基)氢氧化铵以10mM至150mM的量被包含。5.根据权利要求4所述的试剂溶液，其中所述[2
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(甲基丙烯酰氧基)乙基]二甲基
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(3
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磺丙基)氢氧化铵以10mM至100mM的量被包含。6.根据权利要求1至5中任一项所述的试剂溶液，其中所述三(羟甲基)氨基甲烷以1mM至100mM的量被包含。7.根据权利要求6所述的试剂溶液，其中所述三(羟甲基)氨基甲烷以10mM至100mM的量被包含。8.根据权利要求7所述的试剂溶液，其中所述三(羟甲基)氨基甲烷以10M至50M的量被包含。9.根据权利要求1至8中任一项所述的试剂溶液，所述试剂溶液还包含聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯。10.根据权利要求9所述的试剂溶液，其中所述聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯为聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯。11.根据权利要求9所述的试剂溶液，其中所述聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯以0.001体积％至0.5体积％的量被包含。12.根据权利要求11所述的试剂溶液，其中所述聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯以0.01体积％至0.5体积％的量被包含。13.根据权利要求12所述的试剂溶液，其中所述聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯以0.05体积％至0.25体积％的量被包含。14.根据权利要求1至13中任一项所述的试剂溶液，所述试剂溶液还包含10mM至500mM的量的谷氨酸钾。15.根据权利要求14所述的试剂溶液，其中所述谷氨酸钾以10mM至250mM的量被包含。16.根据权利要求15所述的试剂溶液，其中所述谷氨酸钾以50mM至250mM的量被包含。17.根据权利要求1至16中任一项所述的试剂溶液，所述试剂溶液还包含0.1体积％至7体积％的量的聚乙二醇。18.根据权利要求17所述的试剂溶液，其中所述聚乙二醇以0.5体积％至6体积％的量被包含。19.根据权利要求18所述的试剂溶液，其中所述聚乙二醇以0.9体积％至4体积％的量被包含。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的试剂溶液，其中所述聚乙二醇具有在10k至50k范围内的分子量。21.根据权利要求20所述的试剂溶液，其中所述聚乙二醇具有在10k至40k范围内的分子量。22.根据权利要求21所述的试剂溶液，其中所述聚乙二醇具有在15k至40k范围内的分子量。23.根据权利要求20所述的试剂溶液，其中所述聚乙二醇包含分子量在10k至29k范围内的第一聚乙二醇和分子量在30k至50k范围内的第二聚乙二醇。24.根据权利要求1至23中任一项所述的试剂溶液，所述试剂溶液还包含杀生物剂。25.根据权利要求24所述的试剂溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：生命技术公司，
类型：发明
国别省市：