一种用于禽流感病毒检测的引物组合物及应用制造技术

本发明专利技术属于生物制品技术领域，提供了一种用于禽流感病毒检测的引物组合物及应用。本发明专利技术所述引物组用于对H5、H7和H9这3种亚型的禽流感病毒进行一管式三重荧光RT‑LAMP检测，其中FIP和FD的序列互补配对、淬灭基团和荧光基团分别标记在FIP‑Q的5’端和FD的3’端，FIP‑Q和FD经退火形成复合探针FIP‑FD，在RT‑LAMP扩增过程中，FD脱落并释放荧光信号，最终可以通过荧光颜色直观地判读检测结果及阳性来源。本发明专利技术建立的三重荧光RT‑LAMP方法经优化后受样品干扰小，检测操作简便快速，检测结果特异性和敏感性很高，非常适合用于AIV的现场检测，为禽流感病毒的检测提供有力的技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制品，具体涉及一种可以同时对禽流感病毒的h 5、h 7和h 9这3种亚型进行三重lamp检测的引物组合物及其检测方法，尤其是一种rt-lamp荧光的可视化联合检测。

技术介绍

1、禽流感(ai)是由禽流感病毒(avian influenza virus，aiv)引起的一种急性人兽共患传染病。aiv属于正粘病毒科a型流感病毒属，基因组为分节段单股负链rna。根据病毒表面蛋白血凝素(hemagglutnin，ha)(包括h5、h7和h9)和神经氨酸酶(neuaminidasa，na)的不同，可分为18种ha亚型和11种na亚型。其中，ha的编码基因是aiv基因组中变异率最大的一个片段，不同亚型病毒以及同一亚型不同毒株间有很大差异。根据禽流感病毒致病性将其分为高致病性禽流感病毒和低致病性禽流感病毒。高致病性禽流感病毒被世界动物卫生组织(oie)列为法定通报传染病，我国将其列为一类动物疫病。高致病性禽流感以h5和h7亚型为主，发病率和病死率高，还可以直接感染人导致死亡。目前低致病性禽流感病毒主要是以h9亚型为主，在我国范围内广泛存在，可以造成家禽本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种引物组合物，用于对3种亚型的禽流感病毒进行多重RT-LAMP检测，包括：用于检测H5亚型禽流感病毒的外引物H5-F3、H5-B3，内引物H5-FIP、H5-BIP，环引物H5-Floop、H5-Bloop和探针H5-FD，核苷酸序列依次为序列表中SEQ ID NO:1-7所示；用于检测H7亚型禽流感病毒的外引物H7-F3、H7-B3，内引物H7-FIP、H7-BIP，环引物H7-Floop、H7-Bloop和探针H7-FD，核苷酸序列依次为序列表中SEQ ID NO:8-14所示；用于检测H9亚型禽流感病毒的外引物H9-F3、H9-B3，内引物H9-FIP、H9-BIP，环引物H...

【技术特征摘要】

1.一种引物组合物，用于对3种亚型的禽流感病毒进行多重rt-lamp检测，包括：用于检测h5亚型禽流感病毒的外引物h5-f3、h5-b3，内引物h5-fip、h5-bip，环引物h5-floop、h5-bloop和探针h5-fd，核苷酸序列依次为序列表中seq id no:1-7所示；用于检测h7亚型禽流感病毒的外引物h7-f3、h7-b3，内引物h7-fip、h7-bip，环引物h7-floop、h7-bloop和探针h7-fd，核苷酸序列依次为序列表中seq id no:8-14所示；用于检测h9亚型禽流感病毒的外引物h9-f3、h9-b3，内引物h9-fip、h9-bip，环引物h9-floop、h9-bloop和探针h9-fd，核苷酸序列依次为序列表中seq id no:15-21所示；以及

2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于：所述引物组合物的序列，与对应seqid no:1-21所示的序列相比，分别具有不超过5个核苷酸的置换、缺失或添加，或者分别具有80％-99.99％的序列同一性，且与seq id no:1-21的序列具有相同功能；以及，

3.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于：所述引物h5-fip核苷酸序列的5’端标记有淬灭基团bhq1，所述探针h5-fd核苷酸序列的3’端标记荧光基团为fam；所述引物h7-fip核苷酸序列的5’端标记有淬灭基团bhq3，所述探针h7-fd核苷酸序列的3’端标记荧光基团为cy5；所述引物h9-fip核苷酸序列的5’端标记有淬灭基团bhq2，所述探针h9-fd核苷酸序列的3’端标记荧光基团为cy3。

4.根据权利要求2所述的引物组合物，其特征在于：所述引物h5-fip和所述探针h5-fd经退火形成复合探针h5-fip-fd；所述引物h7...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，范晴，韦悠，李小凤，李丹，罗思思，李孟，谢丽基，张艳芳，谢志勤，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：