【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】化学上确定的血清白蛋白替代物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年12月15日提交的美国临时申请号63/125,619的优先权权益,该临时申请的全部内容以引用方式并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请含有序列表,该序列表已经以ASCII格式电子提交,并且据此以引用方式整体并入。创建于2021年12月9日的所述ASCII副本命名为LT01526PCT_SL.txt并且大小为9,788字节。
技术介绍
[0005]白蛋白(一种分子量为约66,000道尔顿的单一多肽)是脊椎动物血清中最丰富的蛋白质。白蛋白用作细胞培养物的关键组分,并赋予扩增细胞有益的性质。然而,白蛋白也是细胞培养性能变化的主要来源。例如,白蛋白的化学组合物在不同批次之间有所不同,即使是来自单个制造商。白蛋白携带许多来自血液的物质,包括激素、维生素和酶,并且可能被对细胞有毒的组分(例如,过渡金属)或提高细胞活力的组分污染。所有这些污染物都会影响细胞培养物的活力,并导致生物研究中的不一致。另外,很难控制培养基组分与白蛋白之间的相互作用,并且白蛋白对培养基组分的螯合可能会限制它们对所培养的细胞的可及性。
[0006]鉴于前述情况,非常需要用于细胞培养基的化学上确定的白蛋白替代物,也需要用于含有白蛋白的细胞培养基中的化学上确定的培养基补充物,例如以挽救白蛋白诱导的毒性。本文提供了针对本领域中的这些和其他问题的解决方案。
技术实现思路
[0007]本文公开的实施方案总体上涉及包含白蛋白的化学上确 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种细胞培养基,所述细胞培养基包含具有超氧化物歧化酶活性和Cu+、Zn+螯合活性的肽。2.根据权利要求1所述的细胞培养基,其中所述肽是合成制备的。3.根据权利要求1或权利要求2所述的细胞培养基,其中所述肽包含至少4个氨基酸残基。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的细胞培养基,其中所述肽包含至少一个带负电荷的残基。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的细胞培养基,其中所述肽包含至少一个带正电荷的残基。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的细胞培养基,其中所述肽选自由DAHK(SEQ ID NO:1)、DTHK(SEQ ID NO:2)和EAHK(SEQID NO:7)组成的组。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的细胞培养基,其中所述肽以介于约50μg/mL和约100μg/ml之间的浓度存在。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的细胞培养基,其中所述培养基是无血清并且无白蛋白的。9.根据权利要求1
‑
8中任一项所述的细胞培养基,所述细胞培养基还包含超氧化物清除剂。10.根据权利要求9所述的细胞培养基,其中所述超氧化物清除剂包含含有(2,2,6,6
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四甲基
‑1‑
基)氧基或其变体的化合物或类黄酮。11.根据权利要求10所述的细胞培养基,其中所述超氧化物清除剂包含TEMPO、TEMPOL或它们的变体。12.根据权利要求9所述的细胞培养基,其中所述超氧化物清除剂包含不是细胞天然存在的化合物。13.根据权利要求9或权利要求10所述的细胞培养基,其中所述超氧化物清除剂包含Mito
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TEMPO。14.根据权利要求1
‑
13中任一项所述的细胞培养基,所述细胞培养基还包含维生素E或其类似物。15.根据权利要求14所述的细胞培养基,其中所述维生素E类似物包含6
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色原烷醇基团部分。16.根据权利要求14所述的细胞培养基,其中所述维生素E或其类似物或变体包括α
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生育酚、β
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生育酚、γ
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生育酚、δ
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生育酚、α
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生育三烯酚、β
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生育三烯酚、δ
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生育三烯酚、γ
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生育三烯酚、α
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生育酚琥珀酸酯、α
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生育酚单葡糖苷、γ
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生育酚N,N
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二甲基甘氨酸酯或它们的取代物、纯异构体、外消旋混合物和/或混合物。17.根据权利要求14所述的细胞培养基,其中所述维生素E类似物是水溶性的。18.根据权利要求15所述的细胞培养基,其中所述维生素E类似物包括6
‑
羟基
‑
2,5,7,8
‑
四甲基色满
‑2‑
羧酸。19.根据权利要求1
‑
18中任一项所述的细胞培养基,所述细胞培养基还包含过氧化氢还原试剂。20.根据权利要求19所述的细胞培养基,其中所述过氧化氢还原剂包括谷胱甘肽、N
‑
乙
酰半胱氨酸、半胱氨酸、亚硒酸钠、甘露醇、类黄酮、硫辛酸或它们的任何组合。21.根据权利要求1
‑
20中任一项所述的细胞培养基,所述细胞培养基还包含稳定剂分子。22.根据权利要求21所述的细胞培养基,其中所述稳定剂分子是海藻糖或甘露醇。23.根据权利要求1
‑
22中任一项所述的细胞培养基,其中所述细胞培养基包含平衡盐溶液、基础培养基和/或复合培养基中的至少一种。24.根据权利要求1
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23中任一项所述的细胞培养基,其中所述细胞培养基包含以下中的至少一种:盐水、磷酸盐缓冲盐水、杜尔贝科磷酸盐缓冲盐水、汉克平衡盐溶液、厄尔平衡盐溶液、MEM、Opti
‑
MEM、DMEM、CTS KnockOut DMEM、RPMI
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1640、IMDM、汉姆氏F12、F
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12K、F
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10、DMEM/F12、Neurobasal、麦考伊5A培养基、莱博维茨L
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15、培养基199、Neurobasal A、Brainphys、GMEM和/或威廉E培养基。25.一种细胞培养补充物,所述细胞培养补充物包含具有超氧化物歧化酶活性和Cu+、Zn+螯合活性的肽。26.根据权利要求25所述的细胞培养补充物,其中所述肽是合成制备的。27.根据权利要求25或权利要求26所述的细胞培养补充物,其中所述肽包含至少4个氨基酸残基。28.根据权利要求25
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27中任一项所述的细胞培养补充物,其中所述肽包含至少一个带负电荷的残基。29.根据权利要求21
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28中任一项所述的细胞培养补充物,其中所述肽包含至少一个带正电荷的残基。30.根据权利要求25
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29中任一项所述的细胞培养补充物,其中所述肽选自由DAHK(SEQ ID NO:1)和DTHK(SEQ ID NO:2)组成的组。31.根据权利要求25
‑
30中任一项所述的细胞培养补充物,所述细胞培养补充物还包含超氧化物清除剂。32.根据权利要求31所述的细胞培养补充物,其中所述超氧化物清除剂包含含有(2,2,6,6
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四甲基<...
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