The invention discloses a Vibrio cholerae loop mediated isothermal amplification kit and its application, the kit includes a LAMP primer, 2 * Bst reaction buffer, DNA polymerase, fluorescence visual detection reagent, ultra pure water and Vibrio cholerae DNA template; LAMP primer includes outer primers F3 and B3 primers and is FIP and BIP. Confirm the specificity of detection and sensitivity detection, LAMP detection reagent box provided by the invention can monitor the real-time response and can be used for quantitative detection of Vibrio cholerae, rapid and accurate detection results, bring convenience for simple and rapid detection of Vibrio cholerae.
【技术实现步骤摘要】
一种霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒及其应用
本专利技术涉及微生物检测
,具体说是涉及一种快速、可视化并且可实时定量检测霍乱弧菌的环介导等温扩增试剂盒及其应用。
技术介绍
弧菌属(Vibrio)中霍乱弧菌(V.cholerae)可引起一种烈性肠道传染病,发病急、传染性强、病死率高,属于国际检疫传染病。人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者,主要通过污染的水源或饮食物经口传染。在一定条件下,霍乱弧菌进入小肠后,依靠鞭毛的运动,穿过粘膜表面的粘液层,可能藉菌毛作用粘附于肠壁上皮细胞上,在肠粘膜表面迅速繁殖,经过短暂的潜伏期后便急骤发病。该菌不侵入肠上皮细胞和肠腺,也不侵入血流,仅在局部繁殖和产生霍乱肠毒素,此毒素作用于粘膜上皮细胞与肠腺使肠液过度分泌,从而患者出现上吐下泻,泻出物呈"米泔水样"并含大量弧菌,此为本病典型的特征。居住拥挤,卫生状况差,特别是公用水源是造成暴发流行的重要因素。人与人之间的直接传播不常见。在正常胃酸条件下,如以水为载体,需饮入大于1010个细菌方能引起感染;如以食物作为载体,由于食物高强度的缓冲能力,感染剂量可减少到102~104个细菌。任何能降低胃中酸度的药物或其他原因,都可使人对霍乱弧菌感染的敏感性增加。对霍乱弧菌进行快速检测,有利于临床上快速做出治疗应对措施,对食品进行霍乱弧菌检测,切除传染源,对保障公共卫生安全有重大意义。目前,霍乱弧菌的检测技术主要有常规方法和分子生物学方法。常规方法是通过对细菌的表型特征和生化指标进行鉴定。从样品中分离病原菌需要耗费大量的时间和相对苛刻的操作环境条件,且分离率低。鉴定霍乱弧菌的生化指标主要 ...
【技术保护点】
一种霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括LAMP引物、2×反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、荧光目视检测试剂、超纯水和霍乱弧菌DNA模板;所述的LAMP引物包括外引物F3与B3和内引物是FIP与BIP;其中以外引物F3和B3作为PCR诊断引物;其中引物的序列分别为:F3 CTGAAACCTTTGTTGCCGCB3 GCCCATAGAAAGAGTCGCTGFIP GGCAGGATGGTAACCCCTGAGTAAAGATCCAGGCCAAGTTCGBIP TTACCGATGAAGAAGTCGCCGCTTGGCTTCAACCACTTCAGT;所述的2×反应缓冲液包括Tris‑HCL、KCL、MgSO
【技术特征摘要】
1.一种霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括LAMP引物、2×反应缓冲液、BstDNA聚合酶、荧光目视检测试剂、超纯水和霍乱弧菌DNA模板;所述的LAMP引物包括外引物F3与B3和内引物是FIP与BIP;其中以外引物F3和B3作为PCR诊断引物;其中引物的序列分别为:F3CTGAAACCTTTGTTGCCGCB3GCCCATAGAAAGAGTCGCTGFIPGGCAGGATGGTAACCCCTGAGTAAAGATCCAGGCCAAGTTCGBIPTTACCGATGAAGAAGTCGCCGCTTGGCTTCAACCACTTCAGT;所述的2×反应缓冲液包括Tris-HCL、KCL、MgSO4、(NH4)2SO4、Tween20、Betaine和dNTPs。2.根据权利要求1所述的霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的霍乱弧菌DNA模板取自细菌基因组DNA提取试剂盒。3.根据权利要求1所述的霍乱弧菌环介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的荧光目视检测试剂采用钙黄绿素荧光试剂,荧光试剂在反应前加入。4.根据权利要求1所述的霍乱弧菌环介导等温扩增...
【专利技术属性】
技术研发人员:冯世文,李军,潘艳,彭昊,陈泽祥,胡帅,杨威,钟舒红,马春霞,陶立,许力干,柳锋,谢永平,
申请(专利权)人:广西壮族自治区兽医研究所,
类型:发明
国别省市:广西,45
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